謝金花

【摘要】 目的 比較化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用價值。方法 選擇2021年1月—2021年12月廣昌縣中醫(yī)院收治的100例疑似乙肝病毒感染患者進行研究，在確認所有患者病例資料完整后抽取其空腹血，分別采用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法對患者乙肝五項進行檢測，對比2類檢測方法對乙肝五項陽性檢測率的差異，以實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）對乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）檢測結(jié)果作為金標準，對比化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測HBV的診斷效能。結(jié)果 化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝e抗體（hepatitis B eantibody，HBeAb）的陽性檢出率高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）；2類方法在乙肝表面抗體（hepatitis b surface antibody，HBsAb）、乙肝e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）及總陽性檢出率方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、陰性預(yù)測值為88.24%，與PCR檢驗的Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光法檢驗HBV陽性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準確率為94.00%、陽性預(yù)測值為94.03%、陰性預(yù)測值為93.94%，與PCR檢驗的Kappa值為0.866；化學(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能。結(jié)論 相較于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法在對乙肝病毒五項血清檢測中表現(xiàn)出更高的診斷價值，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫法；乙肝病毒；乙肝五項

文章編號：1672-1721（2024）10-0105-03? ? ?文獻標志碼：A? ? ?中國圖書分類號：R446.6

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）持續(xù)感染引起的一種嚴重疾病，參與著肝硬化、肝纖維化、肝細胞衰竭及肝癌等多種肝臟疾病機制，在發(fā)展中國家人群中較為常見，是全世界十大死亡原因之一。HBV主要傳播途徑為血液、體液及性傳播，也被列為性傳播疾病[1]。大多數(shù)情況下，HBV病毒潛伏期無癥狀，通常在體檢中發(fā)現(xiàn)。當前臨床主要可通過乙肝五項對患者HBV感染情況進行分析，而乙肝五項的檢測方法主要包括化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法。酶聯(lián)免疫法是一種更廣泛使用的臨床檢測方法，主要醫(yī)療設(shè)備具備試驗條件，價格便宜，適用于公共測試，但在定量分析中有一些弊端，特別是當血清樣品濃度太高時，假陰性因素影響疾病的診斷[2]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定法是一種新型的免疫測定技術(shù)，可以高精度地進行定量分析[3]。本研究比較化學(xué)發(fā)光和酶聯(lián)免疫吸附法對檢測乙型肝炎感染血清的差異，為臨床檢驗提供參考，報告如下。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料

選取2021年1月—2021年12月廣昌縣中醫(yī)院收治治療的100例疑似乙肝病毒感染患者，男性患者52例，女性患者48例，年齡18～60歲，平均年齡（39±21）歲；所有患者均有完整病例資料，在治療期間抽取空腹靜脈血進行乙肝五項檢查。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準。

納入標準：（1）有HBV感染者接觸史，且伴有肝痛、乏力等肝病癥狀；（2）年齡18～60歲；（3）患者對于研究相關(guān)信息已掌握，并且愿意配合相關(guān)研究。

排除標準：（1）近期已使用相應(yīng)的抗病毒治療藥物；（2）免疫經(jīng)患者；（3）全身或局部急慢性感染患者；（4）既往乙肝或其他類型病毒感染史；（5）血液系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

血樣采集。所有患者均在空腹狀態(tài)下接受靜脈血采集，抽取靜脈血樣本時需保證在無菌環(huán)境下進行，抽血器械需要在消毒后使用。抽取血液樣本后置于離心機，以3 000 r/min速度離心10 min后，采用移液器取上層血清檢測。若當時條件不允許或需要長時間保存血樣本時，必須將血樣放于低溫狀態(tài)下進行保存，低溫可低至-80 ℃。檢測-80 ℃冰箱中的血樣本時，應(yīng)將樣本在室溫中復(fù)溫、復(fù)融、充分混合，切勿將樣本反復(fù)凍融。將收集到的15 mL血分為3份，2份分別采用化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附法對乙肝五項進行檢測，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）等指標[4]；1份采用PCR對HBV進行自動化檢測，根據(jù)配套試劑盒操作即可。

化學(xué)發(fā)光法。主要通過邁瑞CL-2000i儀器檢測進行自動化檢測，依次對各項目試劑盒及校準品的二維碼執(zhí)行儀器校準測試得到系統(tǒng)校準曲線，試劑和校準品在37 ℃條件下孵育30 min，試劑加入儀器試劑盤中，校準品按儀器校準操作執(zhí)行，校準通過之后再執(zhí)行質(zhì)控品經(jīng)行質(zhì)控檢測，質(zhì)控在可控范圍之內(nèi)方可檢測待測樣品，待測品按序號依次放入樣本架進入軌道即可。

酶聯(lián)免疫吸附法。根據(jù)試劑盒說明書分別采用雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、中和競爭法、競爭抑制法進行檢驗，將室溫放置后的實際分入空白對照孔、陰陽性對照孔，并使得標準液和特異酶加入，除空白對照孔外其他加入待測樣品，充分混勻后蓋上專用膜，37 ℃孵育30 min后洗滌拍干，加入顯色劑并通過覆膜避光反應(yīng)15～30 min后加入終止液進行終止反應(yīng)，并于酶標儀對分光度值進行讀取。

實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）。主要通過熒光定量測定儀進行自動化檢測，根據(jù)配套試劑盒操作即可。

1.3 觀察指標

對2類方法的陽性檢測?；瘜W(xué)發(fā)光法，HBsAg檢測值大于0.08 U/mL，HBsAb檢測值大于10 U/mL，HBeAg相對光強度/臨界相對光強度水平不小于1，HBeAb和HBcAb的相對光強度/臨界相對光強度水平不大于1均可判定為陽性。酶聯(lián)免疫吸附法，HBeAb、HBcAb相對CUTOFF相對光強度水平不高于0.8，HBsAg、HBsAb、HBeAg不低于0.8，則可以判定為陽性。根據(jù)判定結(jié)果，比較對HBV血清標志物的陽性檢出率，從陽性結(jié)果準確率分析2類方法檢測效果的差異性。

以PCR檢測作為金標準，采用Kappa檢驗分別對化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測HBV陽性水平的靈敏度、特異度和準確率進行比較。將2類檢測方法與金標準的一致性Kappa值進行對比，PCR檢測HBV定量測量值＞1.0×102拷貝/mL即可將患者判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗；一致性分析采取Kappa檢驗，Kappa值＜0.4為一致性較差，0.4～0.75為一致性一般，＞0.75為一致性較好；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2類方法乙肝五項檢測結(jié)果比較

化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HBeAb陽性檢出率比酶聯(lián)免疫法更高（P＜0.05）；2類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 2類方法檢驗HBV陽性的一致性分析

100例研究對象經(jīng)PCR檢驗顯示，HBV陽性為65例。酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、陰性預(yù)測值為88.24%，與PCR檢驗的Kappa值為0.801?；瘜W(xué)發(fā)光法檢驗HBV陽性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準確率為94.00%、陽性預(yù)測值為94.03%、陰性預(yù)測值為93.94%，與PCR檢驗的Kappa值為0.866?；瘜W(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能，見表2、表3。

3 討論

乙肝發(fā)生率非常高，嚴重阻礙了人們的生活和健康[5]。乙肝傳染方式主要是血液感染、性傳染、母嬰感染等。對肝炎患者進行治療和診斷時，科學(xué)且有效的診斷和評價很重要。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)發(fā)展，乙肝五項及HBV-DNA檢驗技術(shù)的提高，使得該病發(fā)生及動態(tài)定量分析的準確性大大提高。目前乙肝臨床檢測方法主要有乙肝單一五項檢查、與HBV前s抗原組合的乙肝五項檢查、與HBV-DNA檢測組合的乙肝五項檢查等，較大程度降低了乙肝臨床檢測失誤率，對于更早發(fā)現(xiàn)疾病或幫助醫(yī)師制定臨床治療方案具有一定價值[6]。

本研究結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HbeAb陽性檢出率高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05），2類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽性檢出率上比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示化學(xué)發(fā)光法在可通過HBsAg、HBeAb陽性異常檢出來提高對患者乙肝檢測的準確性。化學(xué)發(fā)光法是根據(jù)被測物質(zhì)與相應(yīng)的檢測試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)光強度來判斷被測物質(zhì)的濃度。因為檢測發(fā)光強度與被測物質(zhì)存在線性定量關(guān)系，所以化學(xué)發(fā)光法靈敏度很高[7]。相關(guān)實驗表明，化學(xué)發(fā)光法檢測靈敏度高，對于被測標志物的檢測準確率高、誤診率低。隨著化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)在乙型肝炎五項標志物檢測中具有重要的應(yīng)用價值。HBsAg主要屬于HBV的外殼蛋白成分，其水平可在HBV感染后1～2周出現(xiàn)異常，并因病情進展而持續(xù)變化；HBeAb主要受到HBsAg刺激而產(chǎn)生抗體，對于HBV復(fù)制過程的反映也有一定效果?；瘜W(xué)發(fā)光法更靈敏的檢測使得該類方法對HBV陽性檢出更具價值[8]。

本次研究顯示，酶聯(lián)免疫法檢驗HBV陽性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準確率為91.00%、陽性預(yù)測值為92.42%、陰性預(yù)測值為88.24%，與PCR檢驗的Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光法檢驗HBV陽性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準確率為94.00%、陽性預(yù)測值為94.03%、陰性預(yù)測值為93.94%，與PCR檢驗的Kappa值為0.866；化學(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能。酶聯(lián)免疫吸附法根據(jù)抗原與抗體的特異性結(jié)合現(xiàn)象，可以利用酶與基質(zhì)之間的催化作用和對待測物的定量測定，同時測定抗原和抗體，在臨床應(yīng)用廣泛，但該方法對抗原抗體結(jié)合位點較為看重，否則難以發(fā)生反應(yīng)。該方法適用于不適合標記的抗體，可以保持初級抗體的最強免疫，缺點是容易發(fā)生交叉反應(yīng)。試驗物質(zhì)的濃度越高，酶標抗原或抗體越少，用儀器測定的吸光度值越低[9]。化學(xué)發(fā)光免疫分析主要由抗原抗體檢測系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)構(gòu)成，免疫反應(yīng)特異性強，化學(xué)發(fā)光靈敏度高，通過與發(fā)光試劑標記的抗原和抗體組合的免疫反應(yīng)產(chǎn)生免疫現(xiàn)象，加入化學(xué)基質(zhì)，在聚乙烯醇的催化反應(yīng)下發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，氧化成刺激的中間體，用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測一定程度的光信號強度，從而實現(xiàn)對被測對象定性定量的檢測。

化學(xué)發(fā)光法主要包括化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)、化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)3類，各類方法標志物有所不同?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)反應(yīng)機理為氧化還原反應(yīng)，不會對人體產(chǎn)生明顯損害?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)結(jié)合的底物與前者有所區(qū)別，在與結(jié)合抗原抗體分離后可發(fā)生能量躍遷，從而發(fā)生相應(yīng)強度的光，從而進行定量。電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)兼具前兩者的高特異性和點化學(xué)發(fā)光高敏感性。其中，電化學(xué)發(fā)光試劑主要用于抗體和抗原的標記，磁珠作為將檢測對象及其相應(yīng)的抗體固定在磁微球上的固體載體。免疫結(jié)合后，抗體免疫組合物在磁珠上生成，磁場施加到反應(yīng)介質(zhì)的外側(cè)，復(fù)合體被磁性機架吸附凝聚，通過洗滌去除彈跳物質(zhì)，測量磁珠結(jié)合物的發(fā)光強度，從而準確測量未知濃度的抗原[10]。

綜上所述，相較于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法在對乙肝病毒五項血清檢測中表現(xiàn)出更高的診斷價值，值得推廣。

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（編輯：張興亞）