【摘要】

目的：選取桂附顆粒最佳提取工藝。方法：以加水量，煎煮時(shí)間，煎煮次數(shù)作為參考因素，以肉桂酸含量及浸膏得率作為綜合指標(biāo)評(píng)分，選用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化桂附顆粒的提取制備工藝。結(jié)果：優(yōu)選桂附顆粒提取工藝的最佳條件為煎煮兩次，每次加入10倍的水，并且每次煎煮1.5 h。結(jié)論：該試驗(yàn)結(jié)果合理、可行，有效成分率高，適合工業(yè)生產(chǎn)的需要。

【關(guān)鍵詞】

桂附顆粒；正交試驗(yàn)；提取工藝

【中圖分類號(hào)】R284.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2024）16-0022-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.16.zgmzmjyyzz202416006

Study on the Extraction Process of Guifu Granules

PI FengjuanZHANG QinglianXU ZengLUO ChuanZHU Guanglin

Luzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Luzhou 646000， China

Abstract：

Objective mal extraction process for Guifu granules.Methods Using water addition， decoction time， and decoction frequency as reference factors， and cinnamic acid content and extract yield as synthetical evaluation index，the extraction and preparation process of Guifu granules was optimized using L9（34） orthogonal experiment.Result Optimal：The optimal preparation process for Guifu granules is to decoct twice， mixing 10 times the amount of water each time， decocting for 1.5 hours every time.Conclusion The results of this experiment are reasonable， and have a high effective ingredient rate， which is suitable for industrial production needs.

Keywords：

Guifu Granules; Orthogonal Test; Extraction Process

桂附顆粒為《傷寒論》中的經(jīng)典名方桂枝加附子湯，在我院臨床使用多年，已形成固定的協(xié)定處方，經(jīng)臨床初步驗(yàn)證，其治療陽虛漏汗證、陽虛感冒、產(chǎn)后汗出、漏汗、遺精、不明原因發(fā)熱以及由陽虛所致氣血運(yùn)行不暢引起的心悸、痹證、肩周炎等療效肯定［1］。經(jīng)臨床使用暫未發(fā)現(xiàn)毒副作用，是一種療效確切，使用安全方便的復(fù)方制劑［2］。為了進(jìn)一步確定桂附顆粒的提取工藝參數(shù)，通過正交實(shí)驗(yàn)，以君藥桂枝中肉桂酸的含量和干浸膏得率為指標(biāo)，對(duì)前期提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，為該制劑的制備提供合理可行的工藝條件參數(shù)。

1儀器與試藥

1.1儀器含四元泵、UV檢測(cè)儀、自動(dòng)進(jìn)樣器等的安捷倫高效液相色譜儀（型號(hào)1260）；萬分之一電子天平（型號(hào)FA2004）。

1.2試藥肉桂酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110786-201604），桂枝、白附片、白芍等藥材均由瀘州天植中藥飲片有限公司提供；炙甘草由成都康美藥業(yè)有限公司提供；除色譜乙腈外，其他試劑規(guī)格均為分析級(jí)，水為雙蒸水。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，考慮劑型原因，應(yīng)用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，考察加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間對(duì)以肉桂酸含量和干浸膏得率的影響。因素水平安排見表1。

根據(jù)L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，準(zhǔn)確稱取9份處方量藥味。將實(shí)驗(yàn)飲片混合均勻，分別置于1000 mL燒瓶中，按照上述因素水平表加入純化水提取。提取液趁熱過濾，冷卻，定容即得。

2.2干浸膏得率的測(cè)定參照水溶性浸出物測(cè)定法（中國藥典2020年版 通則2201）項(xiàng)下的方法測(cè)定。精密移取供試品溶液50 mL，置恒重蒸發(fā)皿中蒸干，烘箱105 ℃干燥3 h，干燥器中冷卻30 min，減去皿重，計(jì)算干浸膏得率。結(jié)果見表2。

2.3肉桂酸的含量測(cè)定方法

2.3.1色譜條件色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：285 nm；柱溫30 ℃，理論板數(shù)按肉桂酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000［3-5］。色譜圖如圖1所示。

2.3.2線性范圍考察精密稱取肉桂酸對(duì)照品適量，加甲醇溶液分別制成肉桂酸濃度為1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的溶液，分別精密量取上述對(duì)照品溶液10 μL注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，橫坐標(biāo)（X）為進(jìn)樣量μg，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=8221.1x-23.785，r=0.9995。結(jié)果表明：肉桂酸在0.01～0.2 μg內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3樣品供試液的制備取提取液適量，取上清液，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得，作為供試品溶液。

2.3.4測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中肉桂酸的含量，結(jié)果見表2，方差分析采用Spss 10.0軟件，結(jié)果見表3。

2.4結(jié)果根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果分析，影響出膏率、肉桂酸提取率因素順序?yàn)椋篊＞A＞B，A、B的影響較小，因素C對(duì)本處方提取有顯著性影響，即煎煮次數(shù)對(duì)本處方提取影響最大。根據(jù)直觀分析結(jié)果可知，優(yōu)選出的提取工藝為：A3B2C3，但因素A對(duì)本處方的指標(biāo)無顯著性影響，且直觀結(jié)果顯示A2和A3之間差異較小，故選擇A2，即加水量為10倍量；由于煎煮次數(shù)有顯著性影響，故對(duì)煎煮次數(shù)進(jìn)行單因素考察，分別設(shè)定煎煮次數(shù)為2次、3次、4次，每次加水10倍量，煎煮1.5 h，提取液200目篩過濾。

根據(jù)煎煮次數(shù)單因素試驗(yàn)結(jié)果分析，煎煮3次比煎煮2次出膏率增長(zhǎng)10.9%；肉桂酸（mg/g）增長(zhǎng)-0.5%；煎煮4次比煎煮3次出膏率增長(zhǎng)6.4%；肉桂酸（mg/g）增長(zhǎng)3.1%。

從加權(quán)評(píng)分表可看出，提取2次即能得到較高的評(píng)分，從生產(chǎn)實(shí)際考慮，故初步確定提取工藝為加水提取2次，每次10倍量，每次提取1.5 h，提取液200目篩過濾。

2.5驗(yàn)證試驗(yàn)按上述提取工藝進(jìn)行3批桂附提取進(jìn)工藝驗(yàn)證，結(jié)果見表6。

由三批驗(yàn)證數(shù)據(jù)可看出，出膏率均值為26.5%，RSD值為0.0%；肉桂酸含量平均值為0.3484 mg/g桂枝飲片，RSD值為0.8%。2個(gè)指標(biāo)數(shù)據(jù)比較平行，表明提取工藝重現(xiàn)性好，驗(yàn)證所確定的提取工藝穩(wěn)定可行，綜合實(shí)驗(yàn)所得，桂附提取工藝確定為：水煎煮提取兩次，每次加10倍量水，每次煎煮時(shí)間為1.5 h，提取液200目篩過濾。

3討論

桂枝加附子湯以桂枝湯為基礎(chǔ)，加白附片，并加重甘草用量而成。桂枝湯調(diào)和營衛(wèi)，解肌祛風(fēng)，附子溫經(jīng)復(fù)陽，固表止汗。俾邪去而陽回，則津液自復(fù)，諸癥自愈。該方以桂枝為君，桂枝中的主要成分包含揮發(fā)油、肉桂酸、香豆素、鞣質(zhì)等，由于桂皮醛屬于揮發(fā)油類，在煎煮過程中隨著水蒸氣蒸發(fā)而損失，考慮到肉桂酸為本組方的主要藥理活性成分［6］，故將肉桂酸作為本制劑的指標(biāo)性成分。另外由于中藥方劑強(qiáng)調(diào)的是其復(fù)方功效，是整體均衡原則、綜合辨證施治和協(xié)調(diào)作用的成果［7］，因而同時(shí)也將浸膏得率設(shè)置為考察因素，結(jié)合相關(guān)研究資料，本試驗(yàn)將兩者所占的權(quán)重設(shè)置相等。這樣處理比較全面，既保留了中藥湯劑的特點(diǎn)，又體現(xiàn)了中藥的整體復(fù)方功效和調(diào)理作用，可操作性強(qiáng)。

中藥材的提取溶劑和提取方式多種多樣，有水浸泡、有機(jī)試劑滲透、水煎煮、有機(jī)試劑回流等［8-9］。其中水煎煮最為方便，易于工業(yè)化大生產(chǎn)。研究表明桂枝中含有以桂皮醛為主的揮發(fā)性成分，尚含有有機(jī)酸類、鞣質(zhì)類、糖類、甾體類等成分?？紤]到本實(shí)驗(yàn)是以水煎煮為主，桂皮醛為揮發(fā)性成分，故以有機(jī)酸類主要成分肉桂酸為考察指標(biāo)，同時(shí)將浸膏得率考慮在內(nèi)，這樣既保留了中藥湯劑的特點(diǎn)，又可以充分提現(xiàn)中藥的整體復(fù)方功效和調(diào)理作用，符合醫(yī)院制劑實(shí)際配制的情況，便于患者的使用和接受。因此本文確定以浸膏得率和肉桂酸含量?jī)煞N指標(biāo)的綜合評(píng)分來優(yōu)選最佳水煎煮提取工藝。

正交設(shè)計(jì)方法在藥學(xué)試驗(yàn)研究中發(fā)揮著重要的作用［10-11］。分析表2數(shù)據(jù)可見，不同提取工藝條件下測(cè)得肉桂酸含量0.2548～0.3615 mg/g，處方中主要藥效指標(biāo)在優(yōu)化條件下可以提高50%，充分說明對(duì)提取工藝篩選的必要性。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)加水量，煎煮次數(shù)，煎煮時(shí)間等3個(gè)因素考察，優(yōu)化了桂附顆粒的提取工藝，通過正交試驗(yàn)篩選得出的最優(yōu)工藝條件為水煎煮提取兩次，每次加10倍量水，每次煎煮時(shí)間為1.5 h，并進(jìn)行等水平驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果標(biāo)明，該工藝穩(wěn)定可行，可得到較滿意的浸膏得率和肉桂酸含量測(cè)定結(jié)果，可使制劑質(zhì)量得到保證。

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（收稿日期：2023-11-17編輯：劉斌）