商雪珂，楊曉君，楊冬梅，敬磊，趙得秀

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052）

復(fù)合紅花籽油（Complex Safflower Seed Oil，CSSO）由紅花籽油和亞麻籽油提取物按照3:2 的比例復(fù)配而得。其中亞麻籽油富含亞麻酸（Linolenic Acid）、亞油酸（Linoleic Acid，LA）和油酸（Olenic Acid，OA）等不飽和脂肪酸，尤其富含α-亞麻酸（α-Linolenic Acid，ALA），其含量達(dá)50% 以上，是ω-3 多不飽和脂肪酸（ω-3 Polyunsaturated Fatty Acids，ω-3 PUFA）的主要植物來源[1]。紅花籽油也富含不飽和脂肪酸，在已知作物中，其亞油酸含量可達(dá)73%～85%，被譽(yù)為“亞油酸之王”[2]。α-亞麻酸和亞油酸均為人體必需脂肪酸，具有調(diào)節(jié)血脂血糖、抗血栓、抗炎、抗癌及改善眼睛疾病等功能[3-8]。

吸收是影響口服藥物生物利用度的主要環(huán)節(jié)，小腸是藥物吸收的主要場所[9]，且腸道是脂肪酸吸收的主要場所[10]，課題組前期通過體外模型（外翻腸囊法）對(duì)CSSO 的腸吸收部位進(jìn)行了研究，結(jié)果表明LA 和ALA 在十二指腸腸段吸收較好[11]，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故本實(shí)驗(yàn)將以十二指腸為主要吸收腸段來考察CSSO 的吸收情況。腸襻法是將含有一定藥物濃度的人工腸液注入腸襻中，經(jīng)過一定時(shí)間后取出腸襻，收集腸襻液，測定藥物剩余量計(jì)算吸收參數(shù)，進(jìn)而了解藥物的吸收情況。采用腸襻法研究藥物吸收，未切斷血管和神經(jīng)，不沖洗腸道，破壞腸道菌群，使整個(gè)生理狀態(tài)更接近自然給藥，可以更真實(shí)、全面的反映藥物在腸道的吸收代謝情況。藥代動(dòng)力學(xué)是口服給藥后，于不同時(shí)間點(diǎn)采集血液，分離血清（血漿）后，測定其中主要組分的含量，以此來評(píng)價(jià)藥物的吸收情況。

口服藥物的吸收特性無法使用單一方法或模型來判斷[13]，因此，本實(shí)驗(yàn)以CSSO 為受試物，以LA 和ALA 為目標(biāo)成分，建立大鼠腸襻吸收模型結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)，考察藥物濃度、pH 值條件、吸收促進(jìn)劑對(duì)藥物吸收的影響，以闡明其吸收特性以及CSSO 在動(dòng)物體內(nèi)的吸收速度與程度，為后續(xù)藥物研究及制劑開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD 大鼠（200±20 g），均購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（新）2018-0002），于新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所飼養(yǎng)，溫度20～25 ℃，濕度50%～60%，自由攝食及飲水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查批準(zhǔn)號(hào)為XJIMM-2019004。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

AL204 電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司；TGL-16M 冷凍離心機(jī)，湖南湘鑫儀器儀表有限公司；SF-TDL-40D 離心機(jī)，上海菲恰爾分析儀器股份有限公司；PHS-3G 型pH 計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

復(fù)合紅花籽油，實(shí)驗(yàn)室自制；正己烷（色譜純），天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；乙腈（色譜純），天津市鑫鉑特化工有限公司；鹽酸維拉帕米，北京索萊寶科技有限公司；殼聚糖，北京索萊寶科技有限公司；脫氧膽酸鈉，北京索萊寶科技有限公司；羧甲基纖維素鈉，上海山浦化工有限公司；Krebs-Ringer's緩沖液，武漢普諾賽生命科技有限公司。

1.4 藥液的配制

1.4.1 在體腸吸收溶液配制

在體腸吸收藥物濃度參考文獻(xiàn)[14,15]，并根據(jù)《中國居民膳食指南》（2022）中建議成年人每天攝入烹調(diào)油25～30 g[16]，故CSSO 用0.5% CMC-Na 溶液和Krebs-Ringer,s 緩沖溶液配置為低（13.02 mg/mL）、中（26.04 mg/mL）、高（52.08 mg/mL）梯度質(zhì)量濃度。

1.4.2 藥代動(dòng)力學(xué)溶液配制

根據(jù)《藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（2014 年5 月）[17]及《中國居民膳食指南》（2022）中建議成年人每天攝入烹調(diào)油25～30 g[16]，按照人與大鼠劑量換算，故大鼠給藥劑量為低（1.302 g/kg）、中（2.604 g/kg）和高（5.208 g/kg），給藥質(zhì)量濃度為0.13、0.26、0.52 g/mL（用0.5%CMC-Na 溶液配置）。

1.5 腸襻吸收實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[18]，取實(shí)驗(yàn)前禁食18 h（自由飲水）的SD 雌性大鼠，隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組、復(fù)合紅花籽油組，每組6 只，麻醉后固定，沿腹中線打開腹腔，暴露腸段，結(jié)扎十二指腸腸段（距幽門1～10 cm 處）。用注射器將含有一定濃度的藥液注入腸襻中，將腸襻放回腹腔，覆蓋37 ℃生理鹽水浸濕的紗布，保持體溫37 ℃，2 h 后剪下腸襻，將腸內(nèi)容物完全轉(zhuǎn)移至10 mL 棕色容量瓶，用Krebs-Ringer's 溶液少量多次沖洗腸襻內(nèi)部腸腔，洗滌液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，并用Krebs-Ringer's 溶液定容至10 mL，樣品前處理后，進(jìn)行HPLC 檢測。

1.6 藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

按照體質(zhì)量，隨機(jī)分為高、中、低三個(gè)給藥劑量組，每組3 只大鼠，均為雄性。采用單次灌胃給藥，給藥前禁食不禁水16 h。給藥前每只大鼠分別取空白血0.5 mL 后，以給藥體積為10 mL/kg，灌胃以不同劑量CSSO（1.302、2.604 和5.208 g/kg）。分別在給藥后1、2、3、4、6、8、10、12、24 h 于眼眶靜脈叢取血500 μL 于1.5 mL EP 管中，3 000 r/min離心15 min，取上層血清，于-80 ℃保存?zhèn)溆?。按?.2.2”及“2.2.3”項(xiàng)下方法前處理并測定ALA 和LA 濃度。

1.7 樣品前處理及檢測方法

1.7.1 腸收集液樣品前處理

參考文獻(xiàn)[11]，將收集液轉(zhuǎn)移至20 mL 離心管中，-4 ℃，3 000 r/min，冷凍離心15 min 后，吸取上清液置另一離心管中，加1/2 上清液的正己烷，以每分鐘75次的頻率室溫振蕩10 min后，冷凍離心，取正己烷層用0.25 μm 有機(jī)濾膜過濾后，測定其中ALA 和LA 的含量。

1.7.2 血清樣品前處理

參考文獻(xiàn)并優(yōu)化[19]，取血清200 μL 于5 mL 離心管中，加入1.5 mL 乙腈，振搖5 min 后，離心10 min（3 000 r/min）后取上清，氮?dú)獯蹈桑? mL 甲醇復(fù)溶后上機(jī)檢測。

1.7.3 檢測方法

Agilent 1260 液相色譜儀，紫外檢測器，波長203 nm，色譜柱Thermo Tris C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30 ℃，流動(dòng)相：乙腈 : 水=80:20（V/V）。

1.8 CSSO 中ALA 和LA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制0.5、1、2、5、10、25、50、100 mg/mL 梯度質(zhì)量濃度的ALA 和LA 標(biāo)準(zhǔn)溶液后，按2.4 項(xiàng)下“樣本的預(yù)處理及檢測條件”進(jìn)行HPLC 檢測，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1 和圖2 所示，ALA 的線性方程為y=57.111x+21.975（R2=0.999 8），LA 的線性方程為y=30.062x+13.071（R2=0.999 9），R2均＞0.999，表明ALA 和LA 的線性符合要求。

圖1 CSSO中ALA的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of ALA in compound safflower seed oil

圖2 CSSO中LA的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of LA in compound safflower seed oil

圖3 CSSO中ALA和LA的部分HPLC檢測圖譜Fig.3 Partial HPLC detection map of ALA and LA in compound safflower seed oil

1.9 數(shù)據(jù)分析

1.9.1 在體腸吸收參數(shù)計(jì)算及數(shù)據(jù)處理

腸收集液中ALA 和LA 吸收參數(shù)用Excel 進(jìn)行計(jì)算，并用IBM SPSS Statistics 26 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，文中數(shù)據(jù)均以“x±s”表示。在體腸吸收計(jì)算公式如下[20,21]：

式中：

M——吸收藥量，mg；

B——累計(jì)吸收率，%；

Ka——吸收速率常數(shù)，h-1；

t1/2——吸收半衰期，h；

C0——加入腸襻內(nèi)藥物溶液初始質(zhì)量濃度，mg/mL；

V0——加入腸襻內(nèi)藥物溶液體積，mL；

Ct——試驗(yàn)結(jié)束后腸收集液中藥物溶液質(zhì)量濃度，mg/mL；

Vt——試驗(yàn)結(jié)束后腸收集液總體積，mL；

t——時(shí)間，h。

1.9.2 藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)處理

不同時(shí)間CSSO 中ALA 和LA 濃度用IBM SPSS Statistics 26 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)采用DAS 2.0 進(jìn)行分析，利用Graph pad 8.0.2 作血藥濃度-時(shí)間曲線圖，文中數(shù)據(jù)均以“x±s”表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 在體腸吸收部分

2.1.1 CSSO 質(zhì)量濃度依賴性考察

按“2.2”項(xiàng)下建立大鼠腸襻吸收模型，用0.5% CMC-Na 溶液配制為高（52.08 mg/mL）、中（26.04 mg/mL）、低（13.02 mg/mL）三種藥物質(zhì)量濃度進(jìn)行試驗(yàn)，120 min 時(shí)取下腸襻，取出腸收集液后，按“2.4”項(xiàng)下進(jìn)行樣品前處理及HPLC 檢測。吸收參數(shù)結(jié)果見表1。

表1 不同質(zhì)量濃度CSSO中ALA和LA的吸收參數(shù)Table 1 Absorption parameters of ALA and LA in different concentrations of CSSO (n=6,x±s )

由表1 可見，隨著CSSO 質(zhì)量濃度的升高，ALA和LA 的M隨之增加，高質(zhì)量濃度時(shí)吸收量最大（ALA：23.77 mg；LA：42.27 mg），組間均有顯著性差異（P＜0.05），說明藥物質(zhì)量濃度對(duì)CSSO 的吸收有一定影響；同時(shí)，隨著CSSO 質(zhì)量濃度的升高，ALA 和LA 的B均隨著質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，其中高質(zhì)量濃度吸收率最高（ALA：94.92%；LA：91.89%），低質(zhì)量濃度次之（ALA：91.33%；LA：90.20%），中質(zhì)量濃度最低（ALA：93.21%；LA：87.23%），組間無顯著性差異（P＞0.05），其中高質(zhì)量濃度的吸收率最高，無高質(zhì)量濃度飽和現(xiàn)象，提示CSSO 的吸收具有質(zhì)量濃度依賴性[22]。綜上所述，在試驗(yàn)120 min 內(nèi)高質(zhì)量濃度的CSSO的吸收最好，故后續(xù)試驗(yàn)選擇高質(zhì)量濃度CSSO（52.08 mg/mL）為受試藥物質(zhì)量濃度。

Ka和t1/2均隨著質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)下降趨勢，但各組間均無顯著性差異（P＞0.05），提示CSSO 在大鼠十二指腸腸段的吸收無自身質(zhì)量濃度抑制，轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制可能為被動(dòng)擴(kuò)散[23]。有研究表明，當(dāng)腸腔濃度高于腸上皮細(xì)胞濃度時(shí)主要通過擴(kuò)散的方式進(jìn)行吸收跨膜，當(dāng)腸腔濃度較低時(shí)，其吸收主要通過轉(zhuǎn)運(yùn)酶類介導(dǎo)[24]。因此，在此實(shí)驗(yàn)藥物質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（13.02～52.08 mg/mL）M未出現(xiàn)飽和現(xiàn)象可能是由于腸腔濃度高于腸上皮細(xì)胞，轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制為被動(dòng)擴(kuò)散[25,26]。

2.1.2 CSSO 的pH 值條件依賴性考察

采用高質(zhì)量濃度CSSO（52.08 mg/mL）進(jìn)行pH 值條件依賴性實(shí)驗(yàn)。按“2.2”項(xiàng)下建立大鼠腸襻吸收模型，將藥物溶液pH 值調(diào)至4.0、6.0、8.0進(jìn)行試驗(yàn)，120 min 時(shí)取下腸襻，取出腸收集液后，按“2.4”項(xiàng)下進(jìn)行樣品前處理及HPLC 檢測。吸收參數(shù)結(jié)果見表2。

表2 不同pH值條件下CSSO中ALA和LA的吸收參數(shù)Table 2 Absorption parameters of ALA and LA in CSSO at different pH values (n=6,x±s )

由表2 可見，隨著CSSO 溶液pH 值的變化，ALA 和LA 的B和M均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，其中，pH 值為8.0 時(shí)吸收量（ALA：24.19 mg；LA：43.38 mg）和吸收率（ALA：96.59%；LA：94.29%）最高，組間均無顯著性差異（P＞0.05），說明pH 值為8.0 時(shí)CSSO 的吸收情況較好，提示在酸性條件下CSSO 的吸收較差，弱堿性環(huán)境時(shí)CSSO 主要以分子形式存在，易于藥物的吸收[27]，故后續(xù)試驗(yàn)將藥物溶液酸堿條件調(diào)至pH 值為8.0。

隨著藥液pH 值的增加，CSSO 中ALA 的Ka呈先升高后緩慢降低的趨勢，其中，pH 值 6.0（1.98 h-1）≈pH 值 8.0（1.93 h-1）＞pH 值 4.0（1.68 h-1），組間均無顯著性差異（P＞0.05）；CSSO 中LA 的Ka隨著pH 值的升高逐漸增加，pH 值為8.0 時(shí)最大（1.73 h-1），說明藥物溶液的pH 值條件會(huì)影響CSSO 的吸收。其次，CSSO 中ALA 和LA 的t1/2均呈現(xiàn)下降趨勢，其中LA 的t1/2呈線性變化，但其組間均無顯著性差異（P＞0.05），說明pH 值條件為8.0時(shí)CSSO 吸收較快。

2.1.3 吸收促進(jìn)劑對(duì)CSSO 吸收的影響

采用高質(zhì)量濃度CSSO（52.08 mg/mL，pH 值為8.0）進(jìn)行吸收促進(jìn)劑對(duì)吸收影響的考察。按“2.2”項(xiàng)下建立大鼠腸襻吸收模型，含藥溶液中加入鹽酸維拉帕米（50 μg/mL）、殼聚糖（5 mg/mL）、膽酸鈉（1 mg/mL）進(jìn)行試驗(yàn)，120 min 時(shí)取下腸襻，取出腸收集液后，按“2.4”項(xiàng)下進(jìn)行樣品前處理及HPLC 檢測。吸收參數(shù)結(jié)果見表3。

表3 添加吸收促進(jìn)劑的CSSO中ALA和LA的吸收參數(shù)Table 3 Absorption parameters of ALA and LA in CSSO with absorption enhancers (n=6, )

表3 添加吸收促進(jìn)劑的CSSO中ALA和LA的吸收參數(shù)Table 3 Absorption parameters of ALA and LA in CSSO with absorption enhancers (n=6, )

由表3 可見，CSSO 添加吸收促進(jìn)劑后，各組ALA 和LA 的P與M均低于空白組（ALA：94.49%，23.66 mg；LA：88.56%，40.74 mg），且無顯著性差異（P＞0.05），各吸收促進(jìn)劑組Ka均低于空白組（ALA：1.61 h-1；LA：1.22 h-1），但無顯著性差異（P＞0.05），CSSO 中ALA 和LA 均為脂溶性較好的成分，殼聚糖和膽酸鹽均能提高藥物脂溶性，從而使藥物吸收量增加[28]，推測CSSO 不受吸收促進(jìn)劑的影響且不是P-gp 的底物，后續(xù)將通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察CSSO 的吸收是否受P-gp介導(dǎo)。

2.2 藥代動(dòng)力學(xué)部分

由圖4 和表4 可見，各劑量組ALA 的Tmax均為2.33 h，說明在此實(shí)驗(yàn)給藥劑量（1.302 g/kg、2.604 g/kg 和5.208 g/kg）對(duì)ALA 吸收的速度影響不大，其中高劑量ALA 出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象，在2 h 時(shí)，ALA 質(zhì)量濃度為2.72 mg/mL，4 h 時(shí)，ALA 質(zhì)量濃度為2.67 mg/mL；ALA 的AUC（0-t）隨著藥物劑量的升高而增加，高劑量最高[18 565.72 mg/(L·h)]，中劑量次之[14 209.78 mg/(L·h)]，低劑量最小[4 321.11 mg/(L·h)]，提示高劑量CSSO 中ALA 生物利用度較高；由ALA 的Cmax可見，從高到低順序?yàn)椋褐袆┝浚靖邉┝浚镜蛣┝?，提示中劑量CSSO中ALA 的吸收程度較好；由ALA 的t1/2z可見，高劑量半衰期最短（1.76 h），低劑量次之（3.44 h），中劑量半衰期最長（4.84 h），提示高劑量CSSO 中ALA 在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)消除速度最快。

表4 CSSO中ALA在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)Table 4 Pharmacokinetic statistical moment parameters of ALA in CSSO in rats ()

表4 CSSO中ALA在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)Table 4 Pharmacokinetic statistical moment parameters of ALA in CSSO in rats ()

圖4 不同給藥劑量CSSO中ALA藥-時(shí)曲線Fig.4 ALA drug-time curves in CSSO at different doses

由圖5 和表5 可見，低劑量組Tmax為1.33 h，中、高劑量組Tmax均為2.33 h，說明低劑量吸收較其余組快，其中高劑量LA 質(zhì)量濃度出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象，在2 h 時(shí)，LA 質(zhì)量濃度為10.94 mg/mL，4 h 時(shí)，LA 質(zhì)量濃度為10.18 mg/mL；各劑量組AUC(0-t)的高低順序?yàn)椋褐袆┝浚靖邉┝浚镜蛣┝?，故中劑量CSSO 中LA 的生物利用度較高；由ALA 的Cmax可見，中劑量最高（16.59 mg/mL），高劑量次之（10.94 mg/mL），低劑量最低（6.98 mg/mL），提示中劑量CSSO 中LA 的吸收程度較好；由t1/2z可見，中劑量的消除速度最慢（12.65 h），低劑量消除速度較快（9.58 h），高劑量次之（8.64 h），提示低劑量CSSO 中LA 在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)消除速度較快。

表5 CSSO中LA在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)Table 5 Pharmacokinetic statistical moment parameters of LA in rats in CSSO ()

表5 CSSO中LA在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)Table 5 Pharmacokinetic statistical moment parameters of LA in rats in CSSO ()

圖5 不同給藥劑量CSSO中LA藥-時(shí)曲線Fig.5 LA drug-time curves in CSSO at different doses

綜上所述，中劑量CSSO 中ALA 和LA 的Cmax均最高，高劑量CSSO 中ALA 和LA 的血藥質(zhì)量濃度均出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[29]，提示高劑量藥物溶液在小腸停留時(shí)間長，在胃腸道內(nèi)吸收有快有慢，或存在肝腸循環(huán)[30]。LA 和ALA 均屬于內(nèi)源性成分，藥物含量過高時(shí)可能在分布到各組織后，經(jīng)肝腸循環(huán)出現(xiàn)二次釋放入血，導(dǎo)致血藥質(zhì)量濃度二次升高至Cmax附近，且CSSO 吸收較快，在1.33～2.33 h 可達(dá)到最大血藥濃度。CSSO 中ALA 的生物利用度與劑量呈正相關(guān)，其中高劑量組中ALA 生物利用度較高，中劑量組中LA 生物利用度較高，高劑量中ALA 吸收速度較快，低劑量中LA 的吸收速度較快[31]。有文獻(xiàn)報(bào)道，LA 的達(dá)峰時(shí)間為3.83 h，ALA 的達(dá)峰時(shí)間為4.53 h[32,33]，均高于本實(shí)驗(yàn)CSSO 的達(dá)峰時(shí)間，表明CSSO 的復(fù)配能夠使ALA 和LA 在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)更快的發(fā)揮作用。由ALA 和LA 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可知，LA 的Cmax、AUC、t1/2z均大于ALA 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，且差異較大，可能是由于在大鼠血清中LA 的質(zhì)量濃度本就較高所致[32]。

3 結(jié)論

由在體腸吸收實(shí)驗(yàn)可以得出：高質(zhì)量濃度且pH值8.0 時(shí)CSSO 吸收較好，吸收促進(jìn)劑對(duì)CSSO 吸收無影響，因此，推測CSSO 在大鼠十二指腸腸段可能的吸收機(jī)制以被動(dòng)擴(kuò)散為主，具有質(zhì)量濃度依賴性，CSSO 在偏堿性條件下較易吸收，可能不是P-gp 的底物。由藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)可以得出：CSSO吸收速度較快，在1～2 h 即可達(dá)到峰質(zhì)量濃度，在2.604～5.208 g/kg 內(nèi)生物利用度較高，中劑量CSSO吸收程度較好。口服藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)特性與機(jī)制不能僅用一或兩種方法確定，應(yīng)采用多種方法或模型進(jìn)行綜合性的考察時(shí)結(jié)論更可靠，本實(shí)驗(yàn)為后續(xù)的研究工作提供數(shù)據(jù)支持，更全面的解釋CSSO 的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。