摘 要：經(jīng)過(guò)多年對(duì)多花黃精組培快繁技術(shù)的實(shí)踐和研究，總結(jié)出一套較為全面的技術(shù)規(guī)程。該規(guī)程涵蓋了組培快繁術(shù)語(yǔ)與定義、車(chē)間的設(shè)計(jì)、組培生產(chǎn)流程、煉苗與移栽、質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸?shù)汝P(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，此技術(shù)規(guī)程可為多花黃精組培苗工廠化生產(chǎn)提供參考。

關(guān)鍵詞：多花黃精；組織培養(yǎng)；快速繁殖；技術(shù)規(guī)程

中圖分類(lèi)號(hào)：S567.239 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：0253?2301（2024）07?0057?05

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2024.07.010

Technical Regulations for Tissue Culture and Rapid Propagation of Polygonatum cyrtonema

ZHOUJian-jin，LINYu-ling，WANGJin-dun，XIAOYing，LUOXiao-feng

（1.Sanming Academy of Agricultural Sciences， Sanming， Fujian 365051， China;2.Institute of Horticultural Plant

Biotechnology， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002， China;

3.Sanming Forestry Planning Team， Sanming， Fujian 365000， China;4.School of Food and Tourism，

Shanghai Urban Construction Vocational College， Shanghai 201415， China）

Abstract： ThroughyearsofpracticeandresearchonthetissuecultureandrapidpropagationtechnologyofPolygonatum cyrtonemaHua，asetofrathercomprehensivetechnicalregulationswassummarized.Theregulationcoveredthekeytechnicallinkssuchasthetermanddefinitionoftissuecultureandrapidpropagation，thedesignofworkshop，theproductionflowoftissueculture，refiningseedlingandtransplanting，qualitygradingstandard，packaging，markingandtransportation.ThistechnicalregulationcouldprovidereferencefortheindustrialproductionoftissueculturedseedlingofPolygonatum cyrtonemaHua.

Key words： Polygonatum cyrtonema；Tissueculture；Rapidreproduction；Technicalregulations

多花黃精Polygonatum CyrtonemaHua系百合科黃精屬多年生藥食同源草本，藥用歷史有2000多年，在我國(guó)南方地區(qū)作黃精藥材使用[1]。目前，許多地區(qū)多花黃精藥材依然主要靠采集野生資源，對(duì)野生資源造成了嚴(yán)重的破壞。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，多花黃精在福建南平市、三明市、龍巖市等林下大面積種植，種植的種苗大多數(shù)來(lái)自本地野生資源，且湖南、安徽、浙江等省每年從福建購(gòu)買(mǎi)野生多花黃精種苗達(dá)500萬(wàn)株，致使福建野生多花黃精資源瀕臨枯竭。

野生多花黃精品種繁多，但若直接采用野生資源作為種苗，會(huì)導(dǎo)致品種混雜、種苗質(zhì)量良莠不齊、品質(zhì)退化等一系列問(wèn)題，更有甚者，誤把長(zhǎng)梗黃精當(dāng)作多花黃精進(jìn)行種植，從而造成經(jīng)濟(jì)上的巨大損失，不利于多花黃精產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[2?5]。優(yōu)質(zhì)種苗是多花黃精產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的有效保障[6]。目前，多花黃精繁殖包括根莖、種子和組培繁殖[7]，根莖繁殖與藥材競(jìng)爭(zhēng)原料，且繁殖系數(shù)小、成本高，長(zhǎng)期的根莖繁殖也更易造成種質(zhì)性狀退化；種子育苗周期長(zhǎng)且不能維持品種的遺傳穩(wěn)定性；組培繁殖存在成本高、投入大、種苗質(zhì)量不佳等問(wèn)題，這些問(wèn)題嚴(yán)重阻礙了多花黃精產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[7?8]。福建省雖然于2014年發(fā)布了DB35/T1437—2014《多花黃精栽培技術(shù)規(guī)程》，進(jìn)一步規(guī)范福建省多花黃精塊莖和種子育苗技術(shù)，但尚未有組培快繁技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。組織快繁可有效地保護(hù)野生資源、提高種苗生產(chǎn)效率、縮短育苗周期等，是解決多花黃精市場(chǎng)上存在諸多問(wèn)題的最佳方法，同時(shí)也有利于新品種的及時(shí)推廣，是實(shí)現(xiàn)良種良苗的重要途徑。因此，經(jīng)過(guò)多年的實(shí)踐與研究，在多花黃精的組培快繁技術(shù)方面取得顯著的進(jìn)展，通過(guò)結(jié)合育苗基質(zhì)及育苗地管理技術(shù)，不僅有效提升了組培種苗的質(zhì)量，還成功降低了組培成本。綜合這些研究成果及現(xiàn)有育苗技術(shù)，總結(jié)出多花黃精組培快繁技術(shù)規(guī)程，為多花黃精產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展打下扎實(shí)的基礎(chǔ)。

1 范圍

本規(guī)程規(guī)定了多花黃精Polygonatum CyrtonemaHua組培苗生產(chǎn)的組培快繁術(shù)語(yǔ)與定義、車(chē)間的設(shè)計(jì)、組培生產(chǎn)流程、煉苗與移栽、質(zhì)量分級(jí)以及包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸?shù)葍?nèi)容。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于多花黃精組培苗生產(chǎn)、管理的全過(guò)程。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

DB35/T1437—2014多花黃精栽培技術(shù)規(guī)程

3 術(shù)語(yǔ)與定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1多花黃精

符合《中國(guó)植物志》[3]收載的百合科植物黃精屬多花黃精的植物特征，并經(jīng)過(guò)植物學(xué)和中藥學(xué)專(zhuān)家鑒定確認(rèn)。

3.2組織培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞及原生質(zhì)體培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過(guò)程和技術(shù)。

3.3滅菌

通過(guò)物理、化學(xué)及一些理化方法殺滅一切微生物（包括孢子等）的過(guò)程。

3.4接種

將消毒后的外植體或干凈培養(yǎng)材料在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)基中的過(guò)程。

3.5外植體

用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。

3.6誘導(dǎo)培養(yǎng)

將滅菌后的外植體或培養(yǎng)材料接種到誘導(dǎo)愈傷組織或叢生芽等器官的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。3.7愈傷組織在組織培養(yǎng)條件下，植株細(xì)胞經(jīng)脫分化等一系列過(guò)程，轉(zhuǎn)變成一種能迅速增殖的無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞團(tuán)。

3.8叢生芽

由多個(gè)基部相連的離體小芽組成的一團(tuán)芽。

3.9增殖培養(yǎng)

離體芽苗、愈傷組織或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞不斷倍增的培養(yǎng)過(guò)程。

3.10生根培養(yǎng)

誘導(dǎo)無(wú)根離體芽苗生根的培養(yǎng)過(guò)程。

3.11試管苗

在培養(yǎng)容器中生長(zhǎng)且已達(dá)移栽標(biāo)準(zhǔn)的根、莖、葉俱全的完整植株。

3.12煉苗

將試管苗連培養(yǎng)瓶一起移至室外近自然環(huán)境中培養(yǎng)，增強(qiáng)苗木對(duì)自然光照和溫差變化適應(yīng)能力的過(guò)程。

3.13移栽

將試管苗種植到苗圃，并使苗木逐漸適應(yīng)自然條件的過(guò)程。

注：其他常見(jiàn)植物組培術(shù)語(yǔ)和定義按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》的附錄A執(zhí)行。

4 組培車(chē)間與育苗區(qū)設(shè)計(jì)

4.1設(shè)計(jì)要求

組培車(chē)間應(yīng)建在干燥、通風(fēng)透光、空氣清新的地點(diǎn)。組培車(chē)間主要包括：洗滌室、藥品室（稱(chēng)量室）、培養(yǎng)基配制室、滅菌室、培養(yǎng)基儲(chǔ)備室、接種室、培養(yǎng)室等。

育苗區(qū)主要包括煉苗室和溫室大棚。

4.2面積要求

不同規(guī)模的多花黃精組培車(chē)間與育苗區(qū)的面積要求按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》附錄A執(zhí)行。

4.3儀器設(shè)備及試劑

所需的儀器設(shè)備及試劑主要包括滅菌設(shè)備、接種設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備和組培常規(guī)試劑。不同規(guī)模多花黃精組培車(chē)間所需的儀器設(shè)備及試劑按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》附錄B、附錄C、附錄D執(zhí)行。

5 組培生產(chǎn)流程

5.1母種選擇

選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的多花黃精植株留種。

5.2培養(yǎng)基選擇與母液配制

5.2.1培養(yǎng)基選擇 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基成分及用量按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》附錄F中的MS培養(yǎng)基執(zhí)行。5.2.2母液的配制 制作培養(yǎng)基前需先配制基本培養(yǎng)基母液，MS基本培養(yǎng)基母液配制方法按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》附錄G執(zhí)行。

5.2.3植物生長(zhǎng)素物質(zhì)的母液配制 植物生長(zhǎng)素的母液配制方法如下：（1）1.0mg·mL?16-BA（6-芐氨基腺嘌呤），先用適量0.1mol·L?1的鹽酸（HCI）充分溶解，去離子水定容；（2）1.0mg·mL?1NAA（萘乙酸），先用適量95%或無(wú)水乙醇充分溶解，去離子水定容。母液配制好后貼好標(biāo)簽，置于4℃左右的冰箱內(nèi)，保存期應(yīng)不超過(guò)2個(gè)月。

5.3培養(yǎng)基制作

5.3.1培養(yǎng)基配制 取配置好的母液，加入激素，充分?jǐn)嚢杈鶆?，用去離子水定容，加入瓊脂5.5～6.0g·L-，白砂糖30～60g·L?1，加熱溶解。pH值用HCl或NaOH調(diào)至5.4～5.8。

5.3.2培養(yǎng)基分裝 將配制好的培養(yǎng)基根據(jù)不同需要定量分裝，誘導(dǎo)所用培養(yǎng)瓶（容積為250mL，培養(yǎng)基量25～30mL）、增殖所用培養(yǎng)瓶（容積為650mL，培養(yǎng)基量70～90mL）和生根所用培養(yǎng)瓶（容積為650mL，培養(yǎng)基量100～120mL），分裝后，蓋上瓶蓋。

5.3.3高壓滅菌 分裝后的培養(yǎng)基應(yīng)在10h內(nèi)通過(guò)高壓蒸氣滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌要求121℃保持21min。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)注明編號(hào)及配制日期。按培養(yǎng)基種類(lèi)和配制先后儲(chǔ)存于培養(yǎng)基貯藏室內(nèi)。為保證培養(yǎng)基質(zhì)量，將配制好的培養(yǎng)基放置5d左右觀察再用，且貯存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月。

5.4外植體

5.4.1外植體采取 待10～11月留種植株種子成熟（果肉變軟）或倒苗后，采其果實(shí)或于晴天挖取多花黃精健壯的帶芽塊莖。

5.4.2外植體預(yù)處理 采用種子為外植體時(shí)，將采到的果實(shí)置于0～4℃冰箱放置4個(gè)月后，揉搓去果肉漂洗干凈得到種子，晾干備用。采用帶芽塊莖為外植體，將塊莖經(jīng)清洗消毒，以芽體為中心，切成0.3～0.5cm×0.3～0.5cm大小的塊莖，晾干備用。

5.4.3外植體消毒 將外植體置于700倍液濃度的代森錳鋅中浸泡30min，取出外植體，晾干后在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡15s，無(wú)菌水沖洗2～4次后，再投入0.1%的升汞中，不停搖晃，持續(xù)8～10min后取出，再用無(wú)菌水沖洗5～8次后，置于常溫phiUdb8NmYaAK7YWy986ee5QvTXmJa3rbNrjXHY/XL8=條件，晾干備用。

5.5接種準(zhǔn)備及接種操作

接種準(zhǔn)備和外植體接種操作規(guī)范按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》第10章執(zhí)行。

5.6組織培養(yǎng)過(guò)程

5.6.1誘導(dǎo)培養(yǎng) 將5.4.3消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，一瓶?jī)H接1塊外植體，做好接種標(biāo)記。誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA1.0mg·L-+NAA0.5mg·L+白砂糖30g·L?1+瓊脂?15.5g·L，pH值調(diào)至5.4～5.6。培養(yǎng)1周后，種子開(kāi)始發(fā)芽或塊莖基部開(kāi)始膨大，培養(yǎng)6周后，長(zhǎng)出愈傷組織或叢生芽[9?10]。

5.6.2增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)基配方：MS+6-BA2.0mg·L-+NAA0.2mg·L+蔗糖30g·L?1+瓊脂5.5g·L?1，pH值調(diào)至5.4～5.6[11?12]。將誘導(dǎo)培養(yǎng)后，長(zhǎng)出的愈傷組織或叢生芽，在超凈工作臺(tái)上取出，在無(wú)菌盤(pán)上，將株高≥2.5cm的苗，轉(zhuǎn)接到5.6.4生根培養(yǎng)基，其余塊莖切割成0.5～0.8cm×0.5～0.8cm大小，芽體朝上，均勻排放到增殖培養(yǎng)基里，650mL培養(yǎng)瓶接種數(shù)量7～8塊。做好接種和增殖代數(shù)標(biāo)記[11]。（注意增殖代數(shù)不應(yīng)超過(guò)15代）。

5.6.3增殖壯苗培養(yǎng) 增殖壯苗培養(yǎng)基配方：MS+6-BA1.0mg·L-+NAA0.5mg·L+蔗糖60g·L?1+瓊脂5.5g·L?1，pH值調(diào)至5.4～5.6。將已循環(huán)增殖后略發(fā)白的愈傷組織或葉片畸形的叢生芽轉(zhuǎn)接增殖壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30～40d后，塊莖再次膨大，新的發(fā)黃愈傷組織或健壯芽體冒出。

5.6.4生根培養(yǎng) 生根培養(yǎng)基配方：MS+6-BA0.2mg·L+NAA0.2mg·L+蔗糖30g·L?1+瓊脂5.5g·L，pH值調(diào)至5.6～5.8[12?13]。pH調(diào)至5.6～5.8。將增殖或增殖壯苗培養(yǎng)后，株高≥2.5cm的苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基里，每瓶轉(zhuǎn)接多花黃精苗10～12株，做好接種和增殖代數(shù)標(biāo)記。生根培養(yǎng)30d后，幼苗基部長(zhǎng)出3～6條新根，當(dāng)根長(zhǎng)到3～4cm時(shí)，可直接進(jìn)行煉苗移栽，亦可根據(jù)生產(chǎn)需要，將瓶苗重復(fù)增殖和生根培養(yǎng)，獲得大量多花黃精瓶苗和增殖苗。

5.6.5培養(yǎng)室操作 培養(yǎng)室溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度2000～3000lx，每日光照12h。其他培養(yǎng)室操作按照NY/T2306—2013《花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》中第11章執(zhí)行。

5.7試管苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

合格試管苗分為Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)。具體分級(jí)指標(biāo)見(jiàn)表1。

6 煉苗與移栽

6.1煉苗

將培養(yǎng)好的多花黃精生根苗不重疊放置在大棚內(nèi)，煉苗5～7d，打開(kāi)瓶蓋放置2～3d，即可進(jìn)入移栽階段[14]。

6.2洗苗

向瓶中加入少量自來(lái)水，將瓶橫向輕搖使培養(yǎng)基松散，輕輕將苗和培養(yǎng)基順瓶口取出，在自來(lái)水中進(jìn)行清洗，洗凈根部附著的培養(yǎng)基。

6.3消毒

將分級(jí)放置的多花黃精瓶苗分別用代森錳鋅1000～1500倍液浸泡20～30min，放于陰涼、通風(fēng)、透氣處保存?zhèn)溆谩?/p>

6.4基質(zhì)準(zhǔn)備

基質(zhì)為泥炭土∶沙子的均勻混合物，其混合比為2：1。將配制好的基質(zhì)裝入規(guī)格為59cm×35cm×5cm的32孔的穴盤(pán)或育苗床（長(zhǎng)度規(guī)格由實(shí)地來(lái)定，寬×高規(guī)格100～120cm×20～25cm）中，用1500倍液代森錳鋅澆透滅菌備用[15]。

6.5移栽

6.5.1移栽時(shí)間 1月至12月，最佳時(shí)間為11月至翌年2月。

6.5.2移栽方法 栽植時(shí)分級(jí)栽植。用竹片在穴孔或苗床中插一小洞，將新萌芽向上放入，用基質(zhì)壓緊小塊莖，稍加鎮(zhèn)壓，在面上覆蓋一層厚2cm松針或碎草，栽后用1200倍液代森錳鋅澆透滅菌。

6.5.3穴盤(pán)培養(yǎng) 將多花黃精苗移栽至穴盤(pán)內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

6.5.4苗床培養(yǎng) 將多花黃精苗移栽至育苗床內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，株行距5cm×5cm。

6.6管理

試管苗苗期管理按照DB35/T1437—2014《多花黃精栽培技術(shù)規(guī)程》中5.1.4執(zhí)行。

6.7有害生物防治

有害生物防治按照DB35/T1437—2014《多花黃精栽培技術(shù)規(guī)程》中附錄A。

6.8移栽苗分級(jí)

合格移栽苗分為Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)苗，具體分級(jí)指標(biāo)見(jiàn)表2。

6.9建檔

將外植體采集地點(diǎn)、采集數(shù)量和處理時(shí)間，多花黃精增殖苗及生根苗接種、培養(yǎng)時(shí)間、批次、煉苗移栽等內(nèi)容進(jìn)行登記，建立健全多花黃精組培快繁技術(shù)檔案，做到溯源可查。

7 包裝、標(biāo)志和運(yùn)輸

7.1包裝

7.1.1組培瓶苗的包裝 將組培瓶苗放在泡沫箱內(nèi)，瓶與瓶之間，層與層之間相互擠緊，不留空隙，泡沫箱外再用適宜尺寸的硬紙箱包裝。

7.1.2試管苗的包裝 試管苗去除培養(yǎng)基后，裝入小塑料盒或打孔的塑料袋內(nèi)，再放入泡沫箱，泡沫箱外再用適宜尺寸的硬紙箱包裝。

7.1.3移栽苗的包裝 穴盤(pán)苗或育苗床內(nèi)的苗取出后，把苗裝在打孔的泡沫盒中包裝。

7.2標(biāo)志

每箱應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明品種、等級(jí)、規(guī)格、數(shù)量、產(chǎn)地、出苗日期等。

7.3運(yùn)輸

裝車(chē)時(shí)切勿倒置，避免日曬、雨淋，運(yùn)輸途中溫度保持10～20℃，5d內(nèi)到達(dá)目的地。

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