摘 要： 為了旨在研究雞鈉氫交換蛋白1（chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1，chNHE1）在不同類型雞組織內(nèi)的表達(dá)情況，J亞群禽白血病病毒（subgroup J avian leukosis virus，ALV-J）的組織嗜性及ALV-J感染后組織chNHE1的mRNA變化情況。本研究利用qPCR技術(shù)，檢測(cè)了商品肉雞、商品蛋雞和SPF雞臟器內(nèi)的chNHE1轉(zhuǎn)錄量，ALV-J感染雞后各組織的病毒載量及組織chNHE1的轉(zhuǎn)錄量的變化。結(jié)果顯示，chNHE1在3種類型雞的心、肝、脾、肺、腎、盲腸扁桃體、胸腺和法氏囊中均能檢測(cè)到，但轉(zhuǎn)錄量高低存在較大差異，其中，免疫器官內(nèi)的chNHE1轉(zhuǎn)錄量相對(duì)較高；SPF雞接種ALV-J后，心、脾、腎和盲腸扁桃體中的病毒載量相對(duì)較高，而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒載量相對(duì)較低；ALV-J感染后，脾、腎和盲腸扁桃體中的chNHE1轉(zhuǎn)錄量明顯上調(diào)，但心中的表達(dá)轉(zhuǎn)錄量與空白對(duì)照相比無(wú)明顯變化。本研究分析了3種類型雞chNHE1的組織轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)及ALV-J感染對(duì)組織內(nèi)chNHE1轉(zhuǎn)錄的影響，該研究結(jié)果為探究受體chNHE1的轉(zhuǎn)錄與ALV-J的組織嗜性的關(guān)系提供重要的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： J亞群禽白血病病毒；雞鈉氫交換蛋白1；組織表達(dá)；轉(zhuǎn)錄量變化

中圖分類號(hào)： S852.659.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0366-6964（2024）08-3631-09

收稿日期：2023-11-10

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（32230105）；國(guó)家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-41）

作者簡(jiǎn)介：張 莉（1999-），女，山東菏澤人，碩士生，主要從事禽免疫抑制病研究，E-mail：15275309627@163.com

通信作者：李留安，主要從事畜禽營(yíng)養(yǎng)生理生化研究，E-mail：anliuli2003@163. com；高玉龍，主要從事家禽免疫抑制病診斷與防治研究，E-mail：gaoyulong@caas.cn

Analysis of Cellular Receptor chNHE1 Expression in Chicken Tissues Infected with

Avian Leukosis Virus Subgroup J

ZHANG" Li1，2， YU" Mengmeng2， WANG" Ying2， WANG" Suyan2， XU" Zhuangzhuang2， LIU" Peng2， CHEN

Yuntong2， QI" Xiaole2， LI" Liuan1*， GAO" Yulong2*

（1.Tianjin Key Laboratory of Agricultural Animal Breeding and Healthy Husbandry， College of Animal

Science and Veterinary Medicine， Tianjin Agricultural University， Tianjin 300392，" China;

2.

Avian Immunosuppressive Disease Division， State Key Laboratory for Animal Disease Control and Prevention，

Harbin Veterinary Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Harbin 150069，

Heilongjiang， China）

Abstract：" This study aimed to investigate the expression of chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1 （chNHE1） in different types of chicken tissues， the tissue tropism of subgroup J avian leukosis virus （ALV-J）， and the changes in mRNA of chNHE1 after ALV-J infection. We used qPCR to detect the transcription of chNHE1 in the organs of commercial broilers， commercial layers， and SPF chickens， as well as the viral load in various tissues and the changes in chNHE1 transcription in tissues after ALV-J infection. The results showed that chNHE1 was transcripted in the heart， liver， spleen， lung， kidney， cecal tonsil， thymus， and bursa in all three types of chickens， but the transcription levels varied greatly， with relatively higher transcription levels in the immune organs. After SPF chickens were infected with ALV-J， the viral load was relatively higher in the heart， spleen， kidney， and cecal tonsils， while it was relatively lower in the liver， lung， thymus， and bursa. The transcription of chNHE1 in the spleen， kidney， and cecal tonsils was significantly upregulated after ALV-J infection， but there was no significant change in the transcription in the heart compared to the control group. This study analyzed the tissue transcription characteristics of chNHE1 in three types of chicken and the effect of ALV-J infection on the transcription chNHE1 expression in tissues， providing an important theoretical basis for exploring the relationship between the expressiontranscription of the receptor chNHE1 and the tissue tropism of ALV-J.

Key words： subgroup J avian leukosis virus; chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1; tissue expression; expressiontranscriptional changesleves

*Corresponding authors：LI Liuan， E-mail： anliuli2003@163.com; GAO Yulong， E-mail： gaoyulong@caas. cn

禽白血病病毒（avian leukosis virus， ALV）屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，禽C型逆轉(zhuǎn)錄病毒屬。根據(jù)ALV的囊膜蛋白抗原差異及血清學(xué)交叉反應(yīng)等特點(diǎn)，將其分為A～K共11個(gè)亞群。在雞上常見(jiàn)外源性ALV有A、B、C、D、J和K 6個(gè)亞群，其中J亞群禽白血病病毒（subgroup J avian leukosis virus， ALV-J）的致病性較強(qiáng)，感染雞后常引起雞的淋巴瘤、髓細(xì)胞瘤和血管瘤等癥狀，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失［1-2］。1988年，ALV-J最早從英國(guó)的商品肉雞中分離到［3］。1999年，我國(guó)也在商品肉雞中檢測(cè)到該病毒，隨后全國(guó)各地陸續(xù)有ALV-J的報(bào)道，且該病毒的宿主范圍也不斷擴(kuò)大，逐漸由肉雞擴(kuò)展到蛋雞和本地雞，給我國(guó)的種禽健康造成巨大的威脅［4-8］。ALV-J主要以垂直傳播為主，目前，缺乏有效的疫苗和藥物，所以該病毒的清除主要依靠對(duì)種禽的凈化，這給該病的防控造成巨大的挑戰(zhàn)。

逆轉(zhuǎn)錄病毒感染宿主細(xì)胞主要有以下幾個(gè)步驟：吸附、侵入、逆轉(zhuǎn)錄、入核、整合、轉(zhuǎn)錄、核輸出、組裝和釋放，其中，病毒與受體特異性結(jié)合是病毒入侵過(guò)程中最重要的一步。前期研究已經(jīng)確定雞鈉氫交換蛋白1（chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1， chNHE1）是ALV-J的受體，其中，28-39位氨基酸是chNHE1與囊膜蛋白結(jié)合的關(guān)鍵作用域［9-10］。chNHE1與人鈉氫交換蛋白1（NHE1）的結(jié)構(gòu)有較高的相似性［9，11］，NHE1是一個(gè)管家基因，幾乎表達(dá)于所有真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，且在細(xì)胞內(nèi)外離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞pH調(diào)節(jié)、體液分泌、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和凋亡等多種生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用［12-16］。我們作者實(shí)驗(yàn)室前期研究已發(fā)現(xiàn)，chNHE1序列在肉雞、蛋雞和不同品系的本地雞內(nèi)高度保守［17］，但是不同種類的雞對(duì)病毒的易感性及臨床癥狀有差異［18-19］，而這些差異是否與chNHE1的轉(zhuǎn)錄量相關(guān)尚未可知。本研究分析了商品肉雞、商品蛋雞及SPF雞的臟器chNHE1的轉(zhuǎn)錄情況，感染ALV-J后SPF雞各組織內(nèi)的病毒載量及chNHE1的轉(zhuǎn)錄變化情況，以期探究受體chNHE1的轉(zhuǎn)錄與病毒的組織嗜性的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物倫理批準(zhǔn)說(shuō)明

本文章涉及所有動(dòng)物試驗(yàn)均經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。雞飼養(yǎng)在負(fù)壓隔離器中，有充足的食物和光線。所有動(dòng)物試驗(yàn)均按照國(guó)際動(dòng)物福利標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，其動(dòng)物倫理審批編號(hào)為230207-02-GR。

1.2 細(xì)胞、毒株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)所用DF1細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室保存；ALV-J原型毒株HPRS103由Venugopal Nair教授提供；商品肉雞（羅斯308白羽肉雞）和商品蛋雞（海蘭褐蛋雞）由福建圣澤生物科技發(fā)展有限公司提供；SPF雞（白萊航SPF雞）由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國(guó)家禽類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源庫(kù)提供。

1.3 主要試劑及儀器

RNAiso Plus試劑、Premix TaqTM（TaKaRa TaqTM Version 2.0 plus dye）、pMD18-T載體購(gòu)自TaKaRa公司；QIAfilter Plasmid Midi Kit購(gòu)自QIAGEN公司；THUNDERBIRDTM SYBR qPCR Mix購(gòu)自TOYOBO公司；AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量試劑盒購(gòu)自康寧生命科學(xué)有限公司；Bio RT高靈敏cDNA第一鏈合成試劑盒購(gòu)自杭州博日科技股份有限公司；大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所禽免疫抑制病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)制備并保存。PCR儀（型號(hào)：TP600）購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；超微量紫外分光光度計(jì)（型號(hào)：NanoPhotometer P330）購(gòu)自德國(guó)IMPLEN公司；高通量組織研磨儀（型號(hào)：Tissuelyser Ⅱ）購(gòu)自德國(guó)QIAGEN公司；熒光定量PCR儀（型號(hào)：QuantStudio 5）購(gòu)自美國(guó)AB公司。

1.4 引物的合成

參考相關(guān)文獻(xiàn)［20-22］，合成chNHE1、GAPDH、ALV-J-ENV和OVO的RT-PCR及qPCR引物，引物序列如表1所示，由賽文創(chuàng)新（北京）生物科技有限公司合成。

1.5 chNHE1和GAPDH質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建與鑒定

首先收集DF1細(xì)胞，然后按照RNAiso Plus說(shuō)明書(shū)進(jìn)行RNA的提取，具體步驟如下：在200 μL樣品中加入1 mL RNAiso Plus，漩渦振蕩混勻后，室溫靜置3 min；再加入200 μL三氯甲烷顛倒混勻，室溫靜置3 min，然后在4 ℃條件下12 000×g離心15 min；離心后，取600 μL上清至新的1.5 mL無(wú)RNA酶的EP管中，再加入等量的異丙醇后顛倒混勻，室溫靜置3 min后，在4 ℃條件下12 000×g離心10 min；離心后，小心棄去上清，再加1 mL 75%的乙醇，然后在4 ℃條件下12 000×g離心10 min；最后棄上清后，將沉淀在超凈臺(tái)內(nèi)晾干，用20 μL無(wú)RNA酶的水將其溶解。再參照Bio RT高靈敏cDNA第一鏈合成試劑盒的說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA， 反應(yīng)體系如下：Hybrid mix 10 μL，Enzyme 1 μL，RNA模板4 μL，最后加Nuclease-free Water至20 μL。將反應(yīng)液充分混勻后按照以下的程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄：37 ℃逆轉(zhuǎn)錄20 min，98 ℃酶失活5 min。

再以上述獲得的cDNA為模板，用引物chNHE1-F/R和GAPDH-F/R分別擴(kuò)增片段chNHE1和GAPDH。50 μL反應(yīng)體系：上下游引物各2 μL，Premix TaqTM 25 μL，Nuclease-free Water 19 μL，模板2 μL。其反應(yīng)程序如下：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及回收后，分別連到pMD18-T載體上，構(gòu)建pMD18-T-chNHE1和pMD18-T-GAPDH質(zhì)粒。將PCR鑒定為陽(yáng)性的質(zhì)粒送至北京睿博興科生物技術(shù)有限公司測(cè)序。最后將構(gòu)建成功的質(zhì)粒進(jìn)行濃度測(cè)定，計(jì)算拷貝數(shù)。

1.6 chNHE1和GAPDH qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以10倍濃度梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒，最終以1.0×101～1.0×108 copies·μL-1的稀釋質(zhì)粒作為模板進(jìn)行qPCR試驗(yàn)。配制20 μL反應(yīng)體系：上下游引物各1 μL，THUNDERBIRDTM SYBR qPCR Mix 10 μL，Nuclease-free Water 6 μL，模板2 μL。其反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性1 min；95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)［23］。最后分析擴(kuò)增曲線以及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7 3種類型雞各臟器chNHE1的轉(zhuǎn)錄

分別取3只飼養(yǎng)于無(wú)菌隔離器中的商品肉雞、商品蛋雞和SPF雞，剖殺后采集0.1 g的臟器（心、肝、脾、肺、腎、盲腸扁桃體、胸腺和法氏囊）至2 mL EP管。隨后利用高通量組織研磨儀將樣品充分研磨，在4 ℃條件下6 000×g離心5 min，取200 μL上清至新的高壓滅菌1.5 mL EP管中，按照“1.5”中的方法提取樣品RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后利用qPCR檢測(cè)3種類型的雞各臟器chNHE1的mRNA水平，同時(shí)以GAPDH作內(nèi)參對(duì)照。

1.8 ALV-J感染SPF雞后對(duì)各臟器chNHE1轉(zhuǎn)錄的影響

將18只1日齡SPF雞隨機(jī)分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組9只，對(duì)照組9只，分別飼養(yǎng)于無(wú)菌負(fù)壓隔離器中。試驗(yàn)組雞于1日齡腹腔注射0.2 mL（104 TCID50）·只-1的ALV-J原型毒株HPRS103，對(duì)照組注射同等劑量的生理鹽水。分別在攻毒后的第14、21和28天，每組隨機(jī)剖殺3只雞，采集心、肝、脾、肺、腎、盲腸扁桃體、胸腺和法氏囊等器官。然后利用AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量試劑盒提取臟器基因組DNA，用引物ALV-J-ENV-F/R和OVO-F/R，以O(shè)VO作內(nèi)參對(duì)照，進(jìn)行qPCR檢測(cè)攻毒后雞體臟器病毒感染情況；同時(shí)按照“1.5”中的方法提取臟器RNA后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，用引物chNHE1-F/R和GAPDH-F/R，以GAPDH作內(nèi)參對(duì)照，進(jìn)行qPCR檢測(cè)攻毒后雞體臟器chNHE1的mRNA變化情況。

2 結(jié) 果

2.1 chNHE1和GAPDH質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定結(jié)果

以DF1細(xì)胞的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增chNHE1和GAPDH。結(jié)果表明，成功擴(kuò)增出與預(yù)期大小相符且特異性的條帶（圖1）。將目的片段連于pMD18-T載體，經(jīng)測(cè)序確定重組pMD18-T-chNHE1和pMD18-T-GAPDH標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒構(gòu)建成功。

2.2 chNHE1與GAPDH標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)質(zhì)粒濃度與拷貝數(shù)的關(guān)系，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的拷貝數(shù)，以10倍濃度梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒，以1.0×101～1.0×108 copies·μL-1的質(zhì)粒作為模板進(jìn)行qPCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，chNHE1與GAPDH的最低檢測(cè)限度分別為102和101 copies·μL-1，其擴(kuò)增曲線分別如圖2A和2C所示，另外，以起始

模板拷貝數(shù)的常用對(duì)數(shù)為x軸，以Ct值為y軸，繪制出chNHE1與GAPDH的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2B、D），Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的拷貝數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3 3種類型雞chNHE1的組織轉(zhuǎn)錄結(jié)果

以商品肉雞、商品蛋雞和SPF雞的心、肝、脾、肺、腎、盲腸扁桃體、胸腺和法氏囊的cDNA為模板，利用qPCR檢測(cè)3種類型的雞各組織臟器chNHE1轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果顯示，在3種類型雞的上述臟器中均可檢到chNHE1，但轉(zhuǎn)錄量差異較大，chNHE1 mRNA的拷貝數(shù)從4.0×103～2.7×108 copies/106個(gè)細(xì)胞不等。商品肉雞中chNHE1的mRNA量在法氏囊較高，拷貝數(shù)達(dá)2.7×108 copies/106個(gè)細(xì)胞，其次為脾和盲腸扁桃體。商品蛋雞中chNHE1的mRNA量在胸腺較高，拷貝數(shù)達(dá)1.0×108 copies/106個(gè)細(xì)胞，其次為盲腸扁桃體和腎。SPF雞中chNHE1的mRNA量在脾較高，拷貝數(shù)達(dá)1.3×108 copies/106個(gè)細(xì)胞，其次為胸腺和法氏囊；而3種類型的雞中chNHE1在心和肺中的mRNA量均相對(duì)較低（圖3）。

2.4 SPF雞感染ALV-J后其臟器chNHE1的轉(zhuǎn)錄變化情況

為了檢測(cè)SPF雞感染ALV-J后組織臟器chNHE1的mRNA變化情況，首先分別提取攻毒后不同時(shí)間HPRS103攻毒組及空白對(duì)照組SPF雞的心、肝、脾、肺、腎、盲腸扁桃體、胸腺和法氏囊的基因組DNA，然后用qPCR檢測(cè)雞體臟器病毒感染情況。結(jié)果顯示，在攻毒后第14、21和28天，心、脾、腎和盲腸扁桃體中的病毒載量相對(duì)較高，ALV-J感染雞心中的病毒載量是空白對(duì)照SPF雞的800倍～1 400倍，脾中的病毒載量是空白對(duì)照SPF雞的600倍～3 600倍；而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒載量相對(duì)較低；此外，在攻毒后的14～28 d，攻毒組臟器病毒載量總體呈下降趨勢(shì)（圖4A）。

隨后，以病毒載量相對(duì)較高的心、脾、腎及盲腸扁桃體的cDNA為模板，qPCR檢測(cè)chNHE1的mRNA量的變化。試驗(yàn)結(jié)果表明，在攻毒后的14～28 d，ALV-J的感染明顯上調(diào)了SPF雞脾、腎及盲腸扁桃體中chNHE1的轉(zhuǎn)錄，但是上調(diào)量隨時(shí)間呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，攻毒后第14天chNHE1的上調(diào)量最高，為空白對(duì)照的100倍～700倍，第28天chNHE1的上調(diào)量最低，為空白對(duì)照的2倍～61倍；對(duì)比臟器內(nèi)的病毒載量，其與chNHE1的轉(zhuǎn)錄量總體呈正相關(guān)；此外，心中的病毒載量雖然較高，但chNHE1的轉(zhuǎn)錄量卻并沒(méi)有發(fā)生顯著變化（圖4B）。

3 討 論

1988年，ALV-J首次從英國(guó)的肉種雞中分離，隨即在世界范圍內(nèi)流行，我國(guó)最早在1999年從商品肉雞中分離到該病毒，隨后在山東、黑龍江、河南、內(nèi)蒙古和江蘇等省份也有報(bào)道，其嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展［24-25］。ALV-J主要是通過(guò)囊膜蛋白與受體chNHE1相互識(shí)別并結(jié)合，然后其構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出融合肽進(jìn)而與細(xì)胞膜發(fā)生融合，啟動(dòng)病毒的感染過(guò)程。盡管不同類型的雞均有受體chNHE1的轉(zhuǎn)錄，但ALV-J對(duì)不同類型雞的感染率和致病性有明顯不同［17-19］。chNHE1的表達(dá)量可能會(huì)影響ALV-J的組織嗜性，因此我們作者對(duì)3種類型雞的組織中chNHE1的轉(zhuǎn)錄量及SPF雞接種ALV-J后組織內(nèi)的病毒載量進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然chNHE1在雞的各組織臟器內(nèi)均轉(zhuǎn)錄，但其轉(zhuǎn)錄量差異顯著，其中，免疫器官內(nèi)chNHE1的轉(zhuǎn)錄量相對(duì)較高，與其它研究結(jié)果相類似［20，26-27］，這可能與ALV-J主要感染免疫細(xì)胞密切相關(guān)，也與ALV-J造成免疫抑制進(jìn)而影響后期疫苗的效果和增加其他外源病毒的感染的概率有關(guān)。另外，我們作者發(fā)現(xiàn)盡管胸腺和法氏囊內(nèi)chNHE1的轉(zhuǎn)錄量相對(duì)較高，但兩者的ALV-J病毒載量卻相對(duì)較低，并不像A亞群ALV一樣，能在法氏囊內(nèi)很好的復(fù)制并誘導(dǎo)淋巴性白血?。?8］，這可能與ALV-J在組織內(nèi)的復(fù)制嗜性和致瘤特性（主要誘導(dǎo)髓細(xì)胞瘤）有關(guān)，具體的機(jī)制還需進(jìn)一步研究。在心中卻存在著相反的現(xiàn)象，盡管心chNHE1轉(zhuǎn)錄量不高，但病毒載量卻相對(duì)較高，這可能是ALV-J感染雞后常導(dǎo)致心肌出現(xiàn)髓細(xì)胞樣細(xì)胞腫瘤的主要原因。在脾和腎內(nèi)chNHE1的轉(zhuǎn)錄量和病毒載量均較高，這可能是脾、腎的腫大和髓細(xì)胞樣腫瘤形成的主要原因。因此，我們作者推斷細(xì)胞表面的受體chNHE1只是為病毒感染提供一個(gè)先決條件，而其組織嗜性不僅與受體轉(zhuǎn)錄量相關(guān)，也受到機(jī)體多種因素的調(diào)控，其具體機(jī)制需進(jìn)一步探索。

chNHE1是細(xì)胞膜上的Na+/H+離子交換蛋白，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)pH（pHi）、維持酸堿平衡和細(xì)胞形態(tài)，對(duì)細(xì)胞正常生命活動(dòng)起著至關(guān)重要的作用。當(dāng)NHE1的活性增加時(shí)，細(xì)胞的活性、增殖和遷移增強(qiáng)，這對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和浸潤(rùn)至關(guān)重要［29］。ALV-J感染SPF雞后，脾、腎和盲腸扁桃體內(nèi)的病毒載量相對(duì)較高，且chNHE1的轉(zhuǎn)錄量顯著上調(diào)，而且ALV-J的病毒感染可以激活PI3K/Akt信號(hào)通路，而Akt的磷酸化作用又能激活NHE1活性，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程，所以NHE1的上調(diào)是ALV-J感染雞后常出現(xiàn)脾和盲腸扁桃體腫大以及腎形成腫瘤的重要原因［30］。此外，我們作者還觀察到雖然心中的病毒含量相對(duì)較高，但chNHE1的上調(diào)卻不顯著，這可能是由于在心肌細(xì)胞內(nèi)Akt磷酸化NHE1的S648位點(diǎn)，抑制NHE1活性，導(dǎo)致病毒感染后NHE1的上調(diào)現(xiàn)象不明顯［31］，但具體機(jī)制還需要后續(xù)深入的研究。

4 結(jié) 論

本研究檢測(cè)了3種類型雞組織臟器內(nèi)chNHE1的轉(zhuǎn)錄及ALV-J感染對(duì)其轉(zhuǎn)錄的影響情況，發(fā)現(xiàn)chNHE1在3種類型雞的組織臟器內(nèi)廣泛轉(zhuǎn)錄，但mRNA量存在較大差異，其中，免疫器官中的chNHE1總體較高；SPF雞感染ALV-J后其心、脾、腎和盲腸扁桃體內(nèi)的病毒載量相對(duì)較高；另外，ALV-J的感染可顯著上調(diào)脾、腎和盲腸扁桃體內(nèi)chNHE1轉(zhuǎn)錄量。本研究分析了3種類型雞chNHE1的組織轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)及ALV-J感染對(duì)組織內(nèi)chNHE1轉(zhuǎn)錄的影響情況，研究結(jié)果為探究受體chNHE1的表達(dá)與ALV-J的組織嗜性的關(guān)系提供重要的理論依據(jù)。

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（編輯 白永平）