摘 要： 在天津的病死鴿病料中分離鑒定鴿副黏病毒Ⅰ型（pigeon paramyxovirus-1， PPMV-1），并對其進行遺傳演化、生物學特性、致病性分析，為鴿副黏病毒Ⅰ型疫苗的研發(fā)提供科學依據。采用RT-PCR方法進行病原檢測，在SPF雞胚上分離純化病毒；經遺傳演化分析、致病性分析及動物回歸試驗對病毒分離株進行全面分析。結果顯示：病死鴿的臟器樣品經RT-PCR鑒定為NDV核酸陽性；雞胚分離純化后得到1株鴿副黏病毒Ⅰ型毒株，命名為Pigeon/TJ/CH/020/2020 （TJ20）。通過對病毒F基因測序及進化樹分析，確定該分離毒株屬于ClassⅡ類Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）基因亞型，裂解位點的氨基酸殘基為112R-R-Q-K-R-F117，符合NDV強毒株的分子特征。交叉血凝抑制試驗顯示TJ20株與LaSota疫苗株存在明顯的抗原性差異。TJ20株的雞胚半數感染量（EID50）為10-8.38·0.1 mL-1、細胞半數感染量（TCID50）為10-8.64·0.1 mL-1、雞胚平均致死時間（MDT）為62 h、1日齡雛雞腦內接種致病指數（ICPI）為1.19。動物感染試驗結果表明，1月齡鴿人工感染TJ20株后第4天開始出現嗜睡、垂翅、腹瀉、癱瘓、斜頸扭頭等新城疫典型臨床癥狀，發(fā)病率和死亡率均為100％。本研究從病死鴿組織中成功分離出一株具有高致病性的Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）基因亞型的TJ20毒株，為后續(xù)鴿副黏病毒Ⅰ型疫苗研發(fā)提供了重要的生物學材料。

關鍵詞： 鴿副黏病毒Ⅰ型；分離鑒定；Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）基因亞型；致病性

中圖分類號： S852.659.5

文獻標志碼：A 文章編號： 0366-6964（2024）09-4051-10

Isolation，Identification and Pathogenicity Analysis of a Pigeon Paramyxovirus-1 Strain

ZHANG" Shan" LIU" Dahu "LIU" Baojing4， LIANG" Lin" LIANG" Ruiying" TANG" Xinming" QIU" Xusheng5， DING" Chan5， DING" Jiabo1，2*， HOU" Shaohua1*

（1.Institute of Animal Science， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193， China;

2.Key Laboratory of Animal Biosafety Risk Prevention and Control （North） /Key Laboratory of

Veterinary Biological Products and Chemicals， Ministry of Agriculture and Rural Affairs，

Beijing 100193，

China;

3.Tianjin Key Laboratory of Agricultural Animal Breeding and

Healthy Husbandry， College of Animal Science and Veterinary Medicine，

Tianjin Agricultural University， Tianjin 300392，" China;

4.Bejing Xinhexiang

Technology Co.，LLC， Beijing 100085，" China;

5.Shanghai Veterinary Research

Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Shanghai 200241，" China）

Abstract：" A strain of pigeon paramyxovirus-1（PPMV-1）was isolated from the dead pigeon tissue in Tianjin region. To provide scientific basis for the development of PPMV-1 vaccines， the genetic evolution， biological characteristics， and pathogenicity of the virus were analyzed. The pathogens were identified by RT-PCR， virus isolation， purification by chicken embryos， genetic evolution analysis， pathogenicity analysis， and animal regression tests. A strain of PPMV-1 was isolated from the dead pigeons and named Pigeon/TJ/CH/020/2020 （TJ20）. Sequence analysis and homology analysis of the virus F gene showed that the strain belonged to sub-genotype Ⅵ.2.1.1.2.2（Ⅵk）， and the amino acid residues of the cleavage site were 112R-R-Q-K-R-F117， which were consistent with the molecular characteristics of NDV virulent strains. Hemagglutination inhibition revealed a noticeable difference between TJ20 and LaSota. The values of TCID50，EID50，MDT and ICPI were 10-8.64·0.1 mL-1， 10-8.38·0.1 mL-1， 62 h， 1.19. The animal infection experiment found that pigeons showed clinical symptoms on 4 dpc （day 4 post-challenge）. The incidence rate and mortality were 100%， and the cloacal detoxification rate could reach 100％ on 5 dpc. TJ20 was highly pathogenic to pigeons. This study successfully isolated a highly pathogenic sub-genotype Ⅵ.2.1.1.2.2（Ⅵk）TJ20 strain from samples of dead pigeons，providing important biological materials for the research and development of vaccine of PPMV-1 in the future.

Key words： pigeon paramyxovirus-1; isolation and identification; sub-genotype Ⅵ.2.1.1.2.2（Ⅵk）; pathogenicity

*Corresponding authors：" HOU Shaohua， E-mail： houshaohua@caas.cn; DING Jiabo， E-mail： dingjiabo@caas.cn

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一種急性、高度接觸性的傳染病［1］。1926年，ND首次在印度尼西亞的爪哇和英國的新城暴發(fā)，之后開始在世界范圍內流行，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大損失，被世界動物衛(wèi)生組織（World Organization for Animal Health， WOAH）列為法定報告的動物疫?。?］。NDV又稱禽Ⅰ型副黏病毒（avian paramyxovirusⅠ，APMV-1），屬于副黏病毒科（Paramyxoviridae）禽腮腺炎病毒亞科（Avulavirinae）的正禽腮腺炎病毒屬（Orthoavulavirus），是不分節(jié)段的單股RNA病毒，編碼6種結構蛋白NP-P-M-F-HN-L［2］。融合蛋白（fusion protein，F）是囊膜糖蛋白，能夠介導病毒入侵細胞和病毒粒子的組裝，其裂解位點處堿性氨基酸的數量通常決定著病毒致病性的強弱，強毒株和中等毒力毒株存在多個堿性氨基酸，序列特征為112 K/R-R-Q-R/K-R-F 117，而弱毒株裂解位點多為中性氨基酸［3］。

NDV只有1個血清型，但根據基因組長度和F基因序列可分為2個大群：ClassⅠ和ClassⅡ［4-5］。在發(fā)病鴿群中分離的NDV大多數是屬于ClassⅡ基因Ⅵ型［6-10］。鴿新城疫病毒又稱鴿副黏病毒Ⅰ型（pigeon paramyxovirus-1， PPMV-1），PPMV-1不同亞型的流行情況存在差異，Ⅵ.2.1.1.1和 Ⅵ.2.2.1亞型只在美國有報道，Ⅵ.2.2.2亞型僅出現在我國，而Ⅵ.1、Ⅵ.2.1.1.2.1、Ⅵ.2.1.1.2.2和XXI.1.1亞型在世界不同地區(qū)均有發(fā)現［11］。PPMV-1自1985年傳入我國香港，之后成為危害我國養(yǎng)鴿業(yè)發(fā)展的最重要的病原體［12］。目前，市場上缺乏專門針對PPMV-1的疫苗，我國鴿場廣泛使用雞用疫苗如LaSota進行免疫預防［13］。

本研究采集了天津某鴿棚疑似鴿瘟病料，進行病原的核酸鑒定，接著進行病原的分離鑒定，以及對F基因進行測序并構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，確定其遺傳演化關系。然后通過交叉血凝抑制試驗分析分離株與LaSota疫苗株的抗原差異。最后進行分離株的致病性分析，以期為NDV的流行情況分析、致病機制研究和疫苗研發(fā)提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 病毒及細胞

病鴿來自天津市某已免疫LaSota疫苗的鴿棚；PPMV-1 BJ-C毒株由實驗室分離并保存［14］；BHK21細胞購自國家生物醫(yī)學實驗細胞資源庫。

1.2 試劑材料

DMEM細胞培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）、0.25％胰蛋白酶、PBS（pH 7.4）溶液均為 GIBCO 公司的產品；青鏈霉素混合液購自北京索萊寶科技有限公司；FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit、2×Rapid Taq Master Mix購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；Hifair III 1st Strand cDNA Synthesis Kit購自上海翊圣生物科技有限公司；PrimeSTAR Max DNA Polymerase購自寶生物工程（大連）有限公司；pEASY- Blunt Zero 載體、DH5α感受態(tài)細胞、DNA Marker Trans2K plus、DNA Marker Trans2K plusⅡ均為北京全式金生物技術有限公司的產品。

1.3 雞胚及實驗動物

9日齡無特定病原體（specific pathogen-free，SPF）雞胚、1日齡SPF雛雞均購自北京勃林格殷格翰維通生物技術有限公司。1月齡鴿來自北京平谷養(yǎng)殖場（HI抗體水平低于22，視為抗體陰性）。

1.4 病料處理及PCR檢測

無菌環(huán)境下將病鴿解剖，采集肝、脾、腎和腦組織，并按照1∶10的比例加入生理鹽水制成組織懸液，反復凍融3次，12 000 r·min-1離心5 min，取上清200 μL按照FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit說明書提取核酸，并利用反轉錄試劑盒得到cDNA，反轉錄體系：5×gDNA Digester Mix 3 μL，核酸12 μL，用移液槍輕輕吹打混勻，42 ℃孵育2 min；反應結束后加入10×Hifair III Super Buffer 2 μL，Random Primers N6 （50 μmol·L-1） 1 μL，Random Primers N6 （50 μmol·L-1） 1 μL，Random Primers N6 （50 μmol·L-1） 1 μL，用移液槍輕輕吹打混勻；反轉錄程序：25 ℃ 5 min，55 ℃ 50 min，85 ℃ 5 min。利用表1中的NDV-F/NDV-R引物［15］對進行新城疫病毒的RT-PCR檢測， PCR檢測體系：反轉錄產物2 μL，2×Rapid Taq Master Mix 25 μL，上游引物2 μL，下游引物2 μL，滅菌水19 μL；反應程序：95 ℃預變性3 min；95 ℃15 s，55 ℃15 s，72 ℃5 s，30個循環(huán)，將擴增產物經1％瓊脂糖凝膠核酸電泳檢測并送北京擎科生物科技有限公司進行測序。

1.5 病毒分離培養(yǎng)及純化

將組織上清液經0.22 μm濾器過濾后，按照WOAH方法進行病毒分離和HA效價檢測。采用3次有限稀釋法純化病毒，將純化傳代的第5代毒（F5）進行RT-PCR檢測。

1.6 F基因的擴增

根據GenBank數據庫設計擴增F基因（KT163262.1）的引物（ⅥF和ⅥR），將“1.4”中得到的cDNA進行PCR擴增，PCR體系：反轉錄產物2 μL，PrimeSTAR Max Premix（2×）25 μL，上、下游引物各2 μL，滅菌水19 μL；反應程序：98 ℃預變性1 min；98 ℃10 s，55 ℃ 5 s，72 ℃ 20 s，30個循環(huán)，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測后純化回收。取4 μL PCR回收產物與1 μL載體25℃反應30 min，向DH5α感受態(tài)細胞轉化，挑選陽性克隆送北京擎科生物科技有限公司測序。

1.7 遺傳演化分析

利用DNAStar軟件分析F基因序列，根據文獻選擇其開放閱讀框序列與GitHub（https：//github.com/NDVconsortium/NDV_Sequence_Datasets）中的265個ClassⅡ類Ⅵ型F基因進行核酸同源性分析［9］，利用MEGA 11軟件進行系統(tǒng)進化樹分析，其中，最大似然法（Maximum Likelihood，ML）general time-reversible（GTR）模型，位點之間的替換率分布Rates among Sites參數選擇 Gamma Distributed With Invariant Sites（G+I），Bootstrap值設置為1 000。

1.8 交叉血凝抑制試驗

根據WOAH常規(guī)方法分別測定雞抗LaSota血清、鴿抗LaSota血清、雞抗TJ20株血清、鴿抗TJ20株血清對疫苗株LaSota和鴿源TJ20株4單位病毒抗原的血凝抑制（hemagglutination inhibition， HI）效價。每種雞的陽性血清有4份，每種鴿的陽性血清有10份，鴿血清用10％體積的雞紅細胞4 ℃處理1 h后，3 000 r·min-1離心1 min取上清后使用。使用 GraphPad 9.5 軟件對試驗數據進行統(tǒng)計學分析，交叉HI效價的結果用“±s”表示，利用t檢驗對同一血清對不同抗原的效價數據進行分析，**表示差異極顯著（P＜0.01），*表示差異顯著（P＜0.05），未標表示差異不顯著。

為了明確鴿源TJ20毒株與LaSota株之間的抗原性差異，根據Archetti和Horsfall的公式R=r1×r2計算病毒抗原相關系數R值［16］，其中，r值為血清對異源抗原的血凝抑制滴度/同源抗原的血凝抑制滴度。R代表兩病毒株間的抗原性差異，其中 R＜0.5表示抗原差異性大；0.5≤R＜0.67表示病原抗原差異??；0.67≤R≤1.5表示無抗原性差異［17］ 。

1.9 病毒的毒力分析

將消化好的BHK21細胞接種到96孔板中。待細胞密度為80％時，用DMEM將第五代病毒尿囊液進行連續(xù)10倍倍比稀釋后，取10-4～10-9稀釋度的病毒液接種細胞，0.1 mL·孔-1，每個稀釋度接種6個孔。將細胞置于細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，3 d后觀察細胞病變，按照Reed-Muench方法［18］計算細胞半數感染量（50％ tissue culture infective dose，TCID50）。

根據WOAH標準測定F5尿囊液的雞胚半數感染量（50％embryo infectious doses，EID50）、雞胚平均致死時間（mean death time，MDT）、1日齡雛雞腦內接種致病指數（intracerebral pathogenicity index in 1 day-old chickens，ICPI）。其中，MDT≤ 60 h為強毒株，在60～96 h時為中等毒力毒株，≥ 96 h時為弱毒株；ICPI為1.5～2.0時屬于強毒株，0.7～1.5時屬于中等毒力毒株，lt;0.7時屬于弱毒株。

1.10 動物回歸試驗

將20只1月齡大的信鴿隨機分為2組：對照組和攻毒組各10只。攻毒組通過胸部肌肉注射0.2 mL 106EID50病毒尿囊液，對照組肌肉注射0.2 mL PBS。攻毒后第3、5、7和10天采集信鴿口咽拭子和泄殖腔拭子，加入1 mL含有青鏈霉素的PBS中，棉拭子樣品經渦旋振蕩混勻4 ℃處理2 h，分別接種3枚9日齡SPF雞胚，0.2 mL·枚-1，96 h后收獲尿囊液測定HA效價。每天觀察動物臨床癥狀，直至14 d，并繪制生存曲線。根據文獻進行臨床評分［19-20］，臨床癥狀評分標準為正常記為0分，精神沉郁、縮脖記為1 分，翅膀下垂、斜頸、共濟失調記為2分，完全癱瘓、虛脫記為3分，死亡記為4分。

2 結 果

2.1 病毒分離及鑒定

利用NDV-F/NDV-R引物對病料進行RT-PCR檢測，核酸電泳結果顯示陽性對照（BJ-C毒株）和病料均擴增出256 bp的特異性目的條帶，與預期片段大小相符（圖1），表明NDV核酸陽性，PCR產物測序后發(fā)現與基因Ⅵ型NDV高度同源。

病毒傳代過程中，大部分雞胚于48～72 h死亡，死亡雞胚表現為全身性出血。收集第五代病毒尿囊液進行HA檢測，血凝效價為8log2，RT-PCR檢測NDV陽性（圖1），表明通過雞胚接種成功分離到NDV病毒，將其命名為Pigeon/TJ/CH/020/2020 （TJ20）。

2.2" F基因分析

利用F基因引物（ⅥF和ⅥR）擴增第五代病毒尿囊液，成功擴增出1 931 bp的特異性條帶（圖2）。F基因編碼區(qū)長為1 662 nt，編碼553個氨基酸，F0的裂解位點為112R-R-Q-K-R-F117，符合強毒株的裂解位點的特征［21］。

2.3 進化樹分析

為了研究TJ20株與其他NDV毒株之間的遺傳演化關系，選取F基因開放閱讀框序列與其他ClassⅡ類Ⅵ基因型中的265個NDV的F基因全長進行比對分析，隨后用MEGA11軟件構建進化樹。如圖3所示，2010年前我國的分離毒株屬于Ⅵ.1（原Ⅵ b）和Ⅵ.2.2.2（原Ⅵ e）［6，22］，2010年后我國的流行毒株主要以Ⅵ.2.1.1.2.1（原Ⅵ j）亞型和Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵ k）亞型為主［21］，其中Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵ k）亞型逐漸形成主要流行趨勢。TJ20株位于Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）分支中，所以TJ20屬于ClassⅡ類Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）基因亞型。

2.4 交叉血凝抑制試驗

為了確定不同物種的抗NDV血清與不同病毒的反應性，進行交叉HI測定。如圖4所示，所有血清的抗同源抗原的滴度均極顯著大于抗異源抗原的滴度，log2HI差值均≥2.4。雞來源的陽性血清計算得出TJ20與LaSota的抗原相似指數R值為0.15，鴿來源的陽性血清R值為0.13，表明本研究分離到的鴿源TJ20毒株與LaSota株間存在明顯的抗原性差異。

2.5 分離株毒力分析

對TJ20毒株進行毒力，HA為8log2，TCID50為10-8.64·0.1 mL-1、EID50為10-8.38·0.1 mL-1、MDT為62 h、ICPI為1.19。根據WOAH判斷毒力標準，與大多數鴿源NDV的毒力一樣屬于中等毒力毒株［7，21，23-24］。

2.6 動物回歸試驗

鴿感染TJ20株后第4天開始出現羽毛蓬松凌亂、嗜睡呆立癥狀、排黃綠色稀糞，接著出現、閉眼縮頸反應遲鈍、翅膀下垂、喜臥等癥狀。感染后第7～8天癥狀加劇，病鴿臥地不起、食欲廢絕，有的鴿出現癥狀后會突然死亡，臨床評分達到最大值（圖5）。綜合判定，所有鴿均出現臨床癥狀，發(fā)病率為100%。鴿感染TJ20株后第6天出現死亡，死亡高峰為攻毒后第8～10天，感染后第13天全部死亡，死亡率為100%（圖6）。對病死鴿進行剖檢，發(fā)現腦部出血、脾臟腫大、胰腺壞死、氣管出血、腸道黏連。對照組鴿表現正常，無臨床癥狀，剖檢未發(fā)現明顯病變。

通過雞胚感染試驗檢測攻毒第3、5、7、10天后鴿的排毒情況，感染組第5、7、10天泄殖腔排毒率均為100％，口咽在第7天排毒率最高（3/9）。泄殖腔比口咽排毒檢出率高，在攻毒后第5天達到排毒高峰，對照組未檢測到排毒（表2）。

3 討 論

鴿新城疫病毒能引發(fā)不同品種、不同年齡的鴿感染，并且傳播迅速、死亡率高。感染的潛伏期因病毒毒力、感染鴿品種及飼養(yǎng)管理水平不同而存在差異，一般為3～5 d。臨床癥狀以神經癥狀為主，表現為頭頸扭曲、頭部震顫、癱瘓起不來，采食困難最后衰竭死亡［25-26］。世界上有4次ND大流行，其中2次的主要病原是鴿源新城疫病毒［9，27-28］。1985年該病傳播到我國香港之后嚴重影響我國養(yǎng)禽業(yè)［29］。近年來，鴿養(yǎng)殖飛速發(fā)展并已經成為特種養(yǎng)殖的核心產業(yè)，鴿的疫病防控也因而顯得更加重要。對鴿源NDV流行特點和致病性進行研究，可為疫病防控和疫苗研發(fā)提供有效參考，對養(yǎng)禽業(yè)具有重要意義。

本研究采用雞胚傳代培養(yǎng)的方法從疑似NDV感染的病鴿中分離得到一株鴿源新城疫病毒TJ20株，雞胚接種該毒株后大多數在48～72 h死亡，且其F蛋白裂解位點（112R-R-Q-K-R-F117）含有多個連續(xù)堿性氨基酸殘基，符合強毒株的特征［30］。對F基因全長序列進行遺傳演化分析，結果顯示2010年前我國的分離毒株屬于Ⅵ.1（原Ⅵ b）和Ⅵ.2.2.2（原Ⅵe）［6，22］，2010年后我國的流行毒株主要以Ⅵ.2.1.1.2.1（原Ⅵ j）亞型和Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵ k）亞型為主［21］，其中Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵ k）亞型逐漸占據優(yōu)勢流行地位。進化樹中VI.2.1.1.2.2亞型的毒株最早記錄的毒株為PPMV-1/Belgium/05-03936-8/2005（JX901120），接著是Rosella/Belgium/4940/08（JN872162），自從傳入我國后在多個省份均有發(fā)現，且都與其他2011年的歐洲分離株（JX901122、JX901123和JX901124）的遺傳演化距離比較近，最后形成了獨立的分支并顯示出不斷演化的趨勢，所以推測中國流行的VI.2.1.1.2.2亞型毒株可能源于歐洲，這與Qiu等［7］和He等［11］的預測PPMV-1的來源結果一致。本研究的TJ20株位于VI.2.1.1.2.2（原VIk）分支中，同時與之前報道的2010年后中國的流行毒株主要以為Ⅵ.2.1.1.2.2亞型為主的內容相符［21］。

目前常規(guī)新城疫疫苗主要是弱毒疫苗和滅活疫苗，鴿場廣泛使用Ⅳ系疫苗（LaSota）進行免疫。此疫苗主要為防控雞新城疫開發(fā)的，雖然對鴿能起到一定的保護作用，但也會出現零星散發(fā)新城疫的現象，保護效果不佳。主要是疫苗毒株與感染毒株之間存在抗原差異造成的。由進化樹分析可知PPMV-1逐漸形成獨立的分支（Ⅵ基因型），近些年主要為Ⅵ.2.1.1.2.1（原Ⅵ j）亞型和Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵ k）亞型，與基因Ⅱ型的LaSota疫苗株遺傳演化關系較遠，存在明顯的抗原差異。另外本研究通過TJ20株、LaSota株2不同抗原與各自雞或鴿的陽性血清的交叉血凝抑制試驗，得到結果為不同病毒的同源抗原滴度均極顯著大于異源抗原滴度，且抗原相關系數R值分別為0.15和0.13，表明LaSota疫苗株和鴿源TJ20毒株存在明顯的抗原差異，這與李仕超等［31］、Qiu等［7］測定的鴿源分離株與LaSota疫苗株抗原存在明顯抗原差異的結果一致，這意味著使用雞用疫苗株LaSota免疫鴿存在免疫失敗的風險，可能是此次已免疫LaSota疫苗的天津信鴿感染鴿瘟的主要原因，所以臨床上急需研制針對鴿副黏病毒Ⅰ型抗原類型的疫苗。

利用MDT和ICPI的方法評估TJ20的毒力，發(fā)現其屬于中強毒株。據報道雖然鴿源NDV具有強毒株F蛋白裂解位點的特征但MDT、ICPI為中等或低等毒力，但是該毒力評價體系的建立是基于NDV對雞的致病力的評價，存在一定的局限性［32-33］，因此鴿源NDV對于鴿的致病性還需要進一步進行易感動物試驗確認。本研究使用TJ20株對本體動物鴿進行人工感染試驗，攻毒組鴿出現新城疫感染典型的癥狀：嚴重腹瀉和神經癥狀，發(fā)病率和死亡率均為100％，表明TJ20株對鴿具有較強致病性。雞胚接種是判定新城疫的標準方法，用其檢測攻毒組口咽和泄殖腔的排毒情況，結果發(fā)現泄殖腔的排毒檢出率高于口咽。感染后第5天，試驗鴿泄殖腔的排毒可以達到高峰100％，說明該時間點發(fā)病鴿的泄殖腔排毒可以完全檢出，推測為最佳檢測時間點。隨著病程的發(fā)展第10天泄殖腔還在持續(xù)排毒（排毒率100％），以上結果說明病鴿主要通過泄殖腔向環(huán)境中持續(xù)排毒污染環(huán)境。雖然不同的PPMV-1分離株對鴿的致病性不同，但近些年報道的鴿源新城疫毒株都對鴿有較強的致病性和傳播能力［34-35］，預示著PPMV-1越來越適應鴿群，逐漸發(fā)生適應性變異。

4 結 論

成功分離一株ClassⅡ類Ⅵ.2.1.1.2.2（原Ⅵk）基因亞型的鴿副黏病毒Ⅰ型（PPMV-1毒株，命名為Pigeon/TJ/CH/020/2020 （TJ20）。此毒株與疫苗株LaSota存在較大的抗原性差異，且對鴿具有較強的致病性。研究結果為探究國內鴿新城疫的流行特點、病原致病機制和疫苗研發(fā)提供依據。

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（編輯 白永平）