蔡遠(yuǎn)東 何羽 李天佑

【摘 要】 ??目的： ?采用高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定羊藿三七膠囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ和寶藿苷Ⅰ的含量，為羊藿三七膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供依據(jù)。 方法： 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。 結(jié)果： 線性和范圍分別為朝藿定C： Y=1.9838x+48.464，r=0.9997（n =8），421.60～3372.80 μg；淫羊藿苷： Y=2.2299x+43.786，r=0.9997（n=8），433.60～3468.80 ?μg ；淫羊藿次苷Ⅰ：Y=2.3527x+1.6429，r=0.9994（n =8）74.64～597.12 μg；寶藿苷Ⅰ： Y=3.1305x+9.4286，r=0.9996（n =8），在481.64～653.12 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。朝藿定C的平均回收率為100.06%，RSD為0.3%；淫羊藿苷的平均回收率為100.51%，RSD為0.8%；淫羊藿次苷Ⅰ的平均回收率為100.16%，RSD為0.8%；寶藿苷Ⅰ的平均回收率為100.21%，RSD為0.8%。 結(jié)論： 建立的方法簡(jiǎn)便快捷、重復(fù)性良好、準(zhǔn)確度較高、分離度較好，可用于羊藿三七膠囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】 ?羊藿三七膠囊；HPLC法；黃酮類化合物；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R927.2 ??【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ???【文章編號(hào)】1007-8517（2024）08-0050-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408011

Study on Improving the Quality Standards of ?Yanghuo Sanqi ?Capsules

CAI Yuandong HE Yu * LI Tianyou

Bijie Inspection and Testing Center of Administration for Maeket Superrvision，Bijie 551700，China

Abstract： ?Objective ??High performance liquid chromatography （HPLC） was used to simultaneously determine the contents of epimedin C、icariin、epimedium glycoside Iand baohuoside I in ?Yanghuo Sanqi ?capsules，Provide a basis for improving the quality standards of ?Yanghuo Sanqi ?Capsules. ?Methods ??Chromatographic column with octadecyl silane bonded silica gel as filler，The mobile phase is acetonitrile -0.05% phosphoric acid solution，gradient elution，The flow rate is 1mL/min，The detection wavelength is 270 nm，The column temperature is 30 ℃， Injection volume is 10 L. Results ??The linearity and range are：epimedin C： Y=1.9838x+48.464， r=0.9997 （n=8）， ?421.60-3372.80 ?μg ；cariin： Y=2.2299x+43.786， r=0.9997 （n =8）， ?433.60-3468.80 μg；Epimedium glycoside I： Y=2.3527x+1.6429， r=0.9994 （n =8）， 74.64-597.12 μg；Baohuoside I ?Y=3.1305x+9.4286， r=0.9996 （n =8）， between 481.64 and 653.12 μg The linear relationship within the range of g is good.The average recovery rate of epimedin C is 100.06%， with an RSD of 0.3%；The average recovery rate of icariin is 100.51%， with an RSD of 0.8%；The average recovery rate of epimedium glycoside I was 100.16%，with an RSD of 0.8%；The average recovery rate of Baohuoside I is 100.21%， with an RSD of 0.8%. ?Conclusion ??The established method is simple and fast、with good repeatability， high accuracy， and good separation，It can be used for the content determination of epimedin C，icariin，epimedium glycoside I and pogoside I in Yanghuosanqi capsules.

Key words： ?Yanghuo Sanqi ?Capsule；HPLC Method；Flavonoid；Quality Standard

羊藿三七膠囊由淫羊藿和三七經(jīng)煎煮、濃縮、提取制成，具有溫陽(yáng)通脈、化瘀止痛的功效，用于陽(yáng)虛血瘀所致胸痹，癥見胸痛、胸悶、心悸、 乏力、氣短等；冠心病、 心絞痛屬上述證候者 ?［1］ 。方中淫羊藿含朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ等黃酮類化合物，淫羊藿黃酮類化合物有增加冠脈流量、耐缺氧、保護(hù)心肌缺血、降壓等作用，并具有 一定的免疫抑制作用 ?［2］ ，而淫羊藿苷具有降低動(dòng)脈粥樣硬化患者血栓形成幾率及調(diào)節(jié)血脂、保護(hù)受損神經(jīng)元及恢復(fù)記憶力等藥理活性，朝藿定C則顯示出一定的雌激素活性 ?［3］ ，寶藿苷Ⅰ則具有抗腫瘤及提高免疫力的作用 ?［4］ 。淫羊藿藥材中朝藿定C含量較高 ?［5］ ，僅以淫羊藿苷作為其質(zhì)量控制指標(biāo)不盡合理，不能全面反映制劑整體質(zhì)量。本文采用HPLC法同時(shí)測(cè)定羊藿三七膠囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ的含量，為羊藿三七膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀，2998二極管陣列檢測(cè)器。電子天平：MSE3.6P-OCE-DM，由賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司生產(chǎn)；電子天平：AY120、BX420H由梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產(chǎn)。潔康超聲波清洗機(jī)（超聲功率：360W，超聲頻率：40KHz，規(guī)格型號(hào)：JM-20D-28/45）由東莞市潔康超聲波設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

1.2 試藥 朝藿定C對(duì)照品（批號(hào)：11780-201905，含量以94.3%計(jì)）、淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)：111852-202104，含量以99.2%計(jì)）、淫羊藿次苷Ⅰ對(duì)照品（批號(hào)：11 2084-202101）、寶藿苷Ⅰ對(duì)照品（批號(hào)：110737-202017，含量以98.1%計(jì)）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。乙腈為色譜純（美國(guó)TEDIA天地試劑公司），實(shí)驗(yàn)用水為超純水機(jī)（規(guī)格型號(hào)：ATSmole1850C，生產(chǎn)廠家：重慶市安特生環(huán)保設(shè)備有限公司）制取的一級(jí)水。羊藿三七膠囊（重慶三峽云海藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為：2211011、2201011、220701）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters SymmetryC 18 ??5 μm ??4.6 mm ×250 mm Column；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量： 10 μL 。梯度洗脫程序見表1，色譜圖如圖1所示，各成分分離度皆大于1.5。

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ適量，加甲醇制成每1 mL含朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ分別為0.2108 mg、0.2168 mg、0.03732 mg、0.04082 mg的混合對(duì)照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取羊藿三七膠囊裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約 0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量， 超聲（ 功率： 500 W，頻率： 40 kHz） 處理60 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得 ?［1］ 。

2.4 ?陰性對(duì)照溶液的制備 取按處方及工藝制備的缺淫羊藿陰性對(duì)照品0.5 g，照 2.3 項(xiàng)下的供試品溶液制備方法處理，制成缺淫羊藿陰性對(duì)照溶液。

2.5 ?線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL、16 μL按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次。以對(duì)照品濃度 （X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y） 為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得到朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見表2。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，分別計(jì)算4種成分的峰面積積分值。結(jié)果朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ峰面積的RSD值分別為0.9%、1.0%、1.3%、1.4%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品（批號(hào)：2211011）按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，每份平行測(cè)定2次，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定并計(jì)算各成分的含量。結(jié)果顯示朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ的平均值分別為6.8 mg/粒、6.0 mg/粒、0.3 mg/粒、0.2 mg/粒；RSD值分別為0.8%、0.8%、1.2%、1.1%。表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同批樣品（批號(hào)：2211011）按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定并計(jì)算各組分峰面積的RSD值，結(jié)果朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ峰面積的RSD值分別為0.9%、1.0%、1.2%、1.1%。說明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已測(cè)定含量的樣品（批號(hào)：2211011）6份，每份約0.25 g，分別加入朝藿定C、淫羊藿苷濃度分別為1.5578 mg/mL、1.5029 mg/mL的混合對(duì)照品溶液1 mL；淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ濃度分別為0.0720 mg/mL、0.0707 mg/mL的混合對(duì)照品溶液1 mL，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下測(cè)定并計(jì)算回收率?；厥章势骄捣謩e為100.06%、100.51%、100.16%、100.21%，RSD分別為0.3%、0.8%、0.8%、0.8%。結(jié)果見表3。

2.9 樣品含量的測(cè)定 取3批羊藿三七膠囊（批號(hào)分別為：2211011、2201011、220701），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每份平行測(cè)定2次，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定并計(jì)算各成分的含量。測(cè)定結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 本研究分別采用乙腈-水，乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，結(jié)果選用乙腈-0.05％磷酸溶液時(shí)，目標(biāo)峰峰形較好，且與相鄰雜質(zhì)峰達(dá)到完全分離，取得了滿意的效果。

3.2 供試品溶液制備考察 采用稀乙醇為溶劑，分別考察了超聲處理30 min、60 min，結(jié)果超聲處理30 min時(shí)，樣品含量較低，超聲處理60 min時(shí)樣品含量較高，說明超聲處理30 min時(shí)，目標(biāo)成分未提取完全，超聲處理60 min時(shí)目標(biāo)物提取較完全，為保證充分提取完全，本次研究選擇超聲處理60 min。分別取稀乙醇、甲醇和75%甲醇作為溶劑，超聲處理60 min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)稀乙醇提取時(shí)目標(biāo)物含量較高，故本研究采用稀乙醇為提取溶劑。

從羊藿三七膠囊三批樣品檢測(cè)的結(jié)果來(lái)看，處方淫羊藿中朝藿定C的含量略大于淫羊藿苷，原標(biāo)準(zhǔn) ?［1］ 中淫羊藿的含量只以淫羊藿苷計(jì)不盡合理，建議廠家淫羊藿的含量以朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ的總量來(lái)計(jì)，這樣才能全面反應(yīng)制劑的質(zhì)量。本研究采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了羊藿三七膠囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ含量，取得了較為滿意的結(jié)果。該方法較為簡(jiǎn)便，重復(fù)性較好，可用于羊藿三七膠囊的含量測(cè)定及質(zhì)量評(píng)價(jià)，為羊藿三七膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供方法依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：919.

［2］康廷國(guó)，閻玉凝，吳德芳，等.《中藥鑒定學(xué)》新世界［M］.2版.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003（1）：389.

［3］沈潔，王琴，熊維建，等.HPLC——測(cè)多評(píng)法測(cè)定參芪延腎顆粒中淫羊藿藥材中的6個(gè)黃酮類成分的含量［J］.中國(guó)藥房，2019，30（17）：2327-2331.

［4］王雷，李軍民，盧迪，等.淫羊藿及其復(fù)方有效成分的提取和抗衰老作用探析［J］.藥物與人，2014，27（3）：10-11.

［5］汪楊麗，鄧開英，鄭小平，等.HPLC同時(shí)測(cè)定羊藿三七膠囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2015，17（5）：485-487，496.

（收稿日期：2023-08-04 編輯：劉 斌）