摘要：【目的】分析廣西小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及促生、防病、產(chǎn)酶活性，為小花老鼠簕種群恢復(fù)及篩選可 利用菌種資源提供參考依據(jù)。【方法】采用稀釋涂布法對(duì)小花老鼠簕根、莖、葉及根際土壤可培養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行分離、純化； 對(duì)菌株的16S rRNA序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序結(jié)果經(jīng)EzBioCloud比對(duì)確定菌株的分類地位；通過功能培養(yǎng)基對(duì)菌株的促生[溶磷、固氮、產(chǎn)吲哚乙酸（IAA）和分泌鐵載體]、防?。ㄏ憬犊菸。┘爱a(chǎn)酶（蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶）活性進(jìn)行分析?！窘Y(jié)果】從小花老鼠簕根、莖、葉及根際土壤共篩選獲得細(xì)菌159株，根據(jù)菌落形態(tài)及16SrRNA測(cè)序結(jié)果排除重復(fù)后為65株，隸屬于8目7科14屬，其中芽孢桿菌屬（Bacillus）為優(yōu)勢(shì)菌屬，占分離菌株的64.62%，同時(shí)發(fā)現(xiàn)1株潛在新種（Gxun-T66），與已發(fā)現(xiàn)菌株相似性僅為98.49%；植物促生防病活性結(jié)果顯示，溶磷菌株34株、固氮菌株31株、產(chǎn) IAA菌株20株、分泌鐵載體菌株17株，其中北澳伯克霍爾德氏菌（Burkholderia territorii）Gxun-T33的溶磷和分泌鐵載 體能力最強(qiáng)；29株對(duì)香蕉枯萎病尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum f.sp.Cubense）有明顯抑制作用，其中暹羅芽孢桿 菌（Bacillus siamensis）Gxun-T25的抑菌效果最好，抑菌率達(dá)69.67%；產(chǎn)酶活性結(jié)果顯示，產(chǎn)蛋白酶菌株56株，產(chǎn)淀粉 酶49株，產(chǎn)纖維素酶48株，同時(shí)產(chǎn)3種酶活性的菌株有34株，占分離菌株的52.31%?！窘Y(jié)論】紅樹植物小花老鼠簕富含 微生物資源且具備促生、防病及產(chǎn)酶活性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)1株潛在新種。

關(guān)鍵詞：小花老鼠簕；可培養(yǎng)細(xì)菌；促生；拮抗菌；酶活性

中圖分類號(hào)：S567

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2095-1191（2024）04-0973-12

Diversity of culturable endophytic bacteria in Acanthus ebracteatus of Guangxi and their growth-promoting， biocontrol effect and enzyme production activity

YIN Dou-dou1， HUANG Hong-zhi1， SONG Chao-dong1， LIU Rui1， LIANG Ying1， LU Jun-ming1， XIE Jun-jie1， YAN Bing2， SHEN Nai-kun1， ZHANG Hong-yan1*

（1School of Marine Sciences and Biotechnology， Guangxi Minzu University/Guangxi Key Laboratory for Polysaccharide Materials and Modifications， Nanning， Guangxi 530006， China; 2Guangxi Mangrove Research Center， Guangxi Academy of Sciences/Guangxi Key Lab of Mangrove Conservation and Utilization ，Beihai， Guangxi 536007， China）

Abstract：【Objective]The aim was to analyze the diversity of culturable bacteria of Acanthus ebracteatus in Guangxi and their growth-promoting， biocontrol effect and enzyme production activity， so as to provide reference for the recovery of A. ebracteatus ilicifolius population and the screening of available strain resources. 【Method】The culturable bacteria in the roots， stems， leaves and rhizosphere soil were isolated and purified by dilution coating method. The 16S rRNA se- quence of the strain was amplified by PCR， and the sequencing results were compared by EzBioCloud to determine thetaxonomic status of the strain. The growth-promoting [phosphate solubilization， nitrogen fixation， indoleacetic acid （IAA） production and siderophore secretion 1， disease prevention （banana fusarium wilt） and enzyme production （protease， amylase and cellulase） activities of the strains were analyzed by functional medium. 【Result ]A total of 159 strains of bacteria were screened from the roots， stems， leaves and rhizosphere soil of A. ebracteatus. According to the colony mor- phology and the 16S rRNA sequencing results， 65 strains were excluded after duplication， belonging to 8 orders，7 fami- lies and 14 genera. Among them， Bacillus was the dominant genus， accounting for 64.62 % of the isolated strains. At the same time， a potential new species （Gxun-T66） was found， and the similarity with the discovered strains was only 98.49%. The results of plant growth-promoting and biocontrol effect showed that 34 strains were phosphorus-solubilizing strains， 31 strains were nitrogen-fixing strains， 20 strains were IAA-producing strains and 17 strains were siderophore- secreting strains. Among them， strain Burkholderia territorii Gxun-T33 had the strongest ability to dissolve phosphorus and to secrete siderophore; 29 strains had obvious inhibition effect on Fusarium oxysporum f. sp. Cubense ，among which strain Bacillus siamensis Gxun-T25 had the best inhibition effect， with an inhibition rate of 69.67%. The results of the en- zyme activity showed that there were 56 protease-producing strains，49 amylase-producing strains，48 cellulase-producing strains and 34 strains producing three kinds of enzyme activities at the same time， accounting for 52.31% of the isolated strains. [Conclusion]The mangrove plant A. ebracteatus is rich in microbial resources and has the activities of promoting growth， biocontrol effect and enzyme production. At the same time， a potential new species has been.

Key words： Acanthus ebracteatus; culturable bacteria; growth-promoting; antagonistic bacteria; enzyme activity

Foundation items： National Natural Science Foundation of China （32060020） ; Guangxi discoverved Key Research and Development Project （Guike AB21220020， Guike AB21196019） ; Guangxi College Students' Innovation and Entrepreneurship Training Project（S202210608156）

0 引言

【研究意義】紅樹植物小花老鼠簕（Acanthusebracteatus）別名海簕根、黃魚簕等，是爵床科（Acan-一thaceae）老鼠簕屬（Acanthus）常綠亞灌木，其味微甘、性涼，含多種黃酮類物質(zhì)，有較大的藥用價(jià)值（陳玫伶等，2019）。目前小花老鼠簕已被列入瀕危（EN）級(jí)別，僅在我國海南、廣東和廣西有天然分布，廣西僅分布于防城港市江山半島西南側(cè)及黃竹江中游潮灘，總數(shù)量不足2000株（黃麗艷等，2020；張穎等，2021）。紅樹植物內(nèi)生及根際土壤微生物多樣性豐富，是理想促生、防病及產(chǎn)酶菌株的資源庫（王鈺，2019；吳秋雷，2020；朱天才等，2023）。因此分析廣西小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及促生、防病活性，對(duì)小花老鼠簕種群恢復(fù)及篩選可利用菌種資源具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】Cheng等（2019）研究表明紅樹林生態(tài)系統(tǒng)蘊(yùn)藏著豐富且極具特色的海洋微生物資源，該生態(tài)系統(tǒng)的特殊性造就了其植物根際土壤中微生物物種的多樣性。李喆等（2023）對(duì)海南紅樹植物小花老鼠簕的可培養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行研究，從小花老鼠簕的根、莖、葉、花以及根際土壤中分離獲得144株細(xì)菌，隸屬于18目26科37屬66種。韓敏敏等（2020）從海南西海岸4種真紅樹植物根際土壤中分離獲得23株細(xì)菌，隸屬于10目11科12屬，并發(fā)現(xiàn)2株潛在新種。孫超等（2021）對(duì)漳州九龍江河口紅樹林沉積物中細(xì)菌多樣性進(jìn)行分析，共篩選出202株厭氧細(xì)菌（82株專性厭氧細(xì)菌，120株兼性厭氧細(xì)菌），包括4個(gè)疑似新屬和4個(gè)疑似新種。黎芳婷等（2022）從3種真紅樹植物及其生境中分離獲得可培養(yǎng)細(xì)菌35株，隸屬于23科28屬，并發(fā)現(xiàn)11株潛在 的新菌。李王靖等（2023）從紅樹植物根際土壤樣 品中分離獲得120種可培養(yǎng)細(xì)菌，隸屬于35科47屬， 并發(fā)現(xiàn)5種潛在新菌株。植物根際促生菌（Plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR）具有固氮、溶磷、產(chǎn)生嗜鐵素和植物激素等多種能力，能促進(jìn)植物 營(yíng)養(yǎng)吸收，幫助植物抵抗生物與非生物脅迫，對(duì)植物 生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用（田婧等，2016）。目前，有關(guān)紅樹 林PGPR在國內(nèi)外已有較廣泛研究，何雪香等（2012） 從不同紅樹植物根際分離出固氮菌和解磷菌，率先 探討了這些菌株對(duì)秋茄（Kandelia candel）幼苗的促 生效果，研究發(fā)現(xiàn)固氮菌和解磷菌之間存在一定的 協(xié)同增效作用。Castro等（2018）從紅樹林中共分離 獲得細(xì)菌115株，并對(duì)其固氮、溶磷、產(chǎn)吲哚乙酸 （IAA）等促生特性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了1株兼具固氮及 溶磷活性的腸桿菌屬（Enterobacter sp.）MCR1.48， 該菌株能顯著促進(jìn)植樹造林常用樹種——金合歡 （Acacia polyphylla）的生長(zhǎng)。林鈺柵等（2022）從紅樹林根際土壤中篩選到1株高效解磷真菌Penicil-lium sp.PSF-FJ1，可有效促進(jìn)桐花樹幼苗生長(zhǎng)。楊 淼冷等（2022）從紅樹林根際土壤中分離獲得1株兼 具促生防病效果的菌株Klebsiella aerogenes S2，可 促進(jìn)番茄種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)。此外，紅樹林生態(tài) 系統(tǒng)中生物活性物質(zhì)如淀粉酶、纖維素酶和蛋白酶 也逐漸被挖掘，馬軍等（2016）從紅樹林根際土壤中 篩選出1株高產(chǎn)纖維素酶的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis JCHL0207；吳秋蕾（2020）從海南省文昌市月 亮灣紅樹林土壤樣品中分離獲得79株產(chǎn)淀粉酶菌株；符亞楠等（2023）從海南文昌紅樹林一海草床復(fù)合生態(tài)系統(tǒng)表層沉積物中共分離出111株產(chǎn)蛋白酶細(xì)菌，由此可見紅樹植物共生細(xì)菌及根際土壤細(xì)菌多樣性豐富，是潛在酶活性物質(zhì)重要來源。在香蕉種植中，由尖孢鐮刀菌（Fusarium oxyspormm f.sp.Cubense）引起的香蕉枯萎病對(duì)香蕉危害最為嚴(yán)重，生物防治具有高效、安全、綠色等特點(diǎn)，已成為香蕉枯萎病主要防治措施之一，因此高效拮抗菌株的篩選尤為重要（萬青等，2021）。Fan等（2021）從云南香蕉產(chǎn)區(qū)分離出2株對(duì)香蕉枯萎病菌有較強(qiáng)拮抗作用的芽孢桿菌YNO904和YN1419，其對(duì)病原菌抑制率分別為79.6%和81.3%，在溫室試驗(yàn)中對(duì)香蕉枯萎病的防治效果分別為82.6%和85.6%。Shen等（2022）從香蕉根圍土壤中篩選出1株高效尖孢鐮刀菌拮抗菌Bacillus siamensis Gxun-6，在盆栽條件下，該菌株對(duì)香蕉枯萎病的防治效果可達(dá)88.26%，同時(shí)可增加香蕉植株鮮重。楊迪等（2023）從不同作物根圍土壤中篩選獲得7株對(duì)香蕉枯萎病菌具有較強(qiáng)拮抗活性菌株，抑菌率最高達(dá)72.65%，其中菌株Burk-holderia cepacian Bc11盆栽試驗(yàn)防治效果最佳，可達(dá)68.89%?！颈狙芯壳腥它c(diǎn)】目前對(duì)紅樹植物小花老鼠簕的研究多集中于藥用價(jià)值、地理分布及其保護(hù)措施，而有關(guān)廣西地區(qū)小花老鼠簕內(nèi)生及根際可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及相關(guān)功能的研究尚未見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】全面解析廣西地區(qū)小花老鼠筋可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及相關(guān)功能，發(fā)掘菌種資源，為小花老鼠簕種群恢復(fù)及篩選可利用菌種資源提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1樣品來源廣西防城港市江山半島西南側(cè) （21°30'59.62\"N，108°13'35.24\"E）和黃竹江中游潮灘（21°38'98.94\"N，108°12'00.18\"E）小花老鼠簕植 株及其根際土壤。

1.1.2供試病原菌

香蕉枯萎病尖孢鐮刀菌由廣 西多糖材料與改性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室前期分離獲得。

1.1.3 培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基、Zobell 2216E培養(yǎng)基和CAS檢測(cè)培養(yǎng)基購自青島海博生物技術(shù)有限公司。YIM171培養(yǎng)基、NBRIP培養(yǎng)基、Ashby無氮培養(yǎng)基和含L-色氨酸的LB培養(yǎng)基參考李慧穎等（2021）的 方法配制；蛋白酶、淀粉酶檢和纖維素酶檢測(cè)培養(yǎng)基 參考楊桂柳（2015）的方法配制。 1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品處理

土壤樣品處理：去除小花老鼠簕

根表面的大塊土壤后使根系暴露，輕輕抖動(dòng)收集附著于根系的土壤為根際土壤（Edwards et al.，2015）。將2個(gè)采樣地樣品混勻后取3g根際土加入含27 mL無菌水的50 mL三角瓶中，180 r/min振蕩1 h，再用無菌水進(jìn)行梯度稀釋獲得10、102、103和 10-稀釋液，采用稀釋涂布法取各梯度稀釋液 100 μL 分別涂布于YIM171培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和Zobell 2216E培養(yǎng)基上。

根、莖和葉樣品處理參照劉魯峰等（2019）的方法并稍作改動(dòng)，將2個(gè)采樣地小花老鼠觴根、莖和葉組織混勻后洗凈，無菌水反復(fù)沖洗3次。75%酒精處理根組織3 min，莖和葉組織2 min，無菌水沖洗3 次。質(zhì)量體積比為0.15%的升汞溶液浸泡根組織3 min，莖和葉組織2 min，無菌水沖洗3次，用移液槍吸取最后一次沖洗樣品的無菌水50 μL涂布于配制好的YIM171培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和Zobel1 2216E培養(yǎng)基上作為對(duì)照組，驗(yàn)證表面消毒效果。將處理好的樣品各取0.2 g加入1.8 mL無菌水，用研磨儀研磨至勻漿，制成10'稀釋液，再用無菌水進(jìn)行梯度稀釋，得到102和 103稀釋液，采用稀釋涂布法取各梯度稀釋樣品 100 μL分別涂布于YIM171 培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和Zobell 2216E培養(yǎng)基上。

1.2.2可培養(yǎng)細(xì)菌的分離、純化及保藏

將涂布好 的培養(yǎng)基置于30°℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3～5d，適時(shí) 挑取單菌落進(jìn)行純化。根據(jù)菌落形態(tài)和生長(zhǎng)特征排 除重復(fù)后，用體積比為40%甘油，按照甘油：菌液= 1：1的比例接入凍存管中放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保藏。

1.2.3DNA提取與菌株鑒定

參照周雙清等（2010）的方法提取細(xì)菌DNA，使用細(xì)菌通用引物27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和1492R（5'-AAGGAGGTGATCCAGCC-3'）作為16S rRNA序 列擴(kuò)增的上、下游引物，PCR反應(yīng)體系50.0μL：2×Tag mix 25.0μL，上、下游引物各1.0μL，DNA模板1.0μL，ddH2O補(bǔ)足至50.0μL。擴(kuò)增程序：95℃預(yù) 變性4min；95℃1min，55℃1min，72℃2min，進(jìn)行32個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，委托武漢奧科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行16SrRNA測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng)EzBioCloud比對(duì)，將相似性小于98.65%定義為潛在新種（Kim et al.，2014），根據(jù)比對(duì)結(jié)果判斷 分離菌株的種屬。

1.2.4PGPR菌株篩選

將純化后的菌株挑取單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中活化1～2d，利用無菌水調(diào)整0D6o0=1，以此作為種子液。

溶磷菌株篩選：吸取3μL種子液接種于NBRIP 固體培養(yǎng)基上，30℃恒溫倒置培養(yǎng)1～5d，若在菌株 周圍出現(xiàn)透明圈，則證明該菌株具備溶解無機(jī)磷能 力，測(cè)量透明圈直徑（D）與菌落直徑（d），用D/d表示 解磷菌溶磷指數(shù)（趙龍飛等，2015）。

固氮菌株篩選：吸取3μL種子液接種于無氮 Ashby固體培養(yǎng)基上，30℃恒溫倒置培養(yǎng)1～5d，觀 察其生長(zhǎng)情況和菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如菌落 生長(zhǎng)良好且在菌落周圍出現(xiàn)透明圈說明該菌株具有 固氮能力。

產(chǎn)IAA菌株篩選：采用Salkowski比色法（Glick- mann and Dessaux，1995），將菌株接種于含0.5 g/L色氨酸的液體LB培養(yǎng)基中，于30°℃下180r/min振蕩培養(yǎng)2～3d。取1mL菌懸液經(jīng)12000r/min離心2 min后取上清100 μL，加入100 μL Salkowski比色 液，室溫下避光反應(yīng)30min，觀察顏色變化，出現(xiàn)紅 色或粉紅色為陽性，即該菌株具備產(chǎn)IAA能力。在波長(zhǎng)為530nm下測(cè)量反應(yīng)液OD值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線（配制濃度梯度為5、10、20、40、60、80和100mg/L的IAA溶液，在530nm下測(cè)量OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線）計(jì)算菌株產(chǎn)IAA濃度。陽性對(duì)照采用100μL50mg/L的IAA標(biāo)準(zhǔn)品與等體積比色液混合，空白對(duì)照為100μL液體培養(yǎng)基與等體積比色液混合。

分泌鐵載體菌株篩選：吸取3μL種子液接種于 CAS檢測(cè)培養(yǎng)基上，30C恒溫倒置培養(yǎng)1～5d，觀察 培養(yǎng)基顏色變化，若在菌落周圍出現(xiàn)橙黃色暈圈，即 為陽性，表明該菌株具備分泌鐵載體能力（朱芝宜 等，2020）。

1.2.5病原菌拮抗菌株篩選

采用平板對(duì)峙法（桑 建偉，2018）篩選對(duì)尖孢鐮刀菌具有拮抗作用的菌 株，取尖孢鐮刀菌菌餅置于PDA培養(yǎng)基中央，在距離中央2.5cm處接種子液3μL，每個(gè)培養(yǎng)基對(duì)稱選取4個(gè)點(diǎn)，每組3個(gè)重復(fù)。以只接尖孢鐮刀菌的PDA 培養(yǎng)基為對(duì)照，28℃恒溫培養(yǎng)3～5d。觀察分離菌 株對(duì)尖孢鐮刀菌抑制效果，待對(duì)照組病原菌鋪滿培 養(yǎng)皿時(shí)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量處理組及對(duì)照組菌落直徑， 計(jì)算抑菌率。抑菌率（%）=（對(duì)照組菌落直徑-處理 組菌落直徑）/對(duì)照組菌落直徑×100。

1.2.6酶活性菌株篩選

取3μL種子液分別接種 于蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶檢測(cè)培養(yǎng)基上，30℃ 下倒置培養(yǎng)3～5d，通過觀察透明圈有無及大小判斷 菌株產(chǎn)蛋白酶能力，并計(jì)算透明圈直徑（R）與菌落直徑（Rg）的比值K（K=R/R2），K值越大表明菌株產(chǎn)蛋白酶能力越強(qiáng)（冉麗媛，2014）。將接種后的淀粉酶檢測(cè)培養(yǎng)基置于30°℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d，待菌落長(zhǎng)勢(shì)良好后刮掉菌體，往培養(yǎng)基上滴加盧戈式（Lugol）碘液，觀察菌落周圍不被碘液染色的水解透明圈情況和大小，出現(xiàn)水解圈即為陽性，表明該菌株具備產(chǎn)淀粉酶能力。將接種后的纖維素檢測(cè)培養(yǎng)基置于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d，待菌落長(zhǎng)勢(shì)良好后刮掉菌體，往培養(yǎng)基中添加體積比為0.3%剛果紅溶液，觀察菌落周圍不被剛果紅溶液染色的水解圈情況和大小，出現(xiàn)水解圈即為陽性，表明該菌株具備產(chǎn)纖維素酶能力。

2結(jié)果與分析

2.1小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性分析結(jié)果

經(jīng)分離純化共篩選出細(xì)菌159株，其中根際土壤細(xì)菌78株，內(nèi)生菌81株。內(nèi)生菌中44株來自根部、25株來自莖部、12株來自葉部，根、莖和葉分離的內(nèi)生菌數(shù)目呈遞減趨勢(shì)。根據(jù)菌落形態(tài)、菌株活性、16SrRNA序列測(cè)序結(jié)果排除重復(fù)后，共得到功能不同、形態(tài)不同的細(xì)菌65株（表1），其中根際細(xì)菌40株，內(nèi)生菌25株，隸屬于8目7科14屬，其中芽孢桿菌屬（Bacillus）為優(yōu)勢(shì)菌屬，占分離菌株的64.62%。

2.2小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌促生、防病及產(chǎn)酶活性分析結(jié)果

如表2所示，在排除重復(fù)后的65株細(xì)菌中，溶磷菌株34株，占比52.31%；固氮菌株31株，占比47.69%；產(chǎn)IAA菌株20株，占比30.77%；分泌鐵載體菌株17株，占比26.15%。至少具備1種促生作用的菌株有54株，陽性率達(dá)83.08%，其中芽孢桿菌屬細(xì)菌有34株，占陽性菌株的62.96%，同時(shí)具備3種促生活性的菌株15株，芽孢桿菌屬菌株最多，占比66.67%。有29株對(duì)供試香蕉枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)出抑制作用，其中根際土壤細(xì)菌17株，占總數(shù)26.15%；內(nèi)生菌12株，占總數(shù)18.46%。產(chǎn)蛋白酶菌株有56株，占總數(shù)86.15%；產(chǎn)淀粉酶菌株有49株，占總數(shù)75.38%；產(chǎn)纖維素酶菌株有48株，占總數(shù)73.85%。至少具備1種酶活性的菌株有64株，陽性率達(dá)98.46%；同時(shí)具備產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶能力的菌株有34株，占分離菌株的52.31%。除此之外，本研究從小花老鼠簕根際土壤中分離獲得1株喜鹽芽孢桿菌屬（Halobacillus）細(xì)菌（Gxun-T66），與已發(fā)現(xiàn)菌株相似性僅為98.49%，推測(cè)為潛在新種有待進(jìn)一步研究。

2.3小花老鼠簕內(nèi)生細(xì)菌及根際細(xì)菌促生活性分析結(jié)果

在排除重復(fù)后的65株細(xì)菌中，菌株Gxun-T33溶磷能力最強(qiáng)，溶磷指數(shù)為4.50，其次是菌株Gxun-T28-2，溶磷指數(shù)為3.23（表3和圖1-A1～圖1-A3）；菌株Gxun-T33分泌鐵載體能力最強(qiáng)，其橙黃色暈圈直徑可達(dá)28.71mm，其次是菌株Gxun-T14，其橙黃色暈圈直徑可達(dá)20.15mm（表3和圖1-B1～圖1-B3）；菌株Gxun-T25固氮能力最強(qiáng)，菌落直徑為10.49mm，其次是菌株Gxun-T70，其菌落直徑為9.13mm（表3和圖1-C1～圖1-C3）；菌株Gxun-T27產(chǎn)IAA能力最強(qiáng)，接種到含色氨酸的LB培養(yǎng)基中3d后，IAA濃度為23.30mg/L，其次是菌株Gxun-T25，接種3d后，IAA濃度為22.63mg/L（表3）。因此，北澳伯克霍爾德氏菌（Burkholderia territorii）Gxun-T33的溶磷和分泌鐵載體能力最強(qiáng)；暹羅芽孢桿菌（Bacillus sia-mensis）Gxun-T25固氮能力最強(qiáng)，產(chǎn)IAA能力較強(qiáng)，該類菌株有望成為優(yōu)勢(shì)促生菌株。

2.4小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌抑菌活性分析結(jié)果

平板對(duì)峙試驗(yàn)表明，有29株菌株對(duì)供試香蕉枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)出抑制作用，其抑菌率在60%以上的菌株有6株，分別為菌株Gxun-T25、Gxun-T24、Gxun-G3、Gxun-Y4、Gxun-T65和Gxun-G6，其中菌株Gxun-T25抑菌率最高，為69.67%；其次是菌株Gxun-T24，抑菌率為68.19%（表4和圖2）。

2.5小花老鼠簕可培養(yǎng)細(xì)菌產(chǎn)酶活性分析結(jié)果

65株細(xì)菌中，菌株Gxun-Y4產(chǎn)蛋白酶能力最強(qiáng)，K值達(dá)4.36；其次是菌株Gxun-G27，其K值為3.88（表5和圖3-A1～圖3-A3）；菌株Gxun-J10產(chǎn)淀粉酶能力最強(qiáng)，R為36.31mm，其次是菌株Gxun-T16，R為34.49mm（表5和圖3-B1～圖3-B3）；菌株Gxun-T48-1產(chǎn)纖維素酶能力最強(qiáng)，R為31.82mm，其次是菌株Gxun-T16，R1為31.70mm（表5和圖3-C1～圖3-C3）。

3討論

紅樹林生境同時(shí)兼?zhèn)浜ｊ懱刭|(zhì)，具有高濕、高鹽及潮汐等環(huán)境特征，獨(dú)特的環(huán)境特征造就紅樹林生境中豐富的微生物資源。本研究對(duì)廣西防城港市2個(gè)地區(qū)小花老鼠簕內(nèi)生菌及其根際土壤細(xì)菌進(jìn)行多樣性分析，結(jié)果表明根際土壤可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性較為豐富，其次是根部，猜測(cè)原因在于紅樹植物凋落葉和細(xì)根為土壤積累有機(jī)質(zhì)，有機(jī)質(zhì)的積累為微生物生長(zhǎng)和繁殖提供營(yíng)養(yǎng)（劉秀，2018）。在分離獲得的細(xì)菌中，芽孢桿菌屬處于優(yōu)勢(shì)地位，與趙雅慧等（2018）對(duì)25個(gè)紅樹林樣品進(jìn)行可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性分析的結(jié)果相似。本研究分離菌株多樣性與李喆等（2023）報(bào)道的?？谑袞|寨港紅樹林保護(hù)中心的小花老鼠簕及其生境中可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性存在較大差異，可能原因是采樣地點(diǎn)不同，紅樹林生境會(huì)有所差別，也可能與選取的植物組織數(shù)量及分離培養(yǎng)基的種類有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步深入研究。

PGPR的促生作用機(jī)制可分為直接和間接2種形式，直接促生作用主要包括溶磷、固氮、產(chǎn)鐵載體和產(chǎn)植物激素等（朱天才等，2023）。在分離菌株中，至少具備1種促生作用的菌株有54株，陽性率達(dá)83.08%，其中芽孢桿菌屬細(xì)菌有34株，占陽性菌株的62.96%。同時(shí)具備3種促生活性的菌株有15株，隸屬于希瓦氏菌屬、沙雷氏菌屬、微球菌屬、芽孢桿菌屬、堿鹵桿菌屬和土壤芽孢桿菌屬，芽孢桿菌屬菌株最多，占比66.67%，芽孢桿菌屬細(xì)菌在植物促生方面具有重要作用。就分離菌株的應(yīng)用潛力而言，本研究分離獲得的菌株Gxun-T33溶磷指數(shù)達(dá)4.50，溶磷能力高于趙龍飛等（2021）從地黃中分離得到的菠蘿泛菌Pantoea ananatis DH92。與溶磷等促生特征相比，IAA和鐵載體生成是植物促生菌株篩選的優(yōu)選特征，本研究篩選獲得2株同時(shí)具備產(chǎn)IAA和鐵載體能力辣椒芽孢桿菌（B.zanthoxyli）Gxun-T28-1和褪色沙雷氏菌（Serratia marcescens）Gxun-T14，且前者兼具固氮活性。有關(guān)辣椒芽孢桿菌在植物促生方面的研究較多，孔亞東（2022）、劉澤（2022）研究表明辣椒芽孢桿菌對(duì)玉米和油菜植株具有促生作用。孟麗媛等（2022）從菜園土壤中分離得到1株高效固氮菌GN7經(jīng)鑒定為辣椒芽孢桿菌（B.zanthoxyli）。但褪色沙雷氏菌在植物促生方面的報(bào)道較少，因此菌株Gxun-T14的促生作用及促生機(jī)制有待進(jìn)一步研究。綜合菌株的促生效果，本研究篩選獲得的優(yōu)勢(shì)菌株Gxun-T33、Gxun-T28-1和Gxun-T14，后續(xù)將進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，進(jìn)一步研究其對(duì)小花老鼠簕的促生作用、定殖狀況及對(duì)根際土壤生境的影響，為開發(fā)小花老鼠簕專用生物菌肥奠定基礎(chǔ)，促進(jìn) 瀕危植物小花老鼠簕的繁育和保護(hù)。

PGPR的間接促生作用主要包括誘導(dǎo)植物產(chǎn)生 抗性、產(chǎn)生抗真菌代謝產(chǎn)物等。本研究以香蕉枯萎 病尖孢鐮刀菌為供試病原菌，篩選獲得到29株抑制 病原菌生長(zhǎng)的拮抗菌株，且抑菌率均大于40.00%。 其中菌株Gxun-T25（B.siamensis）抑菌作用最好， 抑菌率達(dá)69.67%，林志楷和林文珍（2019）報(bào)道表 明B.siamensis具有廣譜抑菌效果，對(duì)尖孢鐮刀菌、 火龍果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、 水稻稻瘟病原菌（Magnaporthe grisea）等均具有較 好抑制效果，在植物病害生物防治方面具有廣闊的 應(yīng)用前景，但B.siamensis在香蕉枯萎病防治方面的 應(yīng)用并不多見。前人研究表明，細(xì)菌能通過競(jìng)爭(zhēng)生 態(tài)位和營(yíng)養(yǎng)位置、誘導(dǎo)宿主系統(tǒng)產(chǎn)生耐藥性（Induc- tion of systemic resistance，ISR）及群體效應(yīng)信號(hào)干擾 等多種方式抑制病原菌生長(zhǎng)（徐志周等，2019）。本 研究?jī)H對(duì)抑制香蕉枯萎病尖孢鐮刀菌的拮抗菌株進(jìn) 行篩選，對(duì)于拮抗菌株的抑菌活性物質(zhì)和抑菌機(jī)制 有待進(jìn)一步研究。

在分離的 65 株細(xì)菌中至少具備1種酶活性的有64 株，陽性率達(dá)98.46%;同時(shí)具備產(chǎn)蛋白酶、產(chǎn)淀粉酶、產(chǎn)纖維素酶能力的菌株有 34 株，占分離菌株的52.31%。本研究分離獲得的菌株普遍具有分泌多種功能酶的能力可能與其生境有關(guān)，紅樹林易受間歇性潮水浸淹，導(dǎo)致大量海洋動(dòng)植物殘?bào)w和落葉聚集，可富集到大量具有降解蛋白質(zhì)、淀粉、纖維素等有機(jī)物的菌株（尹雁玲等，2022）。拮抗活性研究表明，多數(shù)（75.86%）對(duì)香蕉枯萎病尖孢鐮刀菌具有拮抗作用的細(xì)菌均具有產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶3種活性，由此猜測(cè)拮抗菌株不僅能通過產(chǎn)生化合物抑制病原菌，還可通過產(chǎn)生水解酶破壞真菌細(xì)胞壁，從而對(duì)病原菌起到抑制作用，與王卉等（2016）、Syed-Ab-Rahman 等（2018）、Trinh 等（2019）的研究結(jié)果一致。綜上所述，本研究分離獲得的部分菌株具有促生、防病及產(chǎn)酶等多種生物活性，可為農(nóng)業(yè)種植及生物防治提供菌株資源，也為紅樹植物小花老鼠觴種群恢復(fù)提供促生菌株。

結(jié)論

植物小花老鼠簕富含微生物資源且具備促生、 防病及產(chǎn)酶活性等生物活性，發(fā)現(xiàn)1株潛在新種。

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（責(zé)任編輯李洪艷）