【摘 要】 目的：研究參考2020版《中國(guó)藥典》黃芪項(xiàng)下的加氨提取法測(cè)定玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷含量對(duì)其質(zhì)量控制的影響。方法：分別通過加氨提取法和氨洗法對(duì)玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，考察不同測(cè)定方法下黃芪甲苷的轉(zhuǎn)移率，并優(yōu)化加氨提取黃芪甲苷含量測(cè)定方法。結(jié)果：玉屏風(fēng)顆粒以加氨提取法測(cè)得的黃芪甲苷含量高于氨洗法所測(cè)含量，兩種方法測(cè)得的轉(zhuǎn)移率存在明顯差異，優(yōu)化的黃芪甲苷測(cè)定法各方法學(xué)考察試驗(yàn)RSD＜4%。結(jié)論：參考2020版藥典的黃芪甲苷測(cè)定法適用于玉屏風(fēng)顆粒，該法具有操作簡(jiǎn)便、黃芪甲苷轉(zhuǎn)化率高的特點(diǎn)，優(yōu)于氨洗法，作為玉屏風(fēng)顆粒的質(zhì)量控制方法可廣泛推廣。

【關(guān)鍵詞】 玉屏風(fēng)顆粒；黃芪甲苷；含量測(cè)定；加氨提取法；氨洗法

【中圖分類號(hào)】R284.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）12-0047-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.12.zgmzmjyyzz202412010

Influence of Different Astragali Radix Assay Method on Quality Control of Yupingfeng Granule

LIU Lu FU Chuhan MEI Yan

Guangdong Food And Drug Vocational-technical School，Guangzhou 510663， China

Abstract：Objective To studythe influence of 2020 Chinese pharmacopoeia astragaloside Ⅳassay methodunder Astragali radixitem on quality control of Yupingfeng Granule.Methods The content of astragaloside Ⅳ in Yupingfeng Granule was determined by ammonia-added extraction method and ammonia-washed method. Transfer rate of astragaloside Ⅳ measured by different methods was investigated. The ammonia-added extraction astragaloside Ⅳ assay method of Yupingfeng Granule was optimized.Results Astragaloside IV content of the ammonia-added extraction samples from Yupingfeng Granule was higher than the ammonia-washedsamples. The transfer rate measured by the two methods was significantly different. RSD of the optimized method for the determination of astragaloside IV was less than 4%.Conclusion With easy operation and high conversion rate， the astragaloside IV assay methodmodified from 2020 Chinese pharmacopoeia is applicable to Yupingfeng Granule， which is superior to ammonia-washed method and could be widely applied to quality control method for Yupingfeng Granule.

Key words：Yupingfeng Granule;Astragaloside Ⅳ;Determination;Ammonia-added Extraction Method; Ammonia-washed Method

2020年版中國(guó)藥典于2020年12月實(shí)施，與2015版藥典一部比較，中藥修訂了452個(gè)品種，其中包括了黃芪的黃芪甲苷含量測(cè)定方法的改變，由氨洗法改進(jìn)為加氨提取法［1-2］。在按藥典方法檢測(cè)黃芪藥材的日常藥品檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，2015版藥典方法以甲醇浸泡過夜后索氏提取，再以水飽和正丁醇萃取，最后氨洗并過D101型大孔樹脂柱純化，2020版藥典方法僅以含氨甲醇加熱回流即可，操作簡(jiǎn)便，樣品制備時(shí)間短，測(cè)得黃芪甲苷含量高，總體優(yōu)于2015版藥典方法。然而，以黃芪甲苷作含量測(cè)定指標(biāo)的大多數(shù)成方制劑，如玉屏風(fēng)顆粒，于2020版藥典中方法未作變更，仍采用氨洗法，樣品溶液制備耗時(shí)費(fèi)力，方法有待優(yōu)化［3-15］。同時(shí)，黃芪甲苷測(cè)定需加堿轉(zhuǎn)化，具有一定特殊性，制劑方法與藥材標(biāo)準(zhǔn)方法不一致，可能會(huì)影響制劑從投料生產(chǎn)、制備到成品檢測(cè)的質(zhì)量控制。作者對(duì)玉屏風(fēng)顆粒采用加氨提取法檢測(cè)黃芪甲苷的可行性進(jìn)行研究，通過比較加氨提取法和氨洗法黃芪甲苷測(cè)定結(jié)果，探討參考新版藥典的黃芪甲苷測(cè)定法對(duì)玉屏風(fēng)顆粒質(zhì)量控制的影響，并在此基礎(chǔ)上提出建立相關(guān)質(zhì)量控制方法的建議。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200，1260高效液相色譜儀- Alltech 3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。

1.2 試劑 提取樣品用甲醇、氨水為分析純（廣州化學(xué)試劑廠），乙腈為色譜純（Thermo Fisher），水為超純水（Millipore Adavantage A10制備）。

1.3 對(duì)照品、對(duì)照藥材及樣品 黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)：110781-201616；含量以93.0%計(jì)）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；玉屏風(fēng)顆粒（批號(hào)：180203、180905、181001）購(gòu)自廣東環(huán)球制藥有限公司；陰性對(duì)照為依玉屏風(fēng)顆粒處方工藝制成的缺黃芪樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同方法測(cè)定黃芪甲苷含量比較

2.1.1 玉屏風(fēng)顆粒不同制備方法樣品黃芪甲苷含量測(cè)定 2020版藥典玉屏風(fēng)顆粒黃芪甲苷含量測(cè)定方法即氨洗法，與加氨提取優(yōu)化法對(duì)比見2.2。

2.2 玉屏風(fēng)顆粒黃芪甲苷含量測(cè)定方法優(yōu)化

[JP2]2.2.1 液相條件 色譜柱：Waters Xbridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：乙腈-水（32∶68）；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)器：ELSD，漂移管溫度45 ℃，載氣流速1.5 L·min-1。[JP］2.2.2 樣品溶液制備 取玉屏風(fēng)顆粒樣品，研細(xì)，取約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入含4%濃氨試液的80%甲醇溶液100 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50 mL，蒸干，殘?jiān)铀?5 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取6次，每次15 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加80%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 專屬性考察 按玉屏風(fēng)顆粒工藝制備缺黃芪的陰性對(duì)照，取黃芪陰性對(duì)照，制成陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照品溶液、樣品溶液、黃芪陰性對(duì)照溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樣品黃芪甲苷色譜峰位置上無陰性干擾。如圖1所示。

2.2.4 線性范圍考察 取黃芪甲苷對(duì)照品加80%甲醇配制系列濃度的對(duì)照品溶液，以峰面積的對(duì)數(shù)（Y）對(duì)黃芪甲苷濃度的對(duì)數(shù)（X）進(jìn)行回歸，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果在59.14～236.57 μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=1.668 6X+7.947 4（r2=0.999 8）。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 同一樣品溶液（180905）重復(fù)進(jìn)樣6次， RSD為0.57%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一樣品溶液（180905）分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h進(jìn)行測(cè)定，RSD為0.79%。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（180905）制備6份樣品溶液，測(cè)定含量，RSD為2.41%。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品（180905），精密加入一定量黃芪甲苷對(duì)照品溶液，測(cè)定含量，計(jì)得平均回收率為101.03%，RSD為3.84%。見表1。

2.2.9 樣品測(cè)定 分別以藥典法和優(yōu)化方法測(cè)定多批樣品黃芪甲苷含量。見表2。

3 討論

3.1 2020版藥典黃芪甲苷含量測(cè)定法的特點(diǎn)和對(duì)成藥質(zhì)量檢測(cè)的影響 加氨提取法具有以下優(yōu)點(diǎn)：①無需提取后氨洗，減少操作步驟，誤差降低；②樣品制備時(shí)間短；③溶劑對(duì)黃芪甲苷的溶解度增加，提取的同時(shí)堿化，使得黃芪甲苷提取、轉(zhuǎn)化效率更高。玉屏風(fēng)顆粒益氣固表止汗，由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)三味組成，依藥典，每100 g本品含黃芪120 g，主要工藝為防風(fēng)提取揮發(fā)油，藥渣及余二味加水煎煮，煎液醇沉，回收乙醇后濃縮，制粒后噴揮發(fā)油。本研究選取的制劑為含黃芪處方加水提取的顆粒劑，是中藥制劑中常用工藝和劑型，經(jīng)試驗(yàn)，樣品制劑直接套用2020版藥典方法，會(huì)出現(xiàn)以下問題：①2020版藥典方法因黃芪甲苷測(cè)得含量較高，方法中省去除雜、濃縮的步驟，故檢測(cè)器測(cè)得響應(yīng)較低，不利于成分復(fù)雜、黃芪甲苷含量低的樣品測(cè)定，而且玉屏風(fēng)顆粒在提取后直接測(cè)定所得峰面積仍較小，不便于建立方法，為滿足檢測(cè)要求須提高樣品溶液濃度；②中成藥的提取工藝多以水為溶媒，溶劑含水易使樣品測(cè)定受其它成分和輔料的影響，玉屏風(fēng)顆粒在加入溶劑超聲提取后，多黏結(jié)，不易分散，影響目標(biāo)成分溶出和測(cè)定結(jié)果的Rw6yj3NCliLQ2RlQQhVIfg==重復(fù)性，需以回流法，通過加熱沸騰使樣品分散、溶解。

3.2 含測(cè)法變更對(duì)成藥源頭、生產(chǎn)的影響 2020版藥典除變更了黃芪甲苷測(cè)定方法外，還將限量標(biāo)準(zhǔn)從0.040%上調(diào)至0.080%，這將影響相關(guān)成藥的原料藥材準(zhǔn)入，因此成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亦應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。不同測(cè)定方法含量不同，但不同方法之間的提取效率、含量未發(fā)現(xiàn)有無明顯比例關(guān)系，不同方法計(jì)得的黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率存在明顯差異，因此方法變更可能需調(diào)整生產(chǎn)過程中以黃芪甲苷含量為指標(biāo)的質(zhì)量控制參數(shù)。

3.3 黃芪甲苷含量測(cè)定方法優(yōu)化考察 研究建立了玉屏風(fēng)顆粒的黃芪甲苷加氨提取測(cè)定法，方法學(xué)考察結(jié)果良好。對(duì)玉屏風(fēng)顆粒樣品提取方法進(jìn)行考察，分別以索氏回流、加熱回流提取6 h，結(jié)果含量差異不大，考慮操作簡(jiǎn)便性，選擇提取方法為加熱回流；分別以加熱回流提取1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、6 h，結(jié)果分別為0.6239 mg·g-1、0.7603 mg·g-1、0.8242 mg·g-1、0.8071 mg·g-1、0.7995 mg·g-1，故選擇提取時(shí)間為2 h；樣品提取后直接濃縮，殘?jiān)^難溶解，樣品溶液放置一段時(shí)間后有較多沉淀析出，通過正丁醇萃取后，濃縮殘?jiān)^易溶解，樣品溶液澄清，無明顯沉淀析出；比較水飽和正丁醇萃取對(duì)測(cè)定的影響，分別萃取4次、5次、6次，結(jié)果分別為0.6972 mg·g-1、0.6767 mg·g-1、0.8157 mg·g-1，故確定萃取次數(shù)為6次。本研究?jī)?yōu)化的玉屏風(fēng)顆粒黃芪甲苷含量測(cè)定方法切實(shí)可行，比原方法操作簡(jiǎn)便快捷，可為提高相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

本研究以玉屏風(fēng)顆粒為例進(jìn)行探討，認(rèn)為加氨提取法較氨洗法有優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用于成藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)具一定可行性，但質(zhì)量檢測(cè)方法的方法變更將影響成藥從源頭、過程到成品的質(zhì)量控制，建議完善、提高相關(guān)中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使與原料藥材測(cè)定方法一致。

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（收稿日期：2023-09-07 編輯：劉 斌）