中圖分類(lèi)號(hào) R965；R574.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）02-0166-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.02.06

摘要 目的 探討車(chē)葉草苷（Asp）對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（UC）大鼠腸上皮細(xì)胞焦亡的影響及機(jī)制。方法 將雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（Control 組），模型組（UC組），ASP 低、高劑量組[Asp-L、Asp-H組，Asp 35、70 mg/（kg·d）]，ASP 高劑量+AMPK抑制劑CompoundC組[Asp-H+Compound C組，Asp 70 mg/（kg·d）+Compound C 0.2 mg/（kg·d）]，每組12 只。除Control 組外，其余各組均以腸腔灌入50% 乙醇（0.25 mL）+5% 2，4，6-三硝基苯磺酸溶液（2 mL/kg）的方式構(gòu)建UC模型。造模后，各藥物組大鼠灌胃或（和）尾靜脈注射相應(yīng)藥液，每天1 次，連續(xù)14 d。末次給藥后，稱(chēng)定各組大鼠體重，測(cè)量其結(jié)腸長(zhǎng)度，并進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分、結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（CMDI）評(píng)分，檢測(cè)其血清中炎癥因子[白細(xì)胞介素18（IL-18）、IL-1β、IL-6]水平，觀察結(jié)腸組織病理改變，檢測(cè)結(jié)腸組織中焦亡相關(guān)蛋白[胱天蛋白酶1（caspase-1）、消皮素D（GSDMD）]及通路相關(guān)蛋白[腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（AMPK）、硫氧還蛋白互作蛋白（TXNIP）、NOD樣受體蛋白3（NLRP3）、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）]的表達(dá)情況。結(jié)果 與Control 組比較，UC組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)受損，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫明顯；體重、結(jié)腸長(zhǎng)度及AMPK蛋白的磷酸化水平均顯著降低或縮短（P＜0.05）；DAI、CMDI評(píng)分，血清中炎癥因子水平以及結(jié)腸組織中caspase-1、GSDMD、TXNIP、NLRP3、ASC蛋白的表達(dá)均顯著升高或上調(diào)（P＜0.05）。與UC組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠結(jié)腸組織病理?yè)p傷均有所減輕，各定量指標(biāo)均顯著改善（P＜0.05），且Asp-H組的改善效果更明顯（P＜0.05）；Compound C可顯著逆轉(zhuǎn)高劑量Asp對(duì)UC大鼠上述指標(biāo)的改善作用（P＜0.05）。結(jié)論 Asp可改善UC大鼠結(jié)腸組織炎癥性損傷，抑制其腸上皮細(xì)胞焦亡，上述作用可能與激活A(yù)MPK進(jìn)而抑制TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞 車(chē)葉草苷；潰瘍性結(jié)腸炎；腸上皮細(xì)胞；焦亡；AMPK/TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種自身免疫性炎癥性腸病，主要病理表現(xiàn)為結(jié)直腸黏膜及黏膜下層的彌散性炎癥，以及腸上皮細(xì)胞的過(guò)度焦亡和異常凋亡、壞死等，臨床表現(xiàn)包括腹痛、腹瀉、膿血便等癥狀[1]。其中，細(xì)胞焦亡是一種炎癥性細(xì)胞死亡方式，可促進(jìn)大量炎癥細(xì)胞因子的釋放，誘發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而介導(dǎo)UC的發(fā)生發(fā)展[1]。由于環(huán)境、生活方式、飲食習(xí)慣的改變，UC的患病率持續(xù)上升[2]。目前，UC的臨床治療以免疫抑制劑、類(lèi)固醇類(lèi)、氨基水楊酸類(lèi)、生物制劑等藥物治療為主，雖能一定程度緩解患者的癥狀，但存在服藥時(shí)間長(zhǎng)、副作用發(fā)生率高、病情易反復(fù)、感染及癌變風(fēng)險(xiǎn)高等缺點(diǎn)，療效有限[3]。UC發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，了解其發(fā)病機(jī)制、尋找特異性治療藥物是相關(guān)研究的重要方向。

車(chē)葉草苷（asperuloside，Asp）是一種環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，廣泛分布于茜草科、杜仲科等藥用植物中，具有抗菌、消炎、抗氧化、抗癌等多種藥理活性[4]。研究指出，Asp 可減輕小鼠炎癥和氧化應(yīng)激，降低疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）評(píng)分，減輕結(jié)腸組織病理?yè)p傷，進(jìn)而改善葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎[5]。腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/硫氧還蛋白互作蛋白（thioredoxin-interactingprotein，TXNIP）/NOD 樣受體蛋白3（NOD-like receptorprotein 3，NLRP3）信號(hào)通路是經(jīng)典的細(xì)胞焦亡相關(guān)通路。研究顯示，激活A(yù)MPK、抑制TXNIP 介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體激活，可抑制炎癥反應(yīng)，改善DSS誘導(dǎo)的UC小鼠的相關(guān)癥狀和病理?yè)p傷[6]?？紤]到AMPK/TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路是Asp 的潛在作用靶點(diǎn)[7]，本研究擬基于該通路，初步探索Asp 對(duì)UC大鼠腸上皮細(xì)胞焦亡的影響及潛在機(jī)制，以期為UC的臨床治療提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器本研究所用主要儀器包括Multiskan MK3 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）、BH-2 型顯微鏡（日本Olympus 公司）、4200SF型凝膠成像分析系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

Asp 對(duì)照品（批號(hào)Y10131-YLS，純度≥95%）購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；AMPK抑制劑Compound C的對(duì)照品（批號(hào)C649291，純度98%）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS，批號(hào)YBP7020）購(gòu)自上海鈺博生物科技有限公司；白細(xì)胞介素18（interleukin-18，IL-18）、IL-1β、IL-6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（批號(hào)分別為E-EL-R0567、E-ELR0012、E-EL-R0015）均購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色液（批號(hào)DH0006）購(gòu)自北京雷根生物技術(shù)有限公司；兔源胱天蛋白酶1（caspase-1）多克隆抗體（批號(hào)abs148492）購(gòu)自愛(ài)必信（上海）生物科技有限公司；兔源消皮素D（gasdermin D，GSDMD）多克隆抗體（批號(hào)FNab03670）購(gòu)自武漢菲恩生物科技有限公司；兔源磷酸化AMPK（phosphorylatedAMPK，p-AMPK）、AMPK 單克隆抗體（批號(hào)分別為ab133448、ab207442）均購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司；兔源TXNIP、NLRP3 多克隆抗體（批號(hào)分別為JK262438、JK220143）均購(gòu)自上海晶抗生物工程有限公司；兔源凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated speck-like proteincontaining a CARD，ASC）多克隆抗體（批號(hào)kl-6741R）購(gòu)自上?？道噬锟萍加邢薰荆煌迷处?肌動(dòng)蛋白（β-actin）多克隆抗體（批號(hào)4967）購(gòu)自美國(guó)CST公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號(hào)S0001）購(gòu)自上海研卉生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)健康成年雄性SD 大鼠，7 周齡，購(gòu)自武漢云克隆動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（鄂）2023-0021。所有大鼠均飼養(yǎng)于溫度22～26 ℃、相對(duì)濕度55%～60%、每12 h 光暗交替的環(huán)境下，自由攝食、飲水。本研究方案已通過(guò)武漢云克隆動(dòng)物有限公司動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批準(zhǔn)編號(hào)2023-12-236）。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（Control 組）、模型組（UC組）、Asp 低劑量組（Asp-L 組）、Asp 高劑量組（Asp-H組）、Asp 高劑量+AMPK抑制劑Compound C組（Asp-H+Compound C組），每組12 只。除Control 組外，其余各組大鼠按下法建立UC模型：大鼠禁食、不禁水24 h，經(jīng)麻醉后固定，將直徑1.5 mm的聚丙烯管插入肛門(mén)內(nèi)約8cm 處，經(jīng)該管向腸腔內(nèi)灌入50% 乙醇（0.25 mL）和5%TNBS溶液（2 mL/kg），隨后提尾倒掛約30 s。若大鼠3 d 后進(jìn)食減少、懶動(dòng)并出現(xiàn)黏液血便等癥狀，則表示造模成功[8]。Control 組大鼠以生理鹽水代替50% 乙醇和5%TNBS 溶液，其余操作同上。造模成功后，Asp-L、Asp-H組大鼠分別灌胃Asp 35、70 mg/（kg·d）（以生理鹽水為溶劑，下同）[7]，并同時(shí)尾靜脈注射生理鹽水；Asp-H+Compound C 組大鼠灌胃Asp 70 mg/（kg·d），并同時(shí)尾靜脈注射Compound C 0.2 mg/（kg·d）（以生理鹽水為溶劑）[9]；Control 組和UC組大鼠灌胃并同時(shí)尾靜脈注射等體積生理鹽水；每天1次，連續(xù)14 d。

2.2 大鼠體重測(cè)量及DAI評(píng)分

末次給藥結(jié)束后，稱(chēng)定各組大鼠體重，并從體重、大便性狀及便血情況3 個(gè)方面進(jìn)行DAI 評(píng)分，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：三者均正常，記0 分；體重較造模前下降1%～5%，大便呈半糊狀，且趨于隱血陽(yáng)性，記1 分；體重較造模前下降6%～10%，大便呈糊狀，且呈隱血陽(yáng)性，記2 分；體重較造模前下降11%～15%，大便介于糊狀與稀便之間，便血介于隱血陽(yáng)性與肉眼可見(jiàn)之間，記3 分；體重較造模前下降＞15%，便稀，且便血肉眼可見(jiàn)，記4 分[10]。

2.3 大鼠血清中炎癥因子水平檢測(cè)

DAI 評(píng)分結(jié)束后，取各組大鼠腹主動(dòng)脈血，靜置后離心，取上層血清，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，采用ELISA 法以酶標(biāo)儀檢測(cè)其中IL-18、IL-1β、IL-6水平。

2.4 大鼠結(jié)腸黏膜損傷評(píng)估

取血后，將各組大鼠處死，取其距肛門(mén)8 cm處的結(jié)腸，觀察其形態(tài)并進(jìn)行結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colonic mucosaldamage index，CMDI）評(píng)分。具體標(biāo)準(zhǔn)如下：結(jié)腸黏膜正常，記0 分；結(jié)腸黏膜水腫、充血但無(wú)潰瘍，記1 分；結(jié)腸黏膜出現(xiàn)糜爛，記2 分；結(jié)腸黏膜出現(xiàn)單個(gè)直徑＜1cm 的潰瘍，記3 分；結(jié)腸黏膜出現(xiàn)2 個(gè)及以上直徑＜1cm 的潰瘍，記4 分；結(jié)腸黏膜出現(xiàn)直徑＞1 cm 的潰瘍，記5 分[11]。

2.5 大鼠結(jié)腸長(zhǎng)度測(cè)量及結(jié)腸組織病理觀察

取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠結(jié)腸，從每組中任選6 只大鼠測(cè)量其結(jié)腸長(zhǎng)度；隨后，取結(jié)腸組織適量，經(jīng)固定、脫水、浸蠟、包埋后切片，進(jìn)行HE染色，使用顯微鏡觀察結(jié)腸組織的病理改變情況。

2.6 大鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組化法檢測(cè)。取“2.5”項(xiàng)下各組大鼠的結(jié)腸組織石蠟切片，常規(guī)處理后進(jìn)行抗原修復(fù)、血清封閉；加入caspase-1、GSDMD一抗（稀釋比例均為1∶200），于4 ℃下孵育過(guò)夜；加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶200），于37 ℃下孵育2 h；洗膜后，加入3，3′-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽（DAB）顯色；用水沖洗后，以蘇木精復(fù)染；脫水后，以中性樹(shù)脂封片，置于顯微鏡下觀察。以棕褐色為陽(yáng)性染色，采用Image 軟件分析陽(yáng)性區(qū)域的光密度值，用以表示caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)水平。

2.7 大鼠結(jié)腸組織中AMPK/TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用Western blot 法檢測(cè)。取各組剩余6 只大鼠的結(jié)腸組織，研碎后與蛋白裂解液充分反應(yīng)，離心后取上清液，以BCA法定量后，于沸水浴中加熱變性。取變性蛋白適量，經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)膜、封閉；洗膜后，加入p-AMPK、AMPK、TXNIP、NLRP3、ASC、β-actin 一抗（稀釋比例分別為1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶1 000），于4 ℃下孵育過(guò)夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶10 000），避光孵育2 h；洗膜后，以ECL發(fā)光試劑顯色，于凝膠成像分析系統(tǒng)下成像。使用Image 軟件分析各蛋白條帶的灰度值，以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算各目的蛋白的表達(dá)水平，并以p-AMPK與AMPK蛋白的表達(dá)水平比值表示AMPK蛋白的磷酸化水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 Asp對(duì)UC大鼠體重及DAI評(píng)分的影響

與Control 組比較，UC組大鼠的體重顯著降低，DAI評(píng)分顯著升高（P＜0.05）；與UC 組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠的體重均顯著升高，DAI 評(píng)分均顯著降低（P＜0.05），且Asp-H組上述指標(biāo)的改善更明顯（P＜0.05）；與Asp-H 組比較，Asp-H+Compound C 組大鼠的體重顯著降低，DAI評(píng)分顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 Asp對(duì)UC大鼠血清中炎癥因子水平的影響

與Control 組比較，UC 組大鼠血清中IL-18、IL-1β、IL-6 水平均顯著升高（P＜0.05）；與UC 組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠血清中IL-18、IL-1β、IL-6 水平均顯著降低（P＜0.05），且Asp-H 組上述指標(biāo)的改善更明顯（P＜0.05）；與Asp-H 組比較，Asp-H+Compound C 組大鼠血清中IL-18、IL-1β、IL-6 水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 Asp對(duì)UC大鼠CMDI評(píng)分及結(jié)腸長(zhǎng)度的影響

與Control 組比較，UC組大鼠的CMDI 評(píng)分顯著升高，結(jié)腸長(zhǎng)度顯著縮短（P＜0.05）；與UC組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠的CMDI評(píng)分均顯著降低，結(jié)腸長(zhǎng)度均顯著延長(zhǎng)（P＜0.05），且Asp-H 組上述指標(biāo)的改善更明顯（P＜0.05）；與Asp-H 組比較，Asp-H+Compound C 組大鼠的CMDI 評(píng)分顯著升高，結(jié)腸長(zhǎng)度顯著縮短（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

3.4 Asp對(duì)UC大鼠結(jié)腸組織病理改變的影響

Control 組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)完整，黏膜光滑，無(wú)水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象；與Control 組比較，UC組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)受損，黏膜層大面積變性壞死，黏膜上皮細(xì)胞排列紊亂，炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)，水腫明顯；與UC組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)均相對(duì)完整，黏膜上皮損傷均有所改善，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫均明顯減輕；與Asp-H組比較，Asp-H+Compound C組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重，黏膜上皮損傷、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫均明顯加重。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.5 Asp對(duì)UC大鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與Control 組比較，UC 組大鼠結(jié)腸組織中caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)（P＜0.05）；與UC組比較，Asp-L、Asp-H 組大鼠結(jié)腸組織中caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.05），且Asp-H組上述指標(biāo)的改善更明顯（P＜0.05）；與Asp-H 組比較，Asp-H+Compound C 組大鼠結(jié)腸組織中caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖2、表4。

3.6 Asp對(duì)UC大鼠結(jié)腸組織中AMPK/TXNIP/NLRP3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與Control 組比較，UC組大鼠結(jié)腸組織中AMPK蛋白的磷酸化水平顯著降低，TXNIP、NLRP3、ASC蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）；與UC組比較，Asp-L、Asp-H組大鼠結(jié)腸組織中AMPK蛋白的磷酸化水平均顯著升高，TXNIP、NLRP3、ASC蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05），且Asp-H 組上述指標(biāo)的改善更明顯（P＜0.05）；與Asp-H 組比較，Asp-H+Compound C 組大鼠結(jié)腸組織中AMPK 蛋白的磷酸化水平顯著降低，TXNIP、NLRP3、ASC 蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖3、表5。

4 討論

UC屬于慢性炎癥性腸病，其發(fā)病機(jī)制主要為腸道受到刺激，腸黏膜免疫失衡導(dǎo)致腸屏障功能障礙、通透性增加，使得免疫細(xì)胞、炎癥因子等大量釋放，從而加劇炎癥反應(yīng)、加重病理?yè)p傷[12]。由于UC易復(fù)發(fā)且治療周期長(zhǎng)，使得患者腸道長(zhǎng)期受到炎癥刺激，導(dǎo)致相關(guān)癌癥發(fā)病率及病死率升高，故臨床治療難度大[3]。目前。UC的臨床治療以藥物治療為主，雖可使患者病情得到一定緩解，但效果有限，因此尋找新的特效藥非常重要。Asp提取自茜草科、杜仲科等藥用植物，具有明顯的消炎、抗氧化、抗癌等活性[4]。研究顯示，Asp 可通過(guò)抑制結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，減少腫瘤細(xì)胞數(shù)量，改善結(jié)腸炎癥狀，從而預(yù)防結(jié)腸炎相關(guān)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[13]；同時(shí)，Asp 可改善脂質(zhì)沉積和炎癥反應(yīng)，減輕高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝病小鼠的肝損傷和炎癥損傷[14]。本研究結(jié)果顯示，Asp 可顯著降低UC 大鼠的DAI、CMDI 評(píng)分，減少結(jié)腸組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕水腫，說(shuō)明其對(duì)UC大鼠的結(jié)腸黏膜損傷具有一定的改善作用。

炎癥反應(yīng)是UC發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎(chǔ)。炎癥因子IL-18、IL-1β、IL-6 等在UC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中呈高表達(dá)，可促進(jìn)腸道炎癥，加劇DSS致UC小鼠結(jié)腸組織的病理改變[15]。研究顯示，通過(guò)抑制NLRP3/caspase-1 信號(hào)通路可抑制IL-18、IL-1β、IL-6 的分泌，抑制UC 大鼠腸道黏膜細(xì)胞的焦亡，從而改善UC大鼠的腸道黏膜損傷[16]。本研究結(jié)果顯示，Asp可顯著降低UC大鼠血清中IL-18、IL-1β、IL-6 水平，提示其可減輕UC大鼠的炎癥反應(yīng)。

細(xì)胞焦亡是一種由炎癥小體介導(dǎo)的細(xì)胞程序性死亡方式，適度的細(xì)胞焦亡對(duì)于維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)及保護(hù)機(jī)體免受微生物侵襲至關(guān)重要，而過(guò)度焦亡則可造成組織損傷，引發(fā)炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)，在UC的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[1，17]。焦亡發(fā)生時(shí)，caspase-1 被激活，使炎癥因子大量釋放；同時(shí)，激活的caspase-1 可特異性切割GSDMD，并使切割后的GSDMD在細(xì)胞膜上寡聚以形成孔隙，從而破壞細(xì)胞膜的完整性，最終誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡[18]。研究顯示，抑制caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)，降低IL-1β的水平，可以抑制細(xì)胞焦亡，緩解UC大鼠的炎癥反應(yīng)[19]；抑制NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白的表達(dá)，可以減少I(mǎi)L-1β、IL-18 的分泌，從而抑制細(xì)胞焦亡并改善UC 大鼠的腸黏膜炎癥性損傷[20]。本研究結(jié)果顯示，Asp 可顯著減少UC大鼠IL-1β等炎癥因子的分泌，下調(diào)caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)，提示其對(duì)UC大鼠細(xì)胞焦亡具有一定的抑制作用。

AMPK/TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路在炎癥、細(xì)胞焦亡等進(jìn)程中具有重要作用。真核細(xì)胞的能量感受器AMPK可參與調(diào)控包括焦亡、自噬、凋亡、蛋白合成等多種細(xì)胞過(guò)程，當(dāng)機(jī)體受到刺激時(shí)，AMPK表達(dá)受到抑制，活性氧大量釋放，促進(jìn)氧化應(yīng)激相關(guān)因子TXNIP蛋白的表達(dá)，激活NLRP3 炎癥小體，NLRP3 與接頭蛋白ASC、caspase-1 前體結(jié)合，活化caspase-1，促進(jìn)炎癥因子IL-1β、IL-18 等的成熟及釋放，加劇炎癥反應(yīng)，最終誘發(fā)細(xì)胞焦亡[21]。研究顯示，抑制結(jié)腸組織中NLRP3 炎癥小體的活化可有效減輕炎癥反應(yīng)及細(xì)胞焦亡，改善UC大鼠結(jié)腸組織的病理?yè)p傷[22]。本研究結(jié)果顯示，Asp 可上調(diào)UC 大鼠結(jié)腸組織中AMPK 蛋白的磷酸化水平，下調(diào)TXNIP、NLRP3、ASC 蛋白的表達(dá)，抑制腸上皮細(xì)胞焦亡，推測(cè)該成分可能通過(guò)激活A(yù)MPK進(jìn)而抑制TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路來(lái)阻止UC 大鼠的腸上皮細(xì)胞焦亡。為驗(yàn)證上述假設(shè)，本研究以高劑量Asp 和AMPK抑制劑Compound C聯(lián)合干預(yù)UC大鼠，結(jié)果顯示，Compound C可顯著逆轉(zhuǎn)Asp 對(duì)UC 大鼠腸上皮細(xì)胞焦亡的改善作用，說(shuō)明Asp 可通過(guò)調(diào)控AMPK/TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路來(lái)抑制UC大鼠的腸上皮細(xì)胞焦亡。

綜上所述，Asp 可改善UC 大鼠結(jié)腸組織炎癥性損傷，抑制其腸上皮細(xì)胞焦亡，上述作用可能與激活A(yù)MPK進(jìn)而抑制TXNIP/NLRP3 信號(hào)通路有關(guān)。

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（收稿日期：2024-05-29 修回日期：2024-10-11）

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