莊杰貴 牛軍鋒 黃小林

摘 要：為研究海生物殺生劑（其活性成分為雙胍鹽聚合物）對(duì)花鱸（Lateolabrax japonicus）幼魚的急性毒性作用，選擇體長(zhǎng)為（2.11±0.11）cm，體質(zhì)量為（0.14±0.03）g的花鱸幼魚作為試驗(yàn)對(duì)象，將其隨機(jī)分為 7 組，包括 6 個(gè)不同濃度試驗(yàn)組和 1 個(gè)空白對(duì)照組。采用半靜態(tài)法進(jìn)行試驗(yàn)，觀察并記錄試驗(yàn)開始后1、8、16、24、48、72 h和96 h的死亡情況和中毒癥狀。結(jié)果表明，海生物殺生劑濃度為10 mg/L時(shí)未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，20 mg/L開始出現(xiàn)死亡情況，超過40 mg/L濃度時(shí)試驗(yàn)魚全部死亡；根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算得出，96 h的半致死質(zhì)量濃度（96 h-LC50）約為20.05 mg/L，95%置信下限為15.61 mg/L，置信上限為24.45 mg/L，安全濃度為2.01 mg/L。

關(guān)鍵詞：海生物殺生劑；雙胍鹽聚合物；花鱸（Lateolabrax japonicus）；幼魚；急性毒性

花鱸（Lateolabrax japonicus）隸屬于鱸形目鮨科花鱸屬，俗稱鱸魚、七星鱸、海鱸魚等，為廣鹽廣溫性魚類。花鱸廣泛分布于我國(guó)近岸海域，是我國(guó)海水養(yǎng)殖的主要品種[1]。2022年我國(guó)花鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)21.8萬t，占海水魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量的11.3%，是我國(guó)第三大海水養(yǎng)殖魚類[2]，具有生長(zhǎng)快、病害少、肉質(zhì)嫩、營(yíng)養(yǎng)豐富、產(chǎn)量高和市場(chǎng)前景好等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶喜愛[3]。

沿海地區(qū)液化天然氣（LNG）接收站常將海水作為L(zhǎng)NG氣化的熱源，然而，海水中富含藤壺、貽貝、牡蠣和?？雀黝惡Ｉ?，它們易附著在氣化器的傳熱管壁上生長(zhǎng)，從而降低熱傳導(dǎo)效率，影響氣化系統(tǒng)的安全運(yùn)行。為應(yīng)對(duì)這一問題，LNG接收站常在進(jìn)水端添加海生物殺生劑，以殺滅進(jìn)入氣化系統(tǒng)中的海生物。目前應(yīng)用較為廣泛的殺生劑有電解制氯、溴、臭氧和碘等氧化性殺生劑，以及季銨鹽、聚季銨鹽和氯酚等非氧化性殺生劑，這些殺生劑毒性較大且難以降解，排放后對(duì)海洋生物有一定的毒害作用[4-7]。為應(yīng)對(duì)新的環(huán)保要求，一種主要活性成分為雙胍鹽聚合物的非氧化性海生物殺生劑應(yīng)運(yùn)而生，該殺生劑對(duì)海水系統(tǒng)中的貝類、軟體類海生污損物具有優(yōu)異的殺滅抑制效果，且不會(huì)對(duì)金屬產(chǎn)生腐蝕，在自然環(huán)境中易降解，是一種環(huán)境友好型海水系統(tǒng)水處理用海生物及細(xì)菌抑制劑[8]。2024年，廣東大鵬液化天然氣有限公司啟動(dòng)了我國(guó)首個(gè)基于LNG冷源的冷水養(yǎng)殖示范項(xiàng)目，實(shí)現(xiàn)了“綠色能源”與“藍(lán)色糧倉(cāng)”的跨界融合，該項(xiàng)目利用LNG與海水換熱后產(chǎn)生的大量?jī)?yōu)質(zhì)的低溫、無菌海水開展養(yǎng)殖生產(chǎn)，主要養(yǎng)殖本地石斑魚、花鱸、鯛科魚類、鮑魚和龍蝦等高經(jīng)濟(jì)價(jià)值海產(chǎn)品[9]。

本研究旨在通過觀察在不同濃度海生物殺生劑處理下，花鱸幼魚的急性中毒表現(xiàn)，以了解該殺生劑對(duì)花鱸幼魚的毒性影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用花鱸幼魚來自深圳市大鵬新區(qū)西沖同一口土塘培育的魚苗，挑選體表無傷、無畸形，對(duì)刺激反應(yīng)正常，規(guī)格整齊的魚苗為試驗(yàn)用魚。試驗(yàn)魚平均體長(zhǎng)（2.11±0.11）cm，平均體質(zhì)量（0.14±0.03）g。試驗(yàn)用海生物殺生劑主要活性成分為雙胍鹽聚合物，有效濃度為95%。試驗(yàn)用水為沙濾后曝氣處理24 h以上的自然海水。其余試驗(yàn)儀器設(shè)備有美國(guó)維賽YSI professional plus多參數(shù)水質(zhì)分析儀（用于測(cè)量溫度、pH值、鹽度、溶解氧等參數(shù)）、電子分析天平、充氧泵、儲(chǔ)水桶、25 L敞口魚缸等。

1.2 試驗(yàn)方法

根據(jù)GB/T 27861—2011《化學(xué)品魚類急性毒性試驗(yàn)》，在水溫24 ℃、鹽度32‰、pH值8.1和溶解氧大于6 mg/L試驗(yàn)條件下，對(duì)試驗(yàn)魚馴養(yǎng)7 d直至狀態(tài)穩(wěn)定，試驗(yàn)開始前24 h停止投喂。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)10、20、30、40、50、60 mg/L等6個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組試驗(yàn)魚10尾，采用半靜態(tài)法，將試驗(yàn)魚暴露于不同濃度的海生物殺生劑水溶液中96 h。在試驗(yàn)開始后的24、48、72 h和96 h時(shí)分別觀測(cè)并記錄受試魚出現(xiàn)的任何異常反應(yīng)，如死亡、失去活動(dòng)能力、異常游動(dòng)等，均予以詳細(xì)記錄。若輕觸魚體尾鰭5 s內(nèi)無任何可見反應(yīng)（如鰓蓋活動(dòng)），即判定為死亡，并記錄死亡數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)由SPSS軟件概率回歸分析得出，計(jì)數(shù)原理如下：

以濃度的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)，通過概率回歸方程，將24、48 h和96 h的半致死濃度（LC50）和95%的置信限采用寇氏法（Karber 氏法）求得：

lg LC50=XK- C×∑[Pi + P（i+1）]

式中：XK為最大劑量的對(duì)數(shù)；C為相鄰劑量比值的對(duì)數(shù)；Pi+P（i+1）為各劑量組的死亡率。

LC50的95%可信限=lg（lg LC50 ± 1.96×Slg LC50），其中 Slg LC50=C{∑[Pi（1- Pi）]}。

式中：Slg LC50為lg LC50的標(biāo)準(zhǔn)誤差。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)過程中，空白組和10 mg/L濃度試驗(yàn)組的花鱸幼魚均未出現(xiàn)死亡，且正常進(jìn)食。20 mg/L濃度試驗(yàn)組開始出現(xiàn)死亡，累計(jì)死亡5尾，部分試驗(yàn)魚體色發(fā)黑。30 mg/L濃度試驗(yàn)組8 h內(nèi)死亡3尾，累計(jì)死亡9尾，部分試驗(yàn)魚出現(xiàn)不進(jìn)食、體色發(fā)黑等現(xiàn)象。40 mg/L濃度試驗(yàn)組8 h內(nèi)死亡3尾，并有2尾體色明顯發(fā)黑，72 h時(shí)累計(jì)死亡10尾，全部試驗(yàn)魚均中毒死亡。50 mg/L濃度試驗(yàn)組8 h內(nèi)死亡4尾，16 h內(nèi)全部試驗(yàn)魚中毒死亡。60 mg/L濃度試驗(yàn)組8 h內(nèi)全部試驗(yàn)魚中毒死亡。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，空白對(duì)照組的死亡率為0，試驗(yàn)期間暴露條件維持相對(duì)恒定，溶解氧含量均大于6 mg/L，試驗(yàn)有效，結(jié)果詳見表1。

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0進(jìn)行概率回歸分析，結(jié)果見表2。通過分析得出不同暴露時(shí)間下Probit50濃度（LC50）。對(duì)表2中不同時(shí)間的Probit回歸分析后得到的截距與斜率，整理得出不同暴露時(shí)間下的毒力回歸方程。該海生物殺生劑對(duì)花鱸幼魚的96 h-LC50為21.1×0.95=20.05 mg/L，95%置信下限為15.61 mg/L，95%置信上限為24.45 mg/L，安全濃度（SC）：SC=0.1×（96 h-LC50）=2.01 mg/L。

3 討論

3.1 海生物殺生劑對(duì)花鱸幼苗毒性評(píng)價(jià)

半致死質(zhì)量濃度（LC50）是評(píng)估藥劑對(duì)試驗(yàn)魚毒性的主要指標(biāo)[10]，LC50值越大，表明該藥劑的毒性越小[11]。在生產(chǎn)實(shí)際中，通常以96 h半致死質(zhì)量濃度（96 h- LC50）作為評(píng)估藥劑毒性的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)有毒物質(zhì)對(duì)魚類急性毒性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可將其分為4個(gè)等級(jí)[12]：試驗(yàn)藥劑的96 h-LC50＜0.1 mg/L為劇毒；0.1 mg/L＜96 h-LC50＜1 mg/L為高毒；1 mg/L＜96 h- LC50＜10 mg/L為中毒；而96 h-LC50＞10 mg/L為低毒。根據(jù)這一標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)所用的海生物殺生劑對(duì)花鱸幼魚的96 h-LC50為20.05 mg/L，說明該海生物殺生劑對(duì)花鱸幼魚屬于低毒級(jí)別。

3.2 海生物殺生劑對(duì)花鱸幼魚的影響

海生物殺生劑的作用機(jī)理是物理殺生，與氯及氯的化合物、溴、臭氧和碘等氧化性殺生劑不同，后者是利用其強(qiáng)氧化性破壞海生物細(xì)胞，達(dá)到殺生效果，長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生抗藥性[8]。根據(jù)產(chǎn)品使用說明，本試驗(yàn)的海生物殺生劑使用時(shí)根據(jù)具體的進(jìn)水量，每次連續(xù)加藥10～15 h，加藥濃度為0.005～0.02 mg/L，加藥頻率為3～4次/月，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，可根據(jù)水體中污損生物的情況及時(shí)調(diào)整加藥劑量和頻率。該加藥濃度遠(yuǎn)低于對(duì)花鱸幼魚的安全濃度2.01 mg/L，因此在實(shí)際生產(chǎn)過程中，該海生物殺生劑的使用對(duì)花鱸幼魚的影響可以忽略不計(jì)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 虞為，楊育凱，林黑著，等.?；撬釋?duì)花鱸生長(zhǎng)性能、消化酶活性、抗氧化能力及免疫指標(biāo)的影響[J].南方水產(chǎn)科學(xué)，2021，17（2）：78-86.

[2] 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局，全國(guó)水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì).2023年中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2023：6.

[3] 黃皓，范嗣剛，王鵬飛，等.基于微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)6個(gè)花鱸群體的遺傳多樣性分析[J].南方水產(chǎn)科學(xué)，2022，18（1）：99-106.

[4] 楊浩翔.淺談環(huán)保殺生劑EGD在LNG接收站的應(yīng)用[J].山東化工，2022，51（14）：198-200.

[5] 張海燕，汪嵐.綠色殺生劑EGD的優(yōu)劣比較及實(shí)際應(yīng)用[J].廣州化工， 2011， 39（20）： 124-125+150.

[6] 欒安博，周熠，邱美堅(jiān)，等.季銨鹽與聚季銨鹽復(fù)配對(duì)海生物殺滅性能的評(píng)價(jià)[J].工業(yè)水處理， 2017， 37（4）：51-52+98.

[7] 趙紅，嚴(yán)雨帆，張翀，等.綠色殺生劑EGD控制貽貝污損的試驗(yàn)研究[J].武漢理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2005（4）：26-29.

[8] 陳現(xiàn)強(qiáng).殺生緩蝕劑EGD在LNG接收站中的應(yīng)用分析[J].山東工業(yè)技術(shù)，2022（2）：73-76.

[9] 央廣網(wǎng).陸地建起“海洋牧場(chǎng)”！全國(guó)首個(gè)液化天然氣冷能養(yǎng)殖示范項(xiàng)目出魚[EB/OL].（2024-01-19）. https：//news.cnr.cn/native/gd/20240119/t20240119_526563249.shtml.

[10] 張建明，姜華，田甜，等.3種水產(chǎn)藥物對(duì)鱸鯉和白甲魚的急性毒性試驗(yàn)[J].水產(chǎn)科學(xué)，2018，37（5）：628-633.

[11] 劉康，盧玉典，李光略，等.3種水產(chǎn)漁藥對(duì)金邊鯉的急性毒性試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2023，44（11）：78-83.

[12] 秦志清，杜全新，樊海平，等.8種常用漁藥對(duì)半刺厚唇魚幼魚的急性毒性[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，31（2）：125-128.

Acute toxicity test of marine biocide to juvenile Lateolabrax japonicus

ZHUANG Jiegui1， NIU Junfeng2， HUANG Xiaolin3

（1.Shenzhen Longqizhuang Industrial Development Co.， Ltd， Shenzhen 518000，China；2.Guangdong Dapeng LNG Company Ltd，Shenzhen 510000，China；3. Shenzhen Base of South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shenzhen 518121，China）

Abstract：To investigate the acute toxicity of a marine biocide （active ingredient： biguanide salt polymer） to juvenile Lateolabrax japonicus，specimens with body length of （2.11 ± 0.11） cm and body weight of （0.14 ± 0.03） g were selected as experimental subjects and randomly divided into 7 groups， including 6 different concentration experimental groups and 1 blank control group. The experiments were conducted using a semi-static method， and the mortality and poisoning symptoms of the experimental fish were observed and recorded at 1， 8， 16， 24， 48， 72， and 96 hours after the start of the experiment. The results showed that there was no mortality at the concentration of 10 mg/L of marine biocide， and mortality began to occur at 20 mg/L， and all experimental fish died at concentrations exceeding 40 mg/L; according to the experimental data， the 96-hour median lethal concentration （96h-LC50） was approximately 20.05 mg/L， the 95% confidence lower limit was 15.61 mg/L， the confidence upper limit was 24.45 mg/L， and the safety concentration was 2.01 mg/L.

Key words：marine biocide; biguanide salt polymer; juvenile; Lateolabrax japonicus; acute toxicity

（收稿日期：2024-05-14）