劉紅濤,王冬冬,陳 英

原發(fā)性肝癌(PHC)是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一[1-4]。高強度聚焦超聲(HIFU)是一種非侵入性局部消融術(shù),通過將高強度超聲聚焦于癌組織形成的熱效應(yīng)使得癌細胞瞬間凝固性壞死,達到“熱切除”的治療目的,能有效提高PHC遠期生存率[5-6]。但也有研究證實,HIFU治療PHC后有部分患者會在術(shù)后6個月出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)現(xiàn)象,需及早識別,及時干預(yù)[7]。熱休克蛋白70(HSP70)具有調(diào)控炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答作用,在癌癥患者中異常升高[8]。多效生長因子(PTN)是一種在腫瘤細胞生長增殖、血管生成過程中發(fā)揮重要作用的分泌生長因子[9]。異常凝血酶原Ⅱ(PIVKA-Ⅱ)水平與PHC發(fā)生有關(guān),其水平增高可提示PHC風(fēng)險[10]。但關(guān)于三者與HIFU治療PHC患者早期復(fù)發(fā)的關(guān)系報道較少。本研究探討PHC患者HIFU治療前后HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平變化與早期復(fù)發(fā)的關(guān)系,旨在為臨床提供佐證,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取石家莊市人民醫(yī)院2021年1月—2023年1月收治的PHC 120例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)影像學(xué)檢查、病理活檢證實為PHC;符合PHC診斷標(biāo)準(zhǔn)[11];首次確診;單發(fā)腫瘤;CNLC分期為Ⅰa或Ⅰb期。排除標(biāo)準(zhǔn):存在認(rèn)知障礙、溝通障礙患者;合并其他惡性腫瘤患者;伴有嚴(yán)重免疫性、感染性疾病患者;出現(xiàn)肝腫瘤轉(zhuǎn)移患者;Child-Pugh分級C級患者;新型冠狀病毒感染及受疫情影響無法配合研究及隨訪患者。120例PHC中,男81例,女39例;年齡34～73(59.06±5.03)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)16～25(21.49±1.46)kg/m2;腫瘤直徑2.0～8.0(4.51±0.67)cm;病理類型:肝細胞癌96例,膽管細胞癌24例;Child-Pugh分級:A級85例,B級35例;CNLC分期:Ⅰa期64例,Ⅰb期56例;分化程度:中高分化89例,低分化31例。本研究經(jīng)石家莊市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批(2021第146號),患者均知情自身病情及研究方案并簽訂知情同意書。

1.2 治療方法

應(yīng)用NIT9000型HIFU消融治療系統(tǒng)(上海愛申科技發(fā)展股份有限公司),以脫氣自來水作為治療介質(zhì),設(shè)置治療參數(shù):輸入頻率0.3～1.0 MHz,有效治療深度2～15 cm,探焦距42.5～151.2 mm,焦域直徑3 mm,發(fā)射時間0.20～0.30 s,間歇時間0.16～0.24 s,單次治療發(fā)射60次,每次16 s,每次間隔14 s。根據(jù)超聲檢查結(jié)果于體表定位腫瘤位置,于超聲引導(dǎo)下調(diào)節(jié)系統(tǒng),使得術(shù)中靶區(qū)充分顯現(xiàn),將整體腫瘤病灶劃分為若干個平面,按照由點到線、由面至體的原則逐層深入消融。每日1次,每次30～60 min,間隔24 h再行下一次治療,根據(jù)腫瘤情況共治療10～30次。治療期間均未接受其他治療。治療結(jié)束后隨訪6個月,隨訪期間經(jīng)影像學(xué)檢查提示肝內(nèi)新發(fā)惡性腫瘤病灶判定為復(fù)發(fā)。據(jù)隨訪結(jié)果分為復(fù)發(fā)組26例,未復(fù)發(fā)組94例。

1.3 血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ檢測方法

于治療前1 d、治療結(jié)束后1 d清晨采集空腹靜脈血3 mL,以4 000 r/min的速率離心處理5 min,取血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清HSP70、PTN水平,Multiskan SkyHigh全自動酶標(biāo)儀及試劑盒購自賽默飛公司;采用ADVIA2400全自動生化分析儀及配套試劑盒(西門子公司)檢測PIVKA-Ⅱ水平。所有操作嚴(yán)格遵循試劑盒說明書。

1.4 觀察指標(biāo)

1)比較2組臨床資料,包括年齡、性別、BMI、病理類型、Child-Pugh分級、腫瘤直徑、CNLC分期、分化程度。2)比較2組治療前后血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平。3)比較2組血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值,血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值=治療前值-治療后值。4)分析治療前血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ與病理特征的相關(guān)性。5)分析血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值與早期復(fù)發(fā)的關(guān)系。6)評估血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值對早期復(fù)發(fā)的預(yù)測效能。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

2組性別、年齡、BMI、病理類型、Child-Pugh分級差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),腫瘤直徑、CNLC分期、分化程度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 2組原發(fā)性肝癌患者臨床資料

2.2 治療前后血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平

2組治療后血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平較治療前下降(P<0.05);復(fù)發(fā)組治療前、治療后血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平高于未復(fù)發(fā)組(P<0.01)。見表2。

表2 2組原發(fā)性肝癌患者治療前后血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平

2.3 血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值

復(fù)發(fā)組血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值低于未復(fù)發(fā)組(P<0.01),見表3。

表3 2組原發(fā)性肝癌患者血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值比較

2.4 治療前血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ與病理特征的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析顯示,治療前血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ與腫瘤直徑、CNLC分期呈正相關(guān),與分化程度呈負相關(guān)(P<0.01),見表4。

表4 原發(fā)性肝癌患者治療前血清HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ與病理特征的相關(guān)性

2.5 血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值與HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的關(guān)系

以PHC患者HIFU治療后是否早期復(fù)發(fā)作為因變量,校正前以腫瘤直徑、CNLC分期、分化程度及血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值作為因變量,行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:腫瘤直徑、CNLC分期、分化程度及血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值與PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān)(P<0.01);校正后以血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值作為因變量,行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值仍與PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān)(P<0.01)。見表5。

表5 原發(fā)性肝癌患者血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值與HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的關(guān)系

2.6 血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值對HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的預(yù)測效能

ROC曲線分析顯示,血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值預(yù)測PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的曲線下面積(AUC)分別為0.793(95%CI:0.710,0.862)、0.726(95%CI:0.637,0.804)、0.794(95%CI:0.710,0.862),敏感度分別為0.808、0.692、0.731,特異度分別為0.723、0.670、0.745;三者聯(lián)合預(yù)測PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的AUC為0.916(95%CI:0.851,0.958),敏感度為0.923,特異度為0.872,優(yōu)于三者單獨預(yù)測。見圖1。

HSP70為熱休克蛋白70,PTN為多效生長因子,PIVKA-Ⅱ為異常凝血酶原Ⅱ,HIFU為高強度聚焦超聲,ROC為受試者工作特征。

3 討論

HSP70是一種高度保守的應(yīng)激蛋白,參與多種細胞的進化過程,生物學(xué)作用多樣,其中最重要的作用為維持細胞蛋白穩(wěn)定,調(diào)控細胞增殖[12]。WANG等[13]研究顯示,與正常健康人群相比,血清HSP70在肝癌患者中的水平較高。丁莉利等[14]報道指出,HSP70在高分化肝細胞癌患者中的表達率達83.3%。本研究發(fā)現(xiàn),PHC患者治療前血清HSP70水平與患者腫瘤直徑、CNLC分期呈正相關(guān),與分化程度呈負相關(guān),可見HSP70高表達會促進肝癌細胞生長、增殖、分化和侵襲。相關(guān)報道證實,細胞外HSP70肽復(fù)合物可經(jīng)由P13K/AKT信號通路調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)表達,加快肝癌HepG2細胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,加速肝癌發(fā)生發(fā)展[15]。對比HIFU治療前后HSP70變化情況發(fā)現(xiàn),2組治療后血清HSP70水平較治療前下降,復(fù)發(fā)組高于未復(fù)發(fā)組,ΔHSP70低于未復(fù)發(fā)組。表明HSP70水平變化會對PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)產(chǎn)生明顯影響,原因在于:HSP70對抑癌基因與原癌基因均有明顯影響,正常情況下HSP70處于低水平狀態(tài),一旦出現(xiàn)癌細胞異常增殖現(xiàn)象,便會導(dǎo)致HSP70高表達,而HSP70高表達會調(diào)控癌細胞基因表達[16-17]。進一步分析顯示,校正其他因素前后,血清ΔHSP70值均與PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān),且具有一定預(yù)測效能,可為臨床及早期識別HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的高?；颊咛峁┯行У闹笇?dǎo)信息。

PTN是一種對肝素具有高親和力的分泌生長因子。既往報道發(fā)現(xiàn),PTN與肺癌、胰腺癌、乳腺癌等多種癌癥密切相關(guān)[18-20]。本研究結(jié)果顯示,治療前血清PTN與PHC腫瘤直徑、CNLC分期呈正相關(guān),與分化程度呈負相關(guān),與趙景曼等[21]報道中結(jié)果一致,提示PTN具有加速PHC發(fā)生發(fā)展作用。PTN能夠經(jīng)神經(jīng)毛蛋白-1在癌變組織內(nèi)部產(chǎn)生侵襲作用,能抑制轉(zhuǎn)化因子,促進癌細胞增殖,避免癌細胞衰老凋亡,從而加快PHC發(fā)展[22]。同時,有學(xué)者指出,PTN高表達可改變高爾基體組織結(jié)構(gòu),強化癌細胞遷移能力,加速正常肝細胞死亡,導(dǎo)致癌組織范圍不斷擴大,促進肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移[23-24]。本研究還發(fā)現(xiàn),PHC患者血清PTN水平在經(jīng)HIFU治療后呈明顯下降趨勢,但與未復(fù)發(fā)組相比,復(fù)發(fā)組ΔPTN值較小,且ΔPTN值在校正其他因素前后均與PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān)。分析原因為,PTN治療前后下降幅度一定程度說明了癌細胞的衰老和凋亡程度,其下降幅度較小提示HIFU治療后癌細胞的衰老和凋亡并不明顯,因此早期復(fù)發(fā)的風(fēng)險較高。另外,ROC曲線分析,ΔPTN值預(yù)測PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)AUC>0.7,提示其可作為臨床早期預(yù)測HIFU治療后早期復(fù)發(fā)重要因子。

PIVKA-Ⅱ?qū)儆诓痪邆淠干飳W(xué)活性的異常凝血酶原,是近年來發(fā)現(xiàn)的在PHC患者中特異性升高的血清學(xué)因子[25]。KIM等[26]研究證實,血清PIVKA-Ⅱ水平與PHC患者腫瘤直徑、臨床分期、分化程度有關(guān),這與本研究結(jié)果相符。正常情況下,機體凝血酶原前體需在肝臟內(nèi)完成向γ-羧基谷氨酸的轉(zhuǎn)變,形成正常的凝血酶原,一旦其在羧化過程中缺乏維生素K的輔酶作用,便無法完成正常的轉(zhuǎn)變,不能參與凝血過程,進而轉(zhuǎn)化為異常凝血酶原進入血液[27]。國內(nèi)外報道均表明,PIVKA-Ⅱ在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中促進了血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移[28-29]。本研究結(jié)果顯示,PHC患者經(jīng)HIFU治療后血清PIVKA-Ⅱ水平較治療前下降,且ΔPIVKA-Ⅱ與HIFU治療后早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān),可見PIVKA-Ⅱ不僅參與PHC發(fā)生發(fā)展過程,還會增加HIFU治療后早期復(fù)發(fā)風(fēng)險。進一步研究發(fā)現(xiàn),ΔPIVKA-Ⅱ值對PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)風(fēng)險也具有一定預(yù)測效能。

此外,本研究在上述結(jié)果基礎(chǔ)上分析血清ΔHSP70、ΔPTN、ΔPIVKA-Ⅱ值聯(lián)合預(yù)測PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的效能,結(jié)果顯示,三者聯(lián)合預(yù)測的AUC高達0.916,明顯優(yōu)于三者單獨預(yù)測,提示三者聯(lián)合可作為臨床預(yù)測PHC患者HIFU治療后早期復(fù)發(fā)的優(yōu)選方式。不足之處是本研究未詳細探討HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平與PHC患者HIFU治療后遠期生存率間的關(guān)系,今后需繼續(xù)收集病例,做進一步研究,以獲取更為全面的數(shù)據(jù)支持。

綜上,HSP70、PTN、PIVKA-Ⅱ水平與PHC腫瘤直徑、CNLC分期、分化程度密切相關(guān),接受HIFU治療前后的變化值與早期復(fù)發(fā)獨立相關(guān),且聯(lián)合預(yù)測效能較高。