摘 要： C型愛知病毒（Aichivirus C）是新近證實的致山羊腹瀉病毒，本研究旨在分離山羊Aichivirus C并分析其基因組特征。在四川某暴發(fā)腹瀉的山羊場采集腹瀉糞便9份，1只病死羔羊的組織樣本13份，進行常見的腹瀉病原檢測。采用Vero細胞系對山羊Aichivirus C陽性樣本進行病毒分離，以PCR、間接免疫熒光試驗和電鏡技術對分離毒株進行鑒定，并擴增獲得其基因組序列。結果顯示：通過RT-PCR方法從9份山羊腹瀉糞便樣本中檢出Aichivirus C陽性8份，羔羊的組織樣本中檢出Aichivirus C陽性8份，其它常見的致山羊腹瀉病原在上述糞便和組織樣本中均未檢出。使用Vero細胞系成功從陽性樣品中分離到2株山羊Aichivirus C，其病毒滴度分別為106.5 TCID50·mL-1和105.9 TCID50·mL-1。獲得兩條近乎全長基因組序列，與GenBank中山羊源 Aichivirus C毒株的核苷酸相似性為78.8%～97.4%，與國內SWUN/F11/2019 毒株的核苷酸相似性為97.0%～97.4%。此外，本研究還從5份臨床陽性樣本中擴增出VP0、VP3和VP1基因完整序列。基于基因組的演化分析顯示：獲得的兩個病毒株與SWUN/F11/2019 毒株在系統(tǒng)發(fā)育樹上聚為一支。并且，這些毒株的VP0和VP1基因編碼蛋白也有獨特的氨基酸突變。綜上所述，本研究分離得到2株山羊Aichivirus C，獲得了其近乎全長基因組序列，與國內SWUN/F11/2019 毒株親緣關系最近，其VP0和VP1基因具有獨特的分子特征。本結果豐富了國內山羊源Aichivirus C的分子遺傳信息，為進一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物學特征提供了參考。

關鍵詞： 山羊；腹瀉；C型愛知病毒；分離鑒定；分子特征

中圖分類號： S852.659.6

文獻標志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）08-3612-11

收稿日期：2023-10-23

基金項目：西南民族大學“雙一流”項目資助（XM2023014）

作者簡介：程玉婷（1998-），女，四川達州人，碩士生，主要從事動物病原生物學研究，E-mail：1649846040@qq.com

通信作者：湯 承，主要從事動物病原生物學研究，E-mail：tangcheng101@163.com

Isolation and Molecular Characterization of Aichivirus C from Goats

CHENG" Yuting， ABI-Kehamo， YANG" Chen， ZHANG" Dingzhong， REN" Yunxin， YUE" Hua， TANG

Cheng*

（College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Southwest University for Nationalities， Chengdu，

Sichuan 610041， China）

Abstract：" Aichivirus C is a newly confirmed virus associated with caprine diarrhoea. The purpose of this study was to isolate goat Aichivirus C and analyze the genomic characteristics. Nine fecal samples and 13 tissue samples from a dead kid were collected from a goat farm with an outbreak of diarrhoea in Sichuan province， and used for testing the common pathogens associated with diarrhoea. Virus was isolated from Aichivirus C positive samples using Vero cells and identified by PCR， indirect immunofluorescence and electron microscopy. The complete genomes of the isolates were amplified and analyzed. Results were as follows： 8 fecal samples with diarrhoea and 8 tissue samples from a lamb were detected as positive for Aichivirus C by RT-PCR， and no other common diarrhoea-causing pathogens were detected in the above samples. Two Aichivirus C strains were successfully isolated from positive samples using Vero cells， and the virus titers were 106.5TCID50·mL-1 and 105.9TCID50·mL-1， respectively. The nearly full-length genomic sequences of both strains were obtained， which shared 78.8%-97.4% nucleotide identity with the known goat Aichivirus C genomes from GenBank and 97.0%-97.4% nucleotide identity with the SWUN/F11/2019 isolate from China. Furthermore， the VP0， VP3 and VP1 genes were successfully amplified from 5 clinical positive samples. Phylogenetic analysis based on the genome revealed that the two isolates were clustered with the SWUN/F11/2019 strain. Unique amino acid mutations were also revealed in the VP0 and VP1 genes. In summary， two strains of goat Aichivirus C were successfully isolated and the nearly full-length genomic sequences were obtained. Phylogentic analysis demonstrated that these two strains are closely related to the SWUN/F11/2019 strain from China， with a unique molecular characteristics in the VP0 and VP1 genes. The results enrich the molecular genetic information of Aichivirus C from goats in China and laid the foundation for further studies on the pathogenicity and molecular biological characteristics of goat Aichivirus C.

Key words： goat; diarrhea; Aichivirus C; isolation; molecular characterisation

*Corresponding author：" TANG Cheng， E-mail：tangcheng101@163.com

根據國際病毒分類委員會（ICTV）新近分類，嵴病毒屬（Kobuvirus，KoV）被分為愛知病毒（Aichivirus ）A～F 6個種以及未分類的挪威鼠嵴病毒、灰松鼠嵴病毒和蝙蝠嵴病毒3個種。依據KoV VP1基因系統(tǒng)發(fā)育分析，進一步將其劃分為20個基因型［1-3］。目前研究結果顯示，Aichivirus A可感染人、犬、貓等，Aichivirus B可感染牛、羊、雪貂，Aichivirus C可感染豬和山羊，Aichivirus D可感染牦牛和綿羊等，Aichivirus E和Aichivirus F分別可感染兔和蝙蝠等［4-5］。此外，研究表明Aichivirus可引起犬、貓、豬、牦牛和山羊等多種宿主的嚴重腹瀉［5-10］。

KoV是一種無囊膜球形單股正鏈RNA病毒，其基因組由一個5′非編碼區(qū)（UTR）、一個大的開放閱讀框（ORF）和一個3′UTR區(qū)組成。ORF編碼一個單一前體多聚蛋白，多聚蛋白的N端為非結構先導蛋白（L），其次為病毒結構蛋白P1（VP0、VP3和VP1）、非結構蛋白P2（2A、2B和2C）和P3（3A、3B、3C和3D）。對人Aichivirus 中的研究表明，VP0和VP1蛋白主要參與病毒的致病、細胞受體識別和抗原多樣性形成［11-14］，且VP1蛋白暴露于病毒粒子的表面，承受的環(huán)境壓力較大，容易導致其基因發(fā)生較大突變，是 KoV引起宿主免疫應答的主要蛋白［12］。對豬嵴病毒（PKoV）的研究表明，其VP3結構蛋白可能會影響復合物STAT2-IRF9和STAT2-STAT2的形成與入核，抑制INF-β誘導的信號通路，從而逃避細胞免疫［15］。

目前，已經確定Aichivirus C可以引起豬和山羊發(fā)生腹瀉［9-10］。山羊Aichivirus C最早于2012年在韓國首次檢測到［16］，隨后在美國、意大利和中國也被發(fā)現(xiàn)［4，10，17-20］ 。意大利檢測到的鹿源Aichivirus C與韓國檢測到的山羊Aichivirus C有較近的遺傳關系，表明該病毒可能具有跨種間傳播的能力［19］。2019年，本實驗室通過宏基因組學技術從四川山羊腹瀉糞便中發(fā)現(xiàn)Aichivirus C，首次證明該病毒在國內存在［4］。2022年，本實驗室成功分離到該病毒，并確定其為山羊的致腹瀉病原，并分析發(fā)現(xiàn)其VP0和VP1基因與國外毒株相比存在獨特的氨基酸突變，表明該病毒在中國具有獨特的變異趨勢 ［4，10］。2023年 Huang等［20］也通過宏基因組學技術從湖北地區(qū)死亡山羊肛門拭子中獲得一個山羊Aichivirus C近乎全長基因組，并分析其可能是一種不同于已知山羊Aichivirus C的基因型，進一步表明山羊Aichivirus C在我國具有遺傳多樣性［4，10，20］。本研究通過分離鑒定山羊Aichivirus C，并擴增其基因組序列與分析其分子生物學特征，為進一步研究該病毒的遺傳演化打下奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 臨床樣本與材料

糞樣樣品收集于2022年3月四川省某暴發(fā)腹瀉病羊場，樣本為9份新鮮的山羊腹瀉糞便。發(fā)病山羊的年齡在15 d到3月齡之間，主要臨床癥狀為發(fā)熱、水樣腹瀉和脫水，羔羊群腹瀉發(fā)生率達70%。病理剖解一只瀕死的1月齡山羊，結果顯示腸壁變薄，大腸和小腸內充滿氣體和黃色水樣內容物，其余臟器均無異常。同時采集了病死羊的心、肝、脾、肺、腎、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、氣管、食道組織樣本，于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

用于病毒分離的Vero傳代細胞系和用于鑒定的鼠抗山羊KoV VP1重組蛋白的陽性血清由西南民族大學動物醫(yī)學實驗室保存。

1.2 樣本處理及核酸提取

腹瀉糞便樣本以PBS按1∶5稀釋混勻，組織樣本研磨破碎按1∶5加入PBS渦旋混勻后反復凍融3次，處理后的糞便和組織樣本以10 000 r·min-1離心5 min，取上清液300 μL，按照Trizol試劑說明書提取總RNA，反轉錄試劑合成的cDNA于-20℃保存?zhèn)溆?。同時取300 μL上清液按照氯仿法提取DNA后，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 樣本PCR檢測

參照本實驗室前期建立的山羊Aichivirus C特異性PCR方法進行檢測［4］。所用引物序列如下：F：5′-GGGTGAATGTCAACCGCAAAT-3′，R：5′-AGTCCCGCCGTCACTTTGG-3′（擴增長度484 bp）。擴增其它潛在病原體如小反芻獸疫（PPRV）、牛冠狀病毒（BCoV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、山羊腸道病毒（CEV）、A群輪狀病毒（RoVA）、產腸毒素大腸桿菌（ETEC）和沙門菌（Salmonella）的特異性PCR方法按照已發(fā)表文獻進行［21-26］。上述病原的陽性對照核酸由本實驗室保存，引物由生工生物工程技術服務有限公司合成。陽性PCR產物送至生工生物工程有限公司進行雙向測序驗證。

1.4 病毒的分離

將PCR方法檢出的山羊Aichivirus C臨床樣本，按1∶5加入PBS渦旋混勻，置于-80 ℃中凍融3次，經4 ℃，5 000 r·min-1離心10 min后取上清，經0.45 μm濾器過濾后，將過濾液與單層Vero細胞進行共培養(yǎng)，37℃孵育2 h后吸出處理液，以維持液（無血清）繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察是否出現(xiàn)病變。出現(xiàn)80%細胞病變（CPE）以上時收集病毒。

利用病毒蝕斑純化技術對4代后CPE仍然穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)物進行純化，將分離純化得到的細胞毒做10倍梯度稀釋，從10-1稀釋到10-12；依次吸取100 μL病毒液培養(yǎng)于96孔板的Vero細胞上，每一個稀釋度培養(yǎng)于8個孔，37℃感作2 h后，棄掉上清，加入無血清DMEM細胞維持液，置于細胞培養(yǎng)箱（37℃， 5% CO2）培養(yǎng)，同時設立未接毒的正常細胞作為陰性對照，每天觀察并記錄細胞病變情況。病毒的TCID50依據Reed-Muench法計算。

1.5 病毒的鑒定

1.5.1 RT-PCR鑒定

收集細胞毒，采用1.2中介紹的方法提取RNA，并反轉錄為cDNA，再根據文獻報道的特異性的RT-PCR方法進行山羊Aichivirus C檢測［4］，擴增產物經1.5%瓊脂糖電泳鑒定后，將陽性擴增產物送至生工生物工程有限公司測序。

1.5.2 間接免疫熒光檢測

取0.1 mL已純化的病毒液按常規(guī)方法培養(yǎng)于6孔板中，設置3個重復試驗孔，出現(xiàn)CPE前棄掉維持液后用PBS（pH 7.4）潤洗3次，每次2 min。用80%丙酮鋪平每孔，在4℃固定10 min后，棄去丙酮后用PBS（pH 7.4）潤洗3次，每次2 min。再用3%BSA鋪平每孔，室溫靜置1 h后，棄去BSA液體后用PBS（pH 7.4）潤洗3次，每次2 min。每孔加入1 mL鼠抗山羊Aichivirus C VP1重組蛋白的陽性血清（1∶200倍稀釋）作為一抗，37℃孵育2 h。棄去一抗，PBS（pH 7.4）潤洗3次，再加FITC標記的羊抗鼠IgG（1∶1 000倍稀釋）作為二抗，每孔1 mL，37℃避光孵育1 h。棄去二抗，再用PBS（pH 7.4）潤洗5次以上，每次2 min。滴加封片液（含有DAPI），室溫孵育10 min后吸取殘留液體，采用倒置熒光顯微鏡觀察。

1.5.3 電鏡觀察

將獲得的分離毒株病毒液1 500 r·min-1離心10 min后，取 10 μL上清液滴于碳支持膜，2 min后取出碳支持膜，再用磷鎢酸室溫下染色2.5 min，經透射電鏡觀察病毒形態(tài)并拍照。

1.6 分離株全基因組的擴增

參考文獻報道山羊Aichivirus C 全基因擴增的引物序列（表1）對分離毒株進行全基因組的擴增［4］，引物由生工生物工程有限公司合成。對擴增產物進行克隆轉化后交由生工生物工程有限公司測序。

1.7 "VP0、VP3和VP1完整基因的擴增

將山羊Aichivirus C的臨床陽性樣本進行VP0、VP1和VP3完整基因擴增。引物序列如表1所示，其中的引物3和引物4用于擴增VP0完整基因，引物4和引物5用于擴增VP3完整基因，引物5和引物6用于擴增VP1完整基因。引物由生工生物工程有限公司合成。對擴增產物進行克隆轉化后交由生工生物工程有限公司測序。

1.8 序列分析

利用SeqMan software軟件拼接擴增基因序列，使用MEGA7.0對擴增序列進行多序列比對。使用DNAStar 7.0 軟件中的 MEGAlign 程序分析核苷酸（nt）和氨基酸（aa）序列的相似性。并基于全基因組、VP0、VP3和VP1基因選取GenBank中已知山羊 Aichivirus C毒株及Aichivirus所有物種代表性毒株序列，采用最大似然法構建系統(tǒng)發(fā)育樹（Bootstrap值為1 000）進行系統(tǒng)發(fā)育分析。

2 結 果

2.1 樣本檢測

采用文獻報道的山羊Aichivirus C特異性RT-PCR檢測方法從9份山羊腹瀉糞便樣本檢測出陽性樣本8份［4］，陽性率為88.89%。剖檢瀕死山羊的肝、脾、食道、十二指腸、回腸、盲腸、結腸、直腸組織樣本均檢測為Aichivirus C陽性（圖1）。而應用PCR方法未檢出PPRV、BCoV、BVDV、CEV、RoVA、ETEC和Salmonella 等病原體。

2.2 病毒的分離與鑒定

將8份山羊 Aichivirus C陽性腹瀉糞便樣本接種Vero細胞，其中2份樣本傳代至第四代后仍能在48 h觀察到穩(wěn)定的CPE，主要為細胞萎縮、拉絲、脫落和融合（圖3B）。第四代的細胞培養(yǎng)物用于蝕斑純化，純化后的病毒接種細胞48 h顯示的CPE特征與未純化之前一致，并將分離株分別命名為SWUN/F1/2022（GenBank登錄號：OR682616）和SWUN/F2/2022（GenBank登錄號：OR682617）。經Reed-Muench法測定，分離株的病毒滴度分別為106.5 TCID50·mL-1和105.9 TCID50·mL-1。

2.2.1 RT-PCR鑒定

2個分離株每一代細胞培養(yǎng)物提取的核酸經山羊 Aichivirus C特異性RT-PCR擴增后［4］，均獲得大小為484 bp的目的條帶（圖2），擴增片段測序比對后，獲得的基因序列與GenBank數(shù)據庫中山羊 Aichivirus C 3D基因的對應基因序列相似性為92.98%～99.59%，證實為山羊Aichivirus C。

2.2.2 間接免疫熒光檢測

熒光顯微鏡下觀察顯示，采用山羊 Aichivirus C分離株接毒48 h的Vero細胞出現(xiàn)特異性的明亮熒光（圖3C），未感染的48 h Vero細胞未見熒光。

2.2.3 電鏡觀察

WUN/F1/2022株和SWUN/F2/2022株的細胞培養(yǎng)物經磷鎢酸負染處理后，通過透射電鏡觀察到直徑約40 nm的無囊膜球形病毒顆粒（圖3D），與報道的KoV病毒粒子形態(tài)一致［4］。

2.3 山羊 Aichivirus C分離株基因組的擴增和序列分析

使用12對引物分段擴增獲得兩個山羊Aichivirus C分離毒株的近乎全長基因組，分別命名為SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022，其基因組長度分別為8 152 bp和8 197 bp，均包含一個7 439 bp的ORF，兩個毒株的基因組序列G+C含量均為56%；編碼一個長度為2 480 aa的多蛋白前體。序列相似性分析結果顯示，SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株之間全基因組的nt相似性為98.7%；ORF的nt相似性為 99.2%，aa相似性為99.0%，SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株與GenBank數(shù)據庫中已知的韓國12Q108（GenBank登錄號：KF793927）、美國MN1/2018（GenBank登錄號：MN604700）、中國SWUN/F11/2019（GenBank登錄號：MT584793）、和中國GCCDC14/2019（GenBank登錄號：OQ808805）山羊 Aichivirus C 毒株相比，全基因組序列的最大nt相似性分別為90.1%、89.6%、97.4%和79.0%，ORF的最大nt相似性分別為90.5%、90.4%、98.0%和77.8%，ORF的最大aa相似性分別為97.4%、97.6%、99.0%和82.7%（見附件表1），證實SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株屬于Aichivirus C。將本研究中SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株全基因組與GenBank數(shù)據庫中所有山羊Aichivirus C毒株及其它KoV 代表性毒株的全基因組構建系統(tǒng)發(fā)育樹分析（圖4），SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株與GenBank數(shù)據庫中所有已知山羊Aichivirus C毒株序列均聚為一大支，并與SWUN/F11/2019毒株親緣關系最近。與GenBank全部的山羊Aichivirus C毒株相比，SWUN/F1/2022和SWUN/F2/2022毒株在VP3基因上有1個共同的aa位點突變（T58A），在VP1基因上有1個共同的aa位點突變（P173S），SWUN/F2/2022毒株在VP0基因上有1個獨特的aa位點突變（N、Q199K）。

2.4 山羊Aichivirus C陽性樣本VP0、VP3和VP1基因的分子特征

本研究共擴增獲得7個山羊Aichivirus C毒株的VP0、VP3和VP1完整基因序列，其VP0基因序列全長均為1 101個堿基，編碼367個aa殘基，并且這7個山羊Aichivirus C毒株VP0基因之間的nt相似性為99.0%～100.0%，aa相似性為98.6%～100%；與GenBank中已知山羊 Aichivirus C 毒株VP0基因的nt相似性為71.5%～98.8%，aa相似性為76.6%～100%（見OSID附件圖1、2），與選取的7個PKoV 代表毒株VP0基因nt相似性為71.7%～73.6%，aa相似性為75.2%～79.8%（見OSID附件圖3、4）。

基于GenBank中全部25條山羊Aichivirus C毒株和KoV屬代表種毒株的VP0基因序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹分析（圖5），本研究獲得的7個毒株VP0基因與24條山羊Aichivirus C毒株VP0基因共同聚為一支。進一步對全部山羊Aichivirus C毒株 VP0 基因序列對比分析發(fā)現(xiàn)，本研究獲得的7個山羊Aichivirus C毒株中有6個毒株在VP0基因上具有1個共同的aa位點突變（N、Q199K），有3個毒株在VP0基因上具有另外1個共同的aa位點突變（V、M、L216E）。

本研究獲得的7個山羊Aichivirus C毒株VP3基因序列全長均為669個堿基，編碼223個aa殘基，其VP3基因之間的nt相似性為99.0%～100.0%，aa相似性為99.1%～100%。這7個山羊Aichivirus C毒株與GenBank中已知山羊 Aichivirus C 毒株VP3基因的nt相似性為70.9%～98.7%，aa相似性為73.1%～100%（見OSID附件圖5、6），與選取的7個PKoV 代表毒株VP3基因nt相似性為68.6%～70.7%，aa相似性為71.3%～73.1%（見OSID附件圖7、8）。

基于GenBank中全部25條山羊Aichivirus C和KoV屬代表種毒株的VP3基因序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹分析（圖6），本研究7個山羊Aichivirus C毒株與24條山羊Aichivirus C 毒株VP3基因序列聚為一大支。進一步分析發(fā)現(xiàn)，VP3基因序列無獨特的aa突變，遺傳較為穩(wěn)定。

本研究獲得的7個山羊Aichivirus C毒株VP1基因序列全長均為863個堿基，編碼287個aa殘基，這7個山羊Aichivirus C毒株VP1基因之間的nt相似性為99.6%～100%，aa相似性為99.3%～100%，與GenBank數(shù)據庫中已知山羊 Aichivirus C 毒株VP1基因的nt相似性為55.6%～99.0%，aa相似性為50.4%～99.3%（見OSID附件圖9、10），與選取的7個PKoV 代表毒株VP1基因nt相似性為51.9%～55.1%，aa相似性46.6%～49.1%（見OSID附件圖11、12）。

基于GenBank中全部24條山羊Aichivirus C和KoV屬代表種毒株的VP1基因序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹分析（圖7），本研究獲得的7個山羊Aichivirus C毒株VP1基因與23條山羊Aichivirus C 毒株VP1基因序列在進化樹上聚為一大支。進一步對全部山羊Aichivirus C毒株 VP1基因序列對比分析發(fā)現(xiàn)，本研究獲得的7個山羊Aichivirus C毒株在VP1基因區(qū)具有1個相同的aa位點突變 （P173S）。

3 討 論

Aichivirus C是山羊的一個新發(fā)致腹瀉病毒［10］，目前關于該病毒的致病特征研究資料仍然較為欠缺。本研究在四川地區(qū)某山羊場采集的9份腹瀉糞便中進行腹瀉病原檢測，Aichivirus C的檢出率為88.89%；作者從1只病死山羊的多個組織器官中也檢測到Aichivirus C，且其它腹瀉相關病原均無檢出，因此，該羊場暴發(fā)的腹瀉病應該是由Aichivirus C引起的。對該羊場的發(fā)病情況調查顯示，其臨床癥狀主要為發(fā)熱、水樣腹瀉和脫水；發(fā)病年齡最小在2日齡，最大在3月齡，羔羊發(fā)病率可達到70%，其病理剖解的結果與我們前期的山羊人工感染的結果一致［10］。本試驗結果有助于進一步加強對山羊Aichivirus C發(fā)病特點的了解。本實驗室前期調查結果顯示山羊Aichivirus C已在川渝云地區(qū)廣泛流行［10］，有必要將該病毒納入羔羊腹瀉病的常規(guī)診斷。最近，Huang等［20］也在湖北死亡山羊中發(fā)現(xiàn)山羊Aichivirus C，提示該病毒在國內可能具有廣泛的地域分布。因此，有必要進一步加強山羊Aichivirus C的流行病學調查。

本研究分離毒株與GenBank數(shù)據庫中已知山羊Aichivirus C毒株對比，與本實驗室前期上傳毒株的SWUN/F11/2019親緣關系最近。基于全基因組和結構蛋白構建系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn)，所有中國山羊Aichivirus C毒株在進化樹上形成了兩個分支，湖北地區(qū)報道的GCCDC14/2019毒株序列獨聚為一支，本研究獲得兩個毒株與SWUNF11/2019毒株聚為一支，與GCCDC14/2019毒株有明顯的遺傳距離，可能是屬于不同基因型的毒株。且本研究所獲得兩個毒株與SWUNF11/2019毒株的全基因組最大相似性為97.4%，而與GCCDC14/2019毒株的全基因組最大相似性僅為79.0%，表明國內山羊Aichivirus C具有遺傳多樣性［4，17-20］。

KoV的VP0和VP1蛋白主要參與病毒的致病、細胞受體識別和抗原多樣性形成［11-14］。在人Aichivirus 中，VP0和VP1基因已經鑒定出幾個涉及受體結合和抗原多樣性的結構域［11-14］，與之相似的區(qū)域分別位于Aichivirus C VP0蛋白的48-53位aa、189-249位aa和VP1蛋白的20-44位aa、229-241位aa，這部分aa可能參與受體識別和抗原多樣性，并可能在誘導中和抗體產生中發(fā)揮重要作用［4，10-11］。最近的文獻報道顯示，國內可能存在一種新基因型的山羊Aichivirus C ［20］?；贕enBank數(shù)據庫中國內已知的山羊Aichivirus C VP0、VP3和VP1基因序列分析發(fā)現(xiàn)，這兩種基因型的山羊Aichivirus C之間VP0、VP3和VP1基因序列的最大aa相似性分別為77.1%、73.5%、52.2%，因此，這兩種基因型的山羊Aichivirus C之間的抗原性差別可能較大，從而引起生物學特征的差別。與已知的山羊Aichivirus C相比，本研究獲得的7個毒株在VP1基因上有1個相同的aa位點突變，但不在潛在受體結合區(qū)中，因此這種獨特的aa位點突變可能不會影響受體結合功能；值得注意的是，本研究獲得毒株在VP0 基因上的具有2個獨特的aa位點突變（Q、N199K和V、M、L216E），位于預測的受體結構域內，其對功能的影響還需要進一步研究。

4 結 論

本研究成功從羔羊腹瀉糞便中分離出2株山羊Aichivirus C毒株，獲得了其近乎全長基因組序列，分析結果顯示均與國內SWUN/F11/2019 毒株親緣關系最近，且其VP0和VP1基因可能具有獨特的分子特征，豐富了國內山羊源Aichivirus C的分子遺傳信息，為進一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物學特征奠定了基礎。

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（編輯 白永平）