郭童童　李鴻飛　郭熙英　劉俊昌

【摘 要】目的：對(duì)膝痹膏皮膚用藥的安全性進(jìn)行探討。方法：以兔、豚鼠為模型進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，分別觀察膝痹膏對(duì)家兔完整皮膚組和破損皮膚組的刺激反應(yīng)，并進(jìn)行豚鼠的皮膚過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：膝痹膏外用對(duì)兔的完整或破損皮膚均無(wú)刺激性。并且外用后未出現(xiàn)紅腫、水腫等過(guò)敏現(xiàn)象。結(jié)論：膝痹膏臨床皮膚用藥安全、無(wú)毒。

【關(guān)鍵詞】膝痹膏；皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)；皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2024）06-0025-03

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.06.zgmzmjyyzz202406006

Safety Study of Shin Medication of Knee and ArthraLgia HerbaL Paste

GUO Tongtong^1，2LI Hongfei¹GUOXiying¹LIU Junchang^2*

1.Childrens Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region/Xinjiang Hospital of Beijing Childrens Hospital，Urumqi 830000，China;2.Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China

Abstract：Objective To discussthe safety of dermatologic using of Knee and ArthraLgia HerbaL Paste.Method As a model for animal experiment， rabbits， guinea pigs were observed Knee and ArthraLgia HerbaL Paste to the stimulation of rabbit skin and damaged skin group complete response， and guinea pig skin allergic reaction experiments. Results External application of Knee and ArthraLgia HerbaL Paste has no irritation on intact or damaged skin of rabbits.And after external use did not appear redness，oedema and other allergic phenomena.Conclusion Knee and ArthraLgia HerbaL Paste is safe and nontoxic in clinical medication.

Key words：Knee and ArthraLgia HerbaL Paste; irritation experiment; hypersensitivity experiment

膝痹膏處方源自《千金翼方·卷十六·諸膏第三》蒼梧道士陳元膏，并且在《肘后救卒方》《千金要方》等書中均有記載，其中記載“患膝冷痛，摩之五日，亦愈”。在古方的基礎(chǔ)上，依據(jù)新疆醫(yī)科大學(xué)針灸推拿系王新軍主任多年在臨床中對(duì)于治療膝痹病的研究，篩選藥物并確定了本方的君臣佐使及功效。本方由當(dāng)歸、秋水仙、黑附片、干姜，細(xì)辛、白芷等藥材運(yùn)用現(xiàn)代方法與傳統(tǒng)制藥工藝精制而成。本方治療氣滯血瘀、風(fēng)寒濕痹證，現(xiàn)代多用于治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis of the knee KOA）。為探討該藥安全性，此次實(shí)驗(yàn)將從皮膚刺激性、皮膚過(guò)敏性兩個(gè)方面研究，為臨床使用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試藥

1.1 試藥 膝痹膏（實(shí)驗(yàn)室自制），空白基質(zhì)實(shí)驗(yàn)室自制，2，4一二硝基氯苯（陽(yáng)性對(duì)照品）。

1.2 儀器 XS105型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.3 動(dòng)物 兔，普通級(jí)，體重2.10～2.80 kg，雌雄各半。豚鼠，普通級(jí)，體重280～350 g，雌雄各半，均由新疆醫(yī)科大學(xué)北校區(qū)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（新）2018-0001。動(dòng)物房溫度：（25±1）℃，相對(duì)濕度：50% ～ 70% 。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物單獨(dú)分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自然光照。

2 方法與結(jié)果

2.1 膝痹膏皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)^［1-6］

2.1.1 單次給藥的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 將膝痹膏涂抹于兔左側(cè)脊柱部位，右側(cè)不涂作為空白對(duì)照，觀察兔皮膚接觸膝痹膏后所產(chǎn)生的刺激性反應(yīng)。采用兔同體左右自身對(duì)比法，實(shí)驗(yàn)兔4只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組1只。正常皮膚A、B組和破損皮膚C、D組。將家兔脊柱兩側(cè)的毛剪去后，再用刮刀進(jìn)一步去毛處理，左右各一塊，去毛范圍為3 cm×3 cm。破損皮膚組在用藥區(qū)域劃“井”字，以滲出血為度。完整皮膚A組左側(cè)涂膝痹膏供試品0.2 g，右側(cè)作為空白對(duì)照。破損皮膚組C左側(cè)涂膝痹膏供試品0.2 g，右側(cè)涂等量空白基質(zhì)。涂藥后蓋上一層紗布，用無(wú)刺激性膠布固定。分籠飼養(yǎng)，涂藥24 h后，用溫水或生理鹽水洗去殘留藥膏，去除藥膏后 1 h、24 h、48 h、72 h。觀察并記錄涂抹部位是否出現(xiàn)紅斑及水腫等現(xiàn)象。刺激反應(yīng)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1、表2，試驗(yàn)結(jié)果見表3。

2.1.2 多次給藥的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 分別在完整皮膚組B組和破損皮膚組D組家兔的脫毛區(qū)上藥，左側(cè)脫毛區(qū)涂膝痹膏0.2 g，右側(cè)脫毛區(qū)涂空白基質(zhì)0.2 g，每天涂藥1次，涂藥后用無(wú)菌紗布覆蓋，并用膠布進(jìn)一步固定，用藥6 h，連續(xù)7 d。在末次用藥6 h后取下紗布，用溫水或生理鹽水洗去殘余藥膏，洗去藥膏后繼續(xù)觀察1周，每次涂藥前及停藥后，觀察并記錄動(dòng)物給藥部位皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫等現(xiàn)象進(jìn)一步觀察涂抹部位是否出現(xiàn)色素沉著、皮膚粗糙或皮膚菲薄、有無(wú)出血點(diǎn)等情況。刺激反應(yīng)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1、表2，試驗(yàn)結(jié)果見表4。

公式：每組動(dòng)物平均積分值=∑紅斑和水腫積分/受試動(dòng)物數(shù)。

試驗(yàn)結(jié)果見表3，表4，結(jié)果表明，在兔的完整皮膚組和破損皮膚組局部進(jìn)行單次和多次膝痹膏劑給藥的皮膚刺激性試驗(yàn)，各組皮膚刺激反應(yīng)平均分值均為0，用藥部位均未出現(xiàn)紅斑、水腫現(xiàn)象。多次給藥刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，完整皮膚給藥組及破損皮膚給藥組與空白基質(zhì)對(duì)照組相比，各時(shí)間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)平均分值均為0，刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)均為無(wú)刺激性，給藥部位也均未出見色素沉著、皮膚粗糙、出血點(diǎn)等現(xiàn)象。說(shuō)明膝痹膏劑外用對(duì)皮膚完全且無(wú)刺激性。

2.2 膝痹膏皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn) 豚鼠8只，分為給藥組（自制膝痹膏劑）4只，空白對(duì)照組2只及陽(yáng)性對(duì)照組（2，4一二硝基氯苯）2只，于試驗(yàn)前一日用剪刀將其背部毛減去，再用刮刀拐去殘余毛發(fā)，實(shí)驗(yàn)面積為3 cm×3 cm，觀察24 h，并驗(yàn)證脫毛區(qū)無(wú)紅斑、水腫、破損。

2.2.1 致敏接觸 將已備皮的豚鼠8只，分別涂抹膝痹膏、空白基質(zhì)、陽(yáng)性對(duì)照藥各0.2 g，先用一層玻璃紙將藥膏均勻涂抹在受試部位，再兩層無(wú)菌紗布覆蓋，最后用無(wú)刺激膠布進(jìn)行加固，用藥持續(xù)6 h后，用溫水或生理鹽水洗去殘余藥膏，在第7天、第14天，以相同方法各重復(fù)1次，共計(jì)3次。

2.2.2 激發(fā)致敏 于末次給藥致敏后第13天，將豚鼠肋腹部去毛，方法及面積同背部，次日，于肋腹部脫毛區(qū)涂抹膝痹膏、空白基質(zhì)、陽(yáng)性對(duì)照藥（0.1% 2，4-二硝基氯代苯）各0.4 g，6 h后用溫水洗掉受試物，即刻觀察，然后于24 h、48 h、72 h再次觀察皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況。根據(jù)表5對(duì)豚鼠紅斑和水腫情況進(jìn)行評(píng)分，按表6進(jìn)行過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

2.2.3 試驗(yàn)結(jié)果 觀察結(jié)果表明，在致敏0 d、7 d、14 d后，膝痹膏供試品、空白基質(zhì)陰性對(duì)照組的豚鼠均未出現(xiàn)紅斑、水腫等現(xiàn)象，而陽(yáng)性對(duì)照組均出現(xiàn)了不同程度的紅斑。并且24 h、48 h，膝痹膏供試品、空白基質(zhì)陰性對(duì)照組的豚鼠均未出現(xiàn)紅斑、水腫等現(xiàn)象，而陽(yáng)性對(duì)照組均出現(xiàn)了不同程度的紅斑，致敏率高達(dá)100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。

3 討論

兔對(duì)刺激敏感，反應(yīng)近似于人，常用于藥品、化妝品的局部刺激性試驗(yàn)。豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)屬于I型超敏反應(yīng)，是一個(gè)經(jīng)典的動(dòng)物過(guò)敏性試驗(yàn)。故本章節(jié)選用兔為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑓⒄掌つw刺激性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則，設(shè)計(jì)了膝痹膏外用單次及多次涂藥的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明膝痹膏外用對(duì)兔的完整或破損皮膚均無(wú)刺激性。選用豚鼠為皮膚過(guò)敏動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，與空白基質(zhì)、陽(yáng)性對(duì)照藥（0.1% 2，4-二硝基氯代苯）相比，結(jié)果表明膝痹膏外用后未出現(xiàn)紅腫、水腫等過(guò)敏現(xiàn)象。為其臨床用藥提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。

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（收稿日期：2023-07-06 編輯：劉 斌）