關(guān)鍵詞 清血消脂降糖方；2 型糖尿病；胰島素抵抗；蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶；叉頭框蛋白O1

2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是以胰島素抵抗（insulin resistance，IR）和胰島β細(xì)胞功能不足導(dǎo)致血糖調(diào)節(jié)失常為主要特征的慢性代謝紊亂疾病[1]。在T2DM中，IR 導(dǎo)致的高胰島素血癥和高血糖會(huì)通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制加劇IR；同時(shí)胰島素反應(yīng)性降低，無(wú)法有效抑制肝葡萄糖輸出，導(dǎo)致肝臟發(fā)生IR，從而進(jìn)一步加劇糖脂代謝紊亂[2]。故改善IR是治療T2DM的關(guān)鍵策略。

IR、慢性低度炎癥與氧化應(yīng)激之間關(guān)系復(fù)雜。慢性炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激可通過(guò)損害胰島素信號(hào)傳導(dǎo)等途徑誘發(fā)或加重IR；同時(shí)，IR 可導(dǎo)致糖脂代謝紊亂，進(jìn)而加劇炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，形成惡性循環(huán)[3]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）在IR 的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，當(dāng)機(jī)體處于持續(xù)應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無(wú)法正確折疊蛋白質(zhì)，從而引發(fā)ERS[4]。蛋白激酶R 樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）作為關(guān)鍵傳感器，在肝臟糖代謝中扮演著重要角色。當(dāng)發(fā)生ERS 時(shí)，肝臟PERK 信號(hào)通路被激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)下游叉頭框蛋白O1（forkhead box O1，F(xiàn)OXO1）活性，促進(jìn)糖異生，增加肝糖輸出，最終加重IR引起的高血糖[5]。此外，PERK信號(hào)通路可通過(guò)抑制胰島素受體酪氨酸激酶活性、促進(jìn)胰島素受體降解、抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和促進(jìn)脂質(zhì)合成等，進(jìn)一步抑制胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，加劇IR[6]。

清血消脂降糖方是在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院名老中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)方清血消脂方的基礎(chǔ)上繼承和創(chuàng)新而成，具有清熱瀉火、健脾化痰、活血消瘀的功效，臨床用于治療T2DM收效頗佳，但其具體作用機(jī)制尚不明確。本研究擬構(gòu)建T2DM大鼠模型，初步探討清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠IR 的影響，并從PERK/FOXO1信號(hào)通路出發(fā)初步探討其潛在作用機(jī)制，為該方防治T2DM提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有ACCU-CHEK Active 型血糖儀[羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司]、Synergy H1 型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek 公司）、3-18K型高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma 公司）、Aperio CS2 型玻片掃描儀、Autostainer XL 型全自動(dòng)染色機(jī)（德國(guó)Leica 公司）、MM400 型高通量組織研磨系統(tǒng)（德國(guó)Retsch 公司）、Tanon 4600 型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

黃連、虎杖、大黃、姜黃、澤瀉、萆薢、茵陳、白術(shù)、石菖蒲、紅花中藥飲片（批號(hào)分別為23052405、20221106、230513001、21061003、20231024、20221116、20230731、23101202、20230727、20230922）均購(gòu)于北京同仁堂制藥有限公司，經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部韓旭陽(yáng)副主任藥師鑒定均為真品；鹽酸二甲雙胍片（規(guī)格250 mg/片，批號(hào)H37020550）購(gòu)于蓬萊諾康藥業(yè)有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoproteincholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-densitylipoprotein cholesterol，HDL-C）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartatetransaminase，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）生化試劑盒（批號(hào)分別為20240123、20240123、20240123、20240123、20230714、20240120、20240120）均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）、檸檬酸鈉緩沖液及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)分別為S8085、C1013、BC0025、BC5165）均購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（批號(hào)分別為A30640321、A38240412、A39440151）均購(gòu)于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司；胰島素ELISA 試劑盒（批號(hào)BSI2405141864）購(gòu)于上海愛(ài)萌優(yōu)寧生物技術(shù)有限公司；鼠源β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）單克隆抗體（批號(hào)TA-09）購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔源PERK多克隆抗體（批號(hào)24390-1-AP）購(gòu)于武漢三鷹技術(shù)有限公司；兔源磷酸化PERK（p-PERK）多克隆抗體（批號(hào)3179S）、兔源磷酸化FOXO1（p-FOXO1）單克隆抗體（批號(hào)84192S）均購(gòu)于美國(guó)CST公司；兔源FOXO1 單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗鼠IgG 二抗、HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗（批號(hào)分別為ab179450、ab6789、ab6721）均購(gòu)于英國(guó)Abcam公司。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為SPF 級(jí)SD雄性大鼠，共84 只，6周齡，體重（200±30） g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2021-0006]。大鼠購(gòu)入后，飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院北京市中醫(yī)藥研究所SPF 級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，飼養(yǎng)環(huán)境為12 h 明/12 h 暗交替、溫度（22±2） ℃、相對(duì)濕度（40±5）%，飼養(yǎng)期間大鼠自由活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院北京市中醫(yī)藥研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)為SQ-2022-02-50）。

2 方法

2.1 藥液制備

清血消脂降糖方組成：黃連30 g，虎杖、大黃、姜黃、澤瀉、茵陳、白術(shù)各15 g，萆薢、石菖蒲各10 g，紅花5 g。取以上藥材，用10 倍量水浸泡60 min，煎煮1 h，趁熱紗布過(guò)濾；取藥渣加8 倍量水二次煎煮30 min，過(guò)濾，合并煎液，濃縮濾液質(zhì)量濃度為1.305 g/mL（以生藥量計(jì)）。使用研缽研磨二甲雙胍片直至粉末狀，計(jì)算所需給藥劑量后以0.5% 羧甲基纖維素鈉溶液進(jìn)行溶解。

2.2 造模、分組與給藥

SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為正常對(duì)照組（8 只）和造模組（76 只）。正常對(duì)照組大鼠予以普通飼料飼養(yǎng)，造模組大鼠予以高脂高糖飼料飼養(yǎng)。連續(xù)喂養(yǎng)4 周后，造模組大鼠隔天按30 mg/kg 腹腔注射1 次STZ溶液（0.1 mol/L；以pH4.5 檸檬酸鈉無(wú)菌緩沖溶液為溶劑，現(xiàn)配現(xiàn)用），共注射3 次；正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量檸檬酸鈉緩沖液。以大鼠非同日檢測(cè)（隔天檢測(cè)1 次）的3 次空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）＞11.1 mmol/L、隨機(jī)血糖＞16.7 mmol/L 為T(mén)2DM造模成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，共有44 只大鼠造模成功。根據(jù)體重及FBG結(jié)果將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組及清血消脂降糖方低、高劑量組（6.525、13.05 g/kg；根據(jù)人與大鼠體表面積換算，分別為0.5、1 倍臨床等效劑量）和二甲雙胍組（陽(yáng)性對(duì)照，0.18 g/kg，臨床等效劑量），每組11 只。給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組、模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水；每日1 次，持續(xù)6 周。實(shí)驗(yàn)期間，正常對(duì)照組大鼠均存活，模型組大鼠因血糖持續(xù)升高死亡4 只，3 個(gè)給藥組大鼠因在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作不當(dāng)共死亡4 只，每組最終均以8只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.3 體重、FBG測(cè)定及口服葡萄糖耐量試驗(yàn)

給藥前及給藥后每周末記錄大鼠體重、FBG。末次給藥后，大鼠禁食不禁水12 h，進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT），測(cè)量各組大鼠FBG（即0 min 時(shí)血糖值），然后灌胃50% 葡萄糖溶液（2g/kg），分別于糖負(fù)荷30、60、120 min 時(shí)，采用尾尖取血法測(cè)定大鼠血糖值，繪制OGTT曲線(xiàn)并計(jì)算葡萄糖曲線(xiàn)下面積（area under the curve，AUC）。葡萄糖AUC＝（0min 血糖值+2×30 min 血糖值+3×60 min 血糖值+2×120 min血糖值）/4。

2.4 取材及樣本處理

OGTT后第2 天，大鼠禁食不禁水12 h，稱(chēng)重并測(cè)量大鼠FBG 后，處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血并以3 000 r/min離心10 min，留上清，置于－80 ℃冰箱中保存。取血后，解剖大鼠，迅速取相同部位的肝臟中葉，使用生理鹽水漂洗干凈，將部分組織固定于10% 中性固定液中，另一部分組織置于－80 ℃冰箱中保存。

2.5 血清胰島素水平、生化指標(biāo)及炎癥因子檢測(cè)

取血清樣品，采用ELISA 法檢測(cè)血清空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）水平，并計(jì)算大鼠胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index，ISI）。HOMA-IR＝FINS（mIU/L）×FBG（mmol/L）/22.5，ISI＝1/（FBG×FINS）。由于ISI 為非正態(tài)分布，計(jì)算結(jié)果取自然對(duì)數(shù)[8]。采用微量法檢測(cè)大鼠血清中血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）、肝功能（ALT、AST、AKP）及氧化應(yīng)激（MDA、SOD）指標(biāo)水平；采用ELISA 法檢測(cè)血清中炎癥因子（IL-6、TNF-α、CRP）水平。

2.6 肝組織病理學(xué)觀察

取10% 中性固定液固定的肝組織，經(jīng)乙醇梯度脫水后，依次放入二甲苯中透明，再浸入石蠟中進(jìn)行包埋，制成5 μm厚切片。使用全自動(dòng)染色機(jī)進(jìn)行HE染色后，采用玻片掃描儀進(jìn)行成像。

2.7 肝組織中PERK/FOXO1 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用Western blot 法檢測(cè)。取適量置于－80 ℃保存的大鼠肝組織，加入RIPA裂解液進(jìn)行勻漿，靜置30 min后，在4 ℃下以12 000 r/min 離心10 min，取上清，采用BCA 法檢測(cè)總蛋白濃度。每組取15 μg 總蛋白煮沸變性，上樣進(jìn)行電泳（以恒壓80 V啟動(dòng)，蛋白進(jìn)入分離膠后調(diào)至120 V），在恒流400 mA下濕法轉(zhuǎn)膜，以快速封閉液封閉；加入β-actin（稀釋度為1∶2 000）、PERK（稀釋度為1∶500）以及p-PERK、FOXO1、p-FOXO1（稀釋度均為1∶1 000）一抗，4 ℃孵育過(guò)夜；漂洗3 次，加入對(duì)應(yīng)二抗（稀釋度均為1∶10 000），室溫孵育40 min；漂洗3 次，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行成像，采用Image J 軟件分析蛋白灰度值，以p-PERK 與PERK、p-FOXO1 與FOXO1 的灰度比值分別表示PERK、FOXO1蛋白的磷酸化水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 9.5 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖。通過(guò)Shapiro-Wilk 進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s 表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠體重、FBG的影響

給藥前，與正常對(duì)照組比較，其余各組大鼠體重均顯著降低（P＜0.05），F(xiàn)BG均顯著升高（P＜0.05）。給藥6 周后，與模型組比較，清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠體重均顯著升高（P＜0.05），F(xiàn)BG 均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠OGTT結(jié)果的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠在糖負(fù)荷30 min時(shí)血糖值達(dá)峰值，且在糖負(fù)荷60、120 min 時(shí)血糖值及葡萄糖AUC 仍顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠在糖負(fù)荷0、120 min 時(shí)的血糖值、葡萄糖AUC 以及二甲雙胍組大鼠在糖負(fù)荷30 min 時(shí)的血糖值、清血消脂降糖方低劑量組大鼠葡萄糖AUC 均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠血清胰島素水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠FINS、HOMA-IR顯著升高（P＜0.05），ISI 顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠FINS、HOMA-IR 均顯著降低（P＜0.05），ISI 均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

3.4 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠血脂水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中LDL-C、TC、TG水平均顯著升高（P＜0.05），HDL-C水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中LDLC、TC、TG水平均顯著降低（P＜0.05），清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠血清中HDL-C水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

3.5 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠肝功能、氧化應(yīng)激及炎癥相關(guān)指標(biāo)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中ALT、AST、AKP、MDA、IL-6、TNF- α、CRP 水平均顯著升高（P＜0.05），SOD水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中ALT、AST、AKP、MDA、IL-6、TNF-α、CRP 水平均顯著降低（P＜0.05），清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠血清中SOD水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表5。

3.6 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠肝組織病理學(xué)的影響

正常對(duì)照組大鼠肝組織形態(tài)規(guī)則，肝小葉結(jié)構(gòu)緊密，肝細(xì)胞排列有序，肝血竇界限清晰，周?chē)匆?jiàn)明顯纖維組織增生或炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，膽小管和門(mén)管區(qū)結(jié)構(gòu)較為完整。模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)異常，肝細(xì)胞排列紊亂，出現(xiàn)明顯空泡變性及脂肪變性；胞漿內(nèi)可見(jiàn)脂滴空泡，肝血竇出現(xiàn)少量瘀血現(xiàn)象，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織形態(tài)及病理變化均有不同程度改善。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.7 清血消脂降糖方對(duì)T2DM大鼠肝組織中PERK/FOXO1 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中PERK、FOXO1 蛋白磷酸化水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，清血消脂降糖方高劑量組和二甲雙胍組大鼠肝組織中PERK、FOXO1 蛋白磷酸化水平顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖2、表6。

4 討論

T2DM屬中醫(yī)“消渴”范疇，首見(jiàn)于《素問(wèn)·奇病論》。《重廣補(bǔ)注黃帝內(nèi)經(jīng)素問(wèn)》言：“中滿(mǎn)則宿食積滯，脾氣上溢……終致消渴之疾”。這提示恣食肥甘厚味，致使胃熱熾盛，乃消渴主要病機(jī)?！夺t(yī)門(mén)法律》認(rèn)為：消渴病始于胃熱，形成中消之癥?？梢?jiàn)，T2DM早期多以實(shí)熱證為主，尤以胃熱熾盛為要。再者，過(guò)食肥甘，胃失和降，脾失健運(yùn)，致痰濕內(nèi)生；脾失運(yùn)化，水谷精微不得輸布，影響宗氣生成，而血行瘀滯，凝而留止[9]。如此，熱、痰、濕、濁、瘀等病理因素相互交織，共同促進(jìn)了消渴初期的發(fā)生與進(jìn)展。針對(duì)此病機(jī)，清血消脂降糖方精妙配伍，以黃連為君，其味苦、性寒，專(zhuān)于清熱燥濕、瀉火解毒，尤善清除胃熱、治療濕熱壅滯之癥；虎杖助其利濕化痰、散瘀解毒；大黃則通腑降濁、活血祛瘀。三藥合用，既增強(qiáng)清熱解毒之力，又通腹泄?jié)?，使毒邪從下而出，同時(shí)避免黃連燥濕過(guò)甚之弊。姜黃性溫、活血行氣，既助虎杖、大黃活血之力，又消君藥之苦寒；茵陳、澤瀉、萆薢共為臣藥，強(qiáng)化利濕化痰之效；佐以白術(shù)、石菖蒲健脾醒脾、和胃化痰；更用紅花為使藥，加強(qiáng)活血之力，引諸藥之力祛除血脈之瘀滯。在臨床應(yīng)用中，該方不僅能有效緩解T2DM患者早期口渴多飲、消谷善饑等胃火熾盛癥狀，還能通過(guò)健脾化濕、祛痰活血的作用，改善患者乏力、肢體困重、舌厚苔膩等癥狀，促進(jìn)體內(nèi)熱毒、脂濁、痰濕、瘀血等病理產(chǎn)物排出，切中T2DM早期關(guān)鍵病機(jī)環(huán)節(jié)。

肝臟是調(diào)節(jié)血糖平衡的重要器官，可通過(guò)糖原合成與分解、糖異生等途徑維持血糖的穩(wěn)定。健康狀態(tài)下，肝臟對(duì)胰島素的敏感性較高，能迅速響應(yīng)胰島素信號(hào)，降低血糖濃度；而在T2DM患者中，肝臟IR 現(xiàn)象顯著，導(dǎo)致其對(duì)胰島素敏感性降低，無(wú)法有效調(diào)控血糖[10]。本研究結(jié)果顯示，清血消脂降糖方可降低T2DM大鼠FBG，改善葡萄糖耐量異常，降低血清胰島素水平，增加胰島素敏感性，降低血清中LDL-C、TC、TG水平，提高血清中HDL-C水平，改善肝功能及肝組織病理變化，糾正糖脂代謝紊亂。

慢性低度炎癥在T2DM的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。長(zhǎng)期的高血糖和代謝紊亂會(huì)引發(fā)持續(xù)性炎癥反應(yīng)，損害胰島β細(xì)胞功能，并導(dǎo)致胰島素反應(yīng)減弱，進(jìn)而引發(fā)IR。此外，相關(guān)研究提出了“腸道-下丘腦-肝臟/脂肪/胰腺軸”的新概念，認(rèn)為在代謝紊亂和炎癥條件下，這些器官之間的相互作用形成的局部炎癥微環(huán)境會(huì)加劇全身的炎癥，推動(dòng)T2DM的發(fā)展[11]。因此，降低機(jī)體炎癥反應(yīng)對(duì)防治T2DM具有重要意義。IL-6 在高水平時(shí)可損壞胰島β細(xì)胞功能；TNF-α可通過(guò)不同機(jī)制干擾胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致IR；CRP 水平升高會(huì)加重IR[12]。本研究結(jié)果顯示，清血消脂降糖方可降低T2DM大鼠血清中IL-6、TNF-α、CRP 水平，表明清血消脂降糖方可以緩解T2DM大鼠炎癥狀態(tài)。

氧化應(yīng)激與T2DM的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是誘發(fā)IR的重要因素之一。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，可作為衡量氧化損傷程度的重要指標(biāo)；而SOD為抗氧化酶，能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷[13]。在T2DM大鼠模型中發(fā)現(xiàn)，升高血清SOD活性、降低MDA水平，可保護(hù)胰島β細(xì)胞功能免受氧化應(yīng)激的損害，緩解IR[14]。本研究結(jié)果顯示，清血消脂降糖方可降低T2DM大鼠血清中MDA水平并升高SOD活性，這對(duì)于緩解T2DM大鼠IR 具有重要意義。

ERS是細(xì)胞應(yīng)對(duì)各種壓力的保護(hù)性反應(yīng)。PERK作為ERS 的關(guān)鍵傳感器，在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。然而，PERK的長(zhǎng)期或過(guò)度激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂，并與多種代謝性疾病相關(guān)，包括T2DM[15]。FOXO1作為關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一，在T2DM的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。具體而言，F(xiàn)OXO1 可通過(guò)抑制胰島素信號(hào)傳導(dǎo)及葡萄糖攝取、促進(jìn)糖異生及脂質(zhì)合成等機(jī)制，導(dǎo)致糖脂代謝紊亂，引發(fā)IR，增加T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[16]。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，PERK被激活，進(jìn)而使FOXO1 磷酸化，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。激活的FOXO1 一方面可以誘導(dǎo)抗氧化酶的表達(dá)，發(fā)揮保護(hù)作用；另一方面，過(guò)度激活FOXO1 會(huì)加劇氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損害胰島β細(xì)胞功能，促進(jìn)IR 的發(fā)生發(fā)展[17]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)清血消脂降糖方干預(yù)后，T2DM大鼠肝臟組織中PERK、FOXO1 蛋白磷酸化水平降低，表明清血消脂降糖方可能通過(guò)抑制PERK/FOXO1 信號(hào)通路調(diào)控T2DM大鼠炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激水平，改善IR。

綜上，清血消脂降糖方可調(diào)節(jié)T2DM大鼠糖脂代謝、氧化應(yīng)激和炎癥水平，同時(shí)提高胰島素敏感性，緩解肝臟損傷，從而改善IR，其作用機(jī)制可能與抑制PERK/FOXO1 信號(hào)通路有關(guān)。本研究為清血消脂降糖方防治T2DM提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，后續(xù)本課題組將深入研究其涉及的分子機(jī)制。