郭婷婷 趙梓吟 何明陽 吳天松 徐斌 張斌 吳澤華 韓冰

［摘要］ 目的

探討[STBX]STX5對肝細(xì)胞癌（HCC）轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制。

方法 收集2015年1—12月我院確診為HCC的36例患者的臨床資料，分析腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性。將人肝癌細(xì)胞MHCC97H分為A、B組，分別轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒、過表達(dá)STX5質(zhì)粒，將人肝癌細(xì)胞Huh7分為C、D組，分別轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒、STX5敲減慢病毒，采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測A～D組細(xì)胞內(nèi)STX5蛋白表達(dá)水平，采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測A～D組細(xì)胞的遷移能力，采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測A～D組細(xì)胞的遷移能力。對A、B組細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序分析獲得的差異基因進(jìn)行GO功能和KEGG信號通路富集分析，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測A、B組細(xì)胞最顯著差異表達(dá)基因的水平。將MHCC97H細(xì)胞分為E～H組，分別轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒、過表達(dá)STX5質(zhì)粒、陰性對照質(zhì)粒＋Sarilumab、過表達(dá)STX5質(zhì)粒＋Sarilumab，采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測E～H組細(xì)胞的遷移能力，采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測E～H組細(xì)胞的遷移能力。

結(jié)果 腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與患者的BMI、有無乙型肝炎病毒感染、腫瘤數(shù)量有關(guān)（P<0.05）。Western blot檢測結(jié)果顯示，B組與A組、C組與D組比較，細(xì)胞中STX5的表達(dá)顯著增高（t=48.86、31.09，P<0.05）。Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B組與A組、C組與D組比較，細(xì)胞遷移能力和劃痕愈合百分比顯著升高（t=7.95～31.09，P<0.05）。GO和KEGG富集分析顯示，A、B組細(xì)胞差異基因主要富集在細(xì)胞遷移、炎癥等相關(guān)功能和通路上；RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B組細(xì)胞中IL-6 mRNA的表達(dá)水平顯著高于A組細(xì)胞（t=23.69，P<0.05）。Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，G組和E組、H組和F組比較，細(xì)胞遷移能力和劃痕愈合百分比均顯著降低（t=2.94～24.39，P<0.05）。

結(jié)論 STX5可能通過上調(diào)IL-6 mRNA表達(dá)來促進(jìn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

［關(guān)鍵詞］ Qa-SNARE蛋白質(zhì)類；白細(xì)胞介素6；癌，肝細(xì)胞；基因表達(dá)調(diào)控，腫瘤；腫瘤浸潤；腫瘤轉(zhuǎn)移

［中圖分類號］ R735.7;R730.261??? ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

目前，在全球范圍內(nèi)，原發(fā)性肝癌中肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）約占90%，因?yàn)镠CC細(xì)胞具有高侵襲性和易轉(zhuǎn)移性，致患者的5年存活率較低[1]，即使近年來在肝癌的診斷和治療方法上取得了一定的進(jìn)展，但患者術(shù)后復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率仍然居高不下[2]。因此，臨床迫切需要開發(fā)有效的HCC治療靶點(diǎn)，以改善患者的預(yù)后，延長患者的生存期。

STX5為一種單向Ⅳ型膜蛋白，幾乎在機(jī)體的所有的細(xì)胞中均有表達(dá)，是syntaxin家族的重要成員，其主要功能是作為受體，與可溶性N-乙基馬來酰亞胺敏感因子結(jié)合，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)囊泡[3-4]。本課題組先前的研究發(fā)現(xiàn)，STX5可以通過介導(dǎo)PI3K/mTOR信號通路抑制HCC細(xì)胞的黏附，進(jìn)而促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移[5]。研究表明，促炎細(xì)胞因子如IL-1β、TNF-α和IL-6等在腫瘤微環(huán)境中有助于腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展及其轉(zhuǎn)移，尤其是IL-6被認(rèn)為是促進(jìn)多種惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的慢性炎癥細(xì)胞因子[6-8]。然而STX5促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移是否有IL-6的參與目前尚不明確。本研究擬通過探究STX5與IL-6之間的調(diào)控關(guān)系，探討STX5對于HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制，并為進(jìn)一步尋找HCC的診斷和治療靶點(diǎn)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人肝癌細(xì)胞系Huh7和MHCC97H細(xì)胞（中國上?？茖W(xué)院細(xì)胞庫），STX5敲減慢病毒、陰性對照慢病毒、過表達(dá)STX5質(zhì)粒、陰性對照質(zhì)粒和病毒感染試劑（上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司），STX5抗體（英國Abcam公司），GAPDH、β-actin（美國CST公司）。STX5、IL-6、PDL-1、CD36、SLC2A14、GAPDH引物（上海生工生物工程股份有限公司），全波長多功能酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司），PrimeScrip RT試劑盒（日本TaKaRa公司）以及沙利魯單抗（美國MCE生物科技公司）。

1.2 研究方法

1.2.1 腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性分析 選取我院2015年1—12月確診為HCC行手術(shù)治療的患者36例，術(shù)前均未進(jìn)行放化療治療，并均簽署知情同意書。收集所有患者的臨床資料，包括年齡、性別、BMI、甲胎蛋白（AFP）、腫瘤直徑、有無肝硬化、有無酒精史、有無乙型肝炎病毒感染以及腫瘤數(shù)量等。根據(jù)患者HCC組織中的STX5染色評分結(jié)果，將36例患者分為STX5高表達(dá)組18例（6～10分）和STX5低表達(dá)組18例（<6分）。分析腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性。

1.2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 在6孔板上分別接種Huh7細(xì)胞和MHCC97H細(xì)胞，加入全營養(yǎng)培養(yǎng)基（DMEM、10%的胎牛血清和1%的青霉素/鏈霉素雙抗），于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2的培養(yǎng)箱當(dāng)中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)MHCC97H細(xì)胞的融合度達(dá)到70%～90%時(shí)，分為A、B兩組，A組細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒，B組細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)STX5質(zhì)粒。當(dāng)Huh7細(xì)胞的融合度達(dá)30%～50%時(shí)，分為C、D兩組，C組細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒，D組細(xì)胞轉(zhuǎn)染STX5敲減慢病毒。4組細(xì)胞轉(zhuǎn)染完成后，繼續(xù)培養(yǎng)48 h用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 蛋白免疫印跡（Western blot）實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞中STX5的相對表達(dá)量 提取轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的A～D組細(xì)胞中的總蛋白，并用RIPA裂解緩沖液進(jìn)行分解。用BCA試劑盒和酶標(biāo)記儀測定蛋白質(zhì)濃度。95 ℃下孵育10 min后，用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離蛋白裂解產(chǎn)物（20SymbolmA@g），并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉后，用特異性一抗在4 ℃條件下孵育12 h，然后與二抗在室溫下孵育約1.5 h，用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)讀取蛋白質(zhì)條帶。最后使用Image J軟件分析目的條帶STX5及內(nèi)參β-actin灰度值，以STX5/β-actin灰度值表示相對表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次并計(jì)算均值。

1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測HCC細(xì)胞的遷移能力

將轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的A～D組細(xì)胞中的培養(yǎng)基，更換為無血清DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。然后將各組5×104個(gè)細(xì)胞種植于不含血清的DMEM培養(yǎng)基的Transwell上室（每孔8 μm），下室為含有30%胎牛血清的DMEM，于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。用多聚甲醛將遷移到下室的細(xì)胞在室溫下固定30 min，然后再用0.5%的結(jié)晶紫染色30 min，最后用PBS清洗去除多余的結(jié)晶紫。使用光學(xué)顯微鏡對染色細(xì)胞進(jìn)行拍照，使用Image J軟件對遷移細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測HCC細(xì)胞的遷移能力

將轉(zhuǎn)染完成后培養(yǎng)48 h的A～D組細(xì)胞接種于6孔板中，當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)90%以上時(shí)，采用200 μL濾芯吸頭尖端在6孔板上劃痕，隨后，更換為含有2%胎牛血清的DMEM繼續(xù)培養(yǎng)48 h。用電子顯微鏡拍攝劃痕區(qū)域，分別于劃痕后第0、48小時(shí)時(shí)采集圖像，計(jì)算劃痕愈合百分比。劃痕愈合百分比=（0 h劃痕寬度－48 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度。

1.2.6 轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序及富集分析 將轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的A、B組MHCC97H細(xì)胞，委托上海吉?jiǎng)P基因醫(yī)學(xué)科技股份有限公司進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序以及富集分析，每組設(shè)置3個(gè)樣本。對兩組基因表達(dá)的結(jié)果進(jìn)行分析，獲得兩組間的差異基因（P<0.05），對差異基因進(jìn)行GO功能富集分析（http：//geneontology.org）以及KEGG通路富集分析（https：//www.genome.jp/kegg/pathway.html）。將兩組的差異基因按照P值進(jìn)行排序，選取前5個(gè)基因?yàn)樽铒@著差異基因，為后續(xù)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測的目標(biāo)基因。

1.2.7 RT-qPCR檢測IL-6等mRNA表達(dá)水平

將轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的A、B組MHCC97H細(xì)胞，用RNA-easy分離試劑提取全細(xì)胞RNA后，使用紫外分光光度計(jì)測定260、280 nm波長處的RNA樣本濃度以及吸光度（A）值，將RNA質(zhì)量在1.8

1.2.8 MHCC97H細(xì)胞回復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測抑制劑處理后HCC細(xì)胞的遷移能力 取融合度達(dá)70%～90%的MHCC97H細(xì)胞，分為E～H組，E組和G組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒，F(xiàn)組和H組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染過表達(dá)STX5質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染成功以后均再繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，G組和H組細(xì)胞棄去原培養(yǎng)基，加入IL-6的抑制劑沙利魯單抗6 μmol，再培養(yǎng)24 h；E組和F組細(xì)胞，棄去原培養(yǎng)液后，再培養(yǎng)24 h。通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)量（參照1.2.4中的方法），通過劃痕實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞劃痕后第0、48小時(shí)時(shí)劃痕愈合情況，并計(jì)算劃痕愈合百分比（參照1.2.5中的方法）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以[AKx-D]±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例表示，兩組之間的比較用確切概率法，STX5在腫瘤組織中的表達(dá)水平與HCC患者的臨床病理特征之間的關(guān)系使用Pearson方法分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)? 果

2.1 腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性

腫瘤組織中STX5表達(dá)水平與患者的性別、年齡及腫瘤直徑、血液AFP水平、有無肝硬化、有無飲酒史等指標(biāo)均無關(guān)（P＞0.05），而與患者BMI、有無乙型肝炎病毒感染以及腫瘤數(shù)量等顯著相關(guān)（P<0.05）。見表2。

2.2 A～D組細(xì)胞遷移侵襲能力的比較

Western blot檢測的結(jié)果顯示，A、B組MHCC97H細(xì)胞中STX5相對表達(dá)量分別為1.00±0.00、3.60±0.09，兩組間比較差異有顯著意義（t=48.86，P<0.05）；C、D組Huh7細(xì)胞中STX5相對表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.11±0.03，兩組間比較差異有顯著性（t=31.09，P<0.05），見圖1。Transwell實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，A、B組細(xì)胞遷移數(shù)目分別為（101.00±2.65）、（234.00±10.15）個(gè)，兩組比較差異有顯著性（t=21.96，P<0.05）；C、D組細(xì)胞遷移數(shù)目分別為（482.70±18.61）、（141.00±4.00）個(gè)，兩組比較差異有顯著性（t=31.09，P<0.05），見圖2。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測的結(jié)果顯示，A、B組細(xì)胞的劃痕愈合百分比分別達(dá)到（29.03±1.76）%、（47.07±3.51）%，兩組比較差異具有顯著意義（t=7.95，P<0.05）；C、D組細(xì)胞劃痕愈合百分比分別為（44.37±1.70）%、（27.07±2.80）%，兩組比較差異有顯著性（t=9.13，P<0.05），見圖3。

2.3 A、B組MHCC97H細(xì)胞差異基因分析和檢測

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序結(jié)果顯示，A組與B組中的差異基因共387個(gè)，其中196個(gè)差異基因上調(diào)，191個(gè)差異基因下調(diào)。GO功能富集分析結(jié)果顯示，差異基因顯著參與了炎癥的調(diào)控、細(xì)胞黏附等生物學(xué)功能。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，差異基因主要參與mTOR、JAK-STAT等通路的調(diào)控。對差異最顯著的前5個(gè)基因進(jìn)行RT-qPCR檢測，結(jié)果顯示，A組和B組細(xì)胞中STX5、IL-6 mRNA相對表達(dá)量比較差異具有顯著性（t=24.38、23.69，P<0.05），兩組間PDL-1、CD36、SLC2A14 mRNA相對表達(dá)量比較差異無顯著性（P＞0.05）。見表3。

2.4 MHCC97H細(xì)胞的回復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

劃痕實(shí)驗(yàn)檢測的結(jié)果顯示，E、G組細(xì)胞的劃痕愈合百分比分別達(dá)到（32.00±2.00）%、（25.00±3.61）%，兩組比較差異具有顯著意義（t=2.94，P<0.05）；F組和H組劃痕愈合百分比分別為（45.33±2.08）%、（35.67±3.22）%，兩組比較差異有顯著性（t=4.37，P<0.05），見圖4。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E、G組細(xì)胞遷移數(shù)目分別為（186.00±6.00）、（102.70±2.52）個(gè)，兩組比較差異具有顯著意義（t=22.18，P<0.05）；F組和H組細(xì)胞遷移數(shù)目分別為（453.30±14.19）、（235.00±6.25）個(gè)，兩組比較差異有顯著性（t=24.39，P<0.05），見圖5。

3 討? 論

目前，肝癌常見的治療方法主要包括手術(shù)切除、消融、肝移植、TACE、放化療、免疫療法、中藥治療等，但患者的長期存活率仍不理想。主要原因是由于肝細(xì)胞癌患者術(shù)后的高復(fù)發(fā)率和高轉(zhuǎn)移率[9]。因此，降低患者術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，探索導(dǎo)致肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)具有重要的臨床和社會(huì)意義。

STX5主要調(diào)控真核細(xì)胞中的分泌蛋白從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的早期運(yùn)輸。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中有著嚴(yán)格的質(zhì)量控制系統(tǒng)，新蛋白質(zhì)往往在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成加工，形成具有一定空間功能的蛋白質(zhì)[10]；而STX5的功能主要是保證蛋白分子正確折疊并且離開內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸送到高爾基體，防止蛋白質(zhì)功能的異?；蚴Щ頪11]，而腫瘤主要發(fā)病機(jī)制多是由于一些促癌分子或抑癌分子的錯(cuò)誤折疊和異常轉(zhuǎn)運(yùn)，致功能異常所致[12]。由mTOR通路降低肝癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附，致肝癌細(xì)胞從原發(fā)部位脫落，從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[5]。進(jìn)一步提示STX5可能作為促癌基因參與了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。

本研究首先收集了我院HCC患者的臨床病理組織標(biāo)本，對腫瘤組織STX5的表達(dá)水平與患者的臨床病理特征進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示腫瘤組織中STX5的表達(dá)水平與患者的BMI、有無乙型肝炎病毒感染和腫瘤數(shù)量顯著相關(guān)，提示STX5在HCC的發(fā)生和進(jìn)展中可能發(fā)揮著重要作用。本研究通過在MHCC97H細(xì)胞中構(gòu)建STX5過表達(dá)質(zhì)粒，在Huh7細(xì)胞中構(gòu)建敲減STX5慢病毒，并用Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示B組細(xì)胞中STX5的蛋白表達(dá)顯著高于A組細(xì)胞，D組細(xì)胞中STX5蛋白表達(dá)量顯著低于C組。然后本研究又進(jìn)一步探究STX5對HCC細(xì)胞遷移的影響，結(jié)果顯示，上調(diào)STX5后，B組細(xì)胞比A組細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)，下調(diào)STX5后，D組細(xì)胞比C組細(xì)胞的遷移能力明顯減弱，進(jìn)一步提示STX5可促進(jìn)HCC細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

為了探討STX5調(diào)控HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制，通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序，本研究GO功能富集分析發(fā)現(xiàn)，A組和B組細(xì)胞的差異基因顯著參與了炎癥的調(diào)控、細(xì)胞黏附等生物學(xué)功能，提示STX5可能通過影響炎癥的調(diào)控，進(jìn)一步影響HCC的進(jìn)展。通過KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，A組和B組細(xì)胞的差異基因主要參與mTOR、JAK-STAT等通路的調(diào)控，提示STX5可能通過影響PI3K/mTOR等炎癥相關(guān)通路促進(jìn)HCC的轉(zhuǎn)移。慢性炎癥已被公認(rèn)為是引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因之一[10]，而其中的細(xì)胞因子是腫瘤微環(huán)境（TME）的主要調(diào)節(jié)者，是癌細(xì)胞、腫瘤間質(zhì)和免疫系統(tǒng)之間的主要溝通橋梁[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/mTOR通路不僅參與調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖、生長、代謝和運(yùn)動(dòng)[15-16]，還參與了炎癥因子IL-6的調(diào)控。因此，對炎癥因子的調(diào)控可以作為腫瘤治療的有效介入策略。本研究結(jié)果顯示，STX5與炎癥調(diào)控相關(guān)，并可能通過這一途徑促進(jìn)HCC的轉(zhuǎn)移。

本研究對轉(zhuǎn)錄組測序獲得的前5個(gè)最為顯著的差異基因進(jìn)行RT-qPCR檢測，結(jié)果顯示B組細(xì)胞中STX5、IL-6 mRNA的表達(dá)水平顯著高于A組細(xì)胞，而兩組間PDL-1、CD36、SLC2A14 mRNA的表達(dá)水平比較無顯著差異，提示STX5可能參與了調(diào)控IL-6 mRNA的表達(dá)。IL-6及其相關(guān)細(xì)胞因子被認(rèn)為是炎癥和腫瘤之間的關(guān)鍵因子[17]。IL-6家族包含多個(gè)成員：IL-6、抑癌素M（OSM）、白血病抑制因子（LIF）、IL-11、IL-27以及IL-31等[18]。大多數(shù)IL-6家族的細(xì)胞因子與腫瘤患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)[19-20]。腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移和抗藥性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），IL-6可以通過激活STAT3和Snail等轉(zhuǎn)錄因子來促進(jìn)EMT，進(jìn)一步推動(dòng)腫瘤的轉(zhuǎn)移[19]。為了進(jìn)一步研究STX5是否通過調(diào)控IL-6的mRNA水平促進(jìn)HCC的轉(zhuǎn)移，本研究通過對G、H組細(xì)胞經(jīng)沙利魯單抗處理，E、F組細(xì)胞不處理，進(jìn)行回復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，加入抑制劑后，G組細(xì)胞比E組細(xì)胞的遷移能力明顯減弱，H組細(xì)胞比F組細(xì)胞的遷移能力明顯減弱。本課題組先前的研究也表明，STX5促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移的作用與促進(jìn)EMT是密切相關(guān)的[5]。結(jié)合本研究的結(jié)果，提示STX5可能是通過上調(diào)IL-6的mRNA水平促進(jìn)EMT，并進(jìn)一步促進(jìn)HCC細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

綜上所述，STX5具有促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移的作用，其機(jī)制不僅與EMT和PI3K/mTOR通路相關(guān)，還與上調(diào)IL-6 mRNA的水平密切相關(guān)。未來應(yīng)進(jìn)一步探究STX5、IL-6與腫瘤微環(huán)境之間調(diào)控的具體機(jī)制，為HCC的治療提供新思路。

倫理批準(zhǔn)和知情同意：本研究涉及的所有試驗(yàn)均已通過青島大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)（文件號QYFYWZLL26906）。所有試驗(yàn)過程均遵照《赫爾辛基宣言（1996版）》和中國有關(guān)臨床試驗(yàn)研究規(guī)范法規(guī)進(jìn)行。受試對象及其親屬已經(jīng)簽署知情同意書。

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[1]LI X， RAMADORI P， PFISTER D， et al. The immunological and metabolic landscape in primary and metastatic liver cancer[J]. Nat Rev Cancer， 2021，21（9）：541-557.