【摘要】 目的 探究酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）與甲苯胺紅不加熱血清試驗（tolulized red unheated serum test，TRUST）診斷梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）感染的臨床價值。方法 選取2021年1月—2023年12月男性性病就診者哨點監(jiān)測及吸毒綜合哨點監(jiān)測1 800名檢查者進行研究，均接受ELISA、TRUST技術檢查，并接受乳膠法檢查，將乳膠法檢查結果作為依據，分析ELISA、TRUST技術診斷TP感染的臨床價值（包括靈敏度、特異度、準確度等），并計算ELISA、TRUST技術診斷TP感染與乳膠法診斷的一致性。結果 納入的1 800名檢查者中，經乳膠法檢查，77名確診為TP感染，占比4.28%（77/1 800）。將乳膠法檢查結果作為依據，ELISA、TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果符合率分別為96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技術診斷TP感染符合率高于TRUST檢查，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技術診斷TP感染與乳膠法檢查具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA技術診斷TP感染的特異度、準確度、陽性預測值高于TRUST技術，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；2種技術檢查診斷TP感染的靈敏度、陰性預測值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論 與TRUST技術比較，ELISA技術診斷TP感染與乳膠法檢查符合率更高，可提高診斷特異度、準確度。

【關鍵詞】 梅毒螺旋體感染；酶聯(lián)免疫吸附試驗；甲苯胺紅不加熱血清試驗

文章編號：1672-1721（2025）03-0013-04" " "文獻標志碼：A" " "中國圖書分類號：R446.6；R759.1

TP感染會引起梅毒，起初表現(xiàn)為硬下疳、淋巴結腫大，隨著疾病不斷發(fā)展，患者可能會出現(xiàn)肌肉酸痛、關節(jié)腫脹、發(fā)燒等癥狀，嚴重者會損害心臟、中樞神經系統(tǒng)、腎臟等多個器官，危及患者生命安全[1]。因此，臨床應采取有效技術及早診斷TP感染，為臨床早期治療方案的擬定提供參考。

血清學檢查具有無創(chuàng)、簡單方便、費用低等優(yōu)點，是診斷TP感染的重要手段。乳膠法檢查是診斷TP感染的常見技術，但該技術中乳膠顆粒的穩(wěn)定性較差，會影響結果的準確性，應用存在一定局限性[2]。TRUST技術也是常見檢查方法，具有一定診斷價值，適用于大樣本篩查，但靈敏度、特異度低，假陽性、假陰性率較高，應用也有局限[3]。ELISA技術具有操作簡單、檢查快速等優(yōu)點，檢查靈敏度較高，適用于小樣本篩查，近年來逐漸受到臨床關注[4]?；诖?，本研究旨在分析ELISA、TRUST技術檢查診斷TP感染的臨床價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2023年12月男性性病就診者哨點監(jiān)測及吸毒綜合哨點監(jiān)測1 800名檢查者進行研究，男性1 682名，女性118名；年齡16～84歲，平均（27.32±6.76）歲；體質量指數18.3～26.7 kg/m2，平均（21.52±1.19）kg/m2；婚姻狀況，已婚1 331名，未婚352名，離異113名，喪偶或其他4名。

納入標準：均為男性性病就診者哨點監(jiān)測及吸毒綜合哨點監(jiān)測者；均接受ELISA、TRUST、乳膠法技術檢查；精神無異常，認知正常，意識清楚；具有較高診斷依從性，主動參與調查；檢查者或家屬簽署同意書。

排除標準：合并其他病毒感染性疾病者；妊娠或哺乳期女性；伴肝衰竭、心力衰竭者；合并肺癌、胃癌等癌癥疾病者；伴血液、免疫系統(tǒng)疾病者；正參與其他臨床試驗者。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑

采用美國伯騰公司提供的ELX800型酶標儀、ELX5013BioTEK洗板機和江蘇新康醫(yī)療器械有限公司提供的梅毒旋轉振蕩器，儀器均校準，性能良好。ELISA、TRUST檢查試劑盒均購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，乳膠法試劑盒購自艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司，各個技術檢測步驟均嚴格按照試劑盒的說明書進行。

1.2.2 標本采集

叮囑檢查者標本采集前需保持空腹狀態(tài)，并采集其空腹靜脈血約6 mL，進行離心處理10～15 min，速率為3 000 r/min，離心半徑為15 cm，然后取上層血清，及時送檢，對于無法及時送檢標本，應置于4 ℃冰箱中保存，備用。

1.2.3 ELISA檢查及判斷方法

使用前先將樣品室溫平衡30 min以上，然后混勻，之后設置陰性對照、陽性對照和空白對照，同時對標本進行編號，依次進行離心、加樣、溫育、洗板、加酶、溫育、洗板、顯色、測定等操作，全部檢測操作需嚴格根據檢測試劑盒操作說明規(guī)范進行。結果判讀標準：陰性對照孔A值≤0.10，陽性對照孔A值≥0.80，否則實驗無效；若有1孔陰性對照A值大于0.1應舍棄，若2孔或2孔以上陰性對照A值＞0.1，應重復實驗；樣品A值＜臨界值（CUTOFF）者為陰性，樣品A值≥臨界值（CUTOFF）者為陽性（初試陽性應重新取樣雙孔復試）。

1.2.4 TRUST檢查及判斷方法

使用前先將樣品室溫平衡30 min以上，實驗前需混勻，之后設置陰性、陽性對照，同時對標本進行編號、離心、加樣、加抗原、反應等操作，全部檢測操作需嚴格根據檢測試劑盒操作說明規(guī)范進行。結果判讀標準：陽性反應（R）可見中等或較大塊的粉紅色凝塊；弱陽性反應（W）可見較小的明細的粉紅色凝塊；陰性反應（N）可見粉紅色均勻的沉淀物無凝集物；定量實驗以呈現(xiàn)明顯凝集反應的最高稀釋度作為該血清的凝集效價。

1.2.5 乳膠法檢查及判斷方法

檢查前，先將所用試劑、樣本恢復至室溫。取出試劑，置于干凈平坦的臺面上，用一次性塑料吸管吸取樣本后，垂直滴加1滴（約25 μL）于加樣孔S中，然后加入2滴緩沖液，開始計時。等待紅色條帶出現(xiàn)，檢測結果在10～20 min內判讀。如果2條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于檢測區(qū)（T）內，另一條位于質控區(qū)（C），提示陽性；如果僅C區(qū)出現(xiàn)一條紅色條帶，T區(qū)無紅色條帶，即為陰性。

1.3 評價指標

以乳膠法檢查結果作為依據，分析ELISA、TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果符合率和一致性。計算ELISA、TRUST技術診斷TP感染的效能，將真陽性、真陰性、假陽性、假陰性分別記為A、B、C、D，靈敏度=A總數/（A總數+D總數）×100%，特異度=B總數/（B總數+C總數）×100%，準確度=（A總數+B總數）/總例數×100%，陽性預測值=A總數/（A總數+C總數）×100%，陰性預測值=B總數/（B總數+D總數）×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學軟件處理數據，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗；一致性采用Kappa檢驗（Kappa值＞0.75為一致性極好，Kappa值在0.40～0.75為一致性一般，Kappa值＜0.40為一致性較差），檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 乳膠法檢查結果

本次研究納入的1 800名檢查者中，經乳膠法檢查，77名確診為TP感染，占到4.28%（77/1 800）。

2.2 ELISA、TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果符合情況將乳膠法檢查結果作為依據，ELISA、TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果符合率分別為96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技術診斷TP感染符合率高于TRUST檢查，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA、TRUST技術診斷TP感染結果見表1、表2。

2.3 ELISA、TRUST技術診斷TP感染的價值分析

ELISA技術診斷TP感染的特異度、準確度、陽性預測值高于TRUST技術，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；2種技術檢查診斷TP感染的靈敏度、陰性預測值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

3 討論

TP感染的危害較大，傳染性強，多通過性生活、血液或母嬰傳播，少數人通過親吻、握手等方式被傳染[5]。TP感染后患者的癥狀較為復雜，早期一般以硬下疳為主，隨著病情的加重，患者體內病原體不斷擴散，侵害多個臟器器官，危及患者生命安全[6]。TP感染早期癥狀多為皮膚表現(xiàn)，容易被忽視[7]。因此，臨床應倡導及早篩查、診斷TP感染。

研究發(fā)現(xiàn)，個體感染TP后，體內會出現(xiàn)較多抗體，主要包括抗TP特異性抗體、非特異性反應素[8-9]。TRUST技術能夠有效檢測非特異性反應素，但該抗體在體內出現(xiàn)晚，多在癥狀出現(xiàn)后4周才可檢出，早期TP感染檢出率低，且檢查神經梅毒靈敏度低，進而增加漏診風險[10]。此外，TRUST技術中抗原主要為心磷脂類物質，結果容易受到主觀因素影響，進而降低診斷價值，但該技術費用低，適用于基層醫(yī)院[11]。ELISA技術具有操作簡單、檢測范圍廣等優(yōu)點，在TP17、TP47酶標板孔基礎上檢測，使用雙抗原夾心法測定TP特異性抗原、抗體，并從酶標儀上讀出結果，具有客觀性，避免主觀因素對結果的影響，可提高TP感染檢查準確率[12]。據報道，ELISA技術檢查TP感染可提高診斷準確度，具有一定應用價值[13]。

本研究結果顯示，將乳膠法檢查結果作為依據，ELISA技術診斷TP感染的總符合率、特異度、準確度、陽性預測值高于TRUST技術，且2種技術診斷TP感染與乳膠法檢查結果均具有理想的一致性。結果提示，與TRUST技術比，ELISA技術診斷TP感染可提高符合率、診斷特異度和準確度。分析原因，TRUST技術價格低廉，更容易被檢查者接受，但機體一般在感染TP后4～8周出現(xiàn)非特異性抗體，經治療后抗體會轉為陰性，這會在一定程度上降低TRUST技術檢查靈敏度，不適用于潛伏期、1期和3期患者檢查。TRUST技術在麻風、類風濕關節(jié)炎等免疫系統(tǒng)疾病中也會出現(xiàn)假陽性情況，導致誤診率較高[14-15]。ELISA技術中應用的酶屬于有機催化劑，滴入少量酶可達到較好的顯色效果，便于醫(yī)師觀察，可追蹤抗體和抗原位置，進而定量分析，適用于各期TP感染測定，利于提高準確度[16]。但ELISA技術也有不足，比如TP抗體消失較慢，治療后仍可能會檢出，可能會導致TP感染呈終身陽性狀態(tài)，不適合判定TP感染療效。ELISA檢查也有假陽性問題，這可能與抗體、抗原出現(xiàn)交叉反應，進而出現(xiàn)非特異性吸附功能有關。

綜上所述，與TRUST技術比較，ELISA技術診斷TP感染與乳膠法符合率更高，可提高診斷特異度、準確度。

參考文獻

[1] 覃濤，宋芳，覃毅.三種不同梅毒檢驗方法檢測梅毒螺旋體的結果對比[J].基層醫(yī)學論壇，2020，24（8）：1124-1126.

[2] 宋勝偉，曾茜茜.酶聯(lián)免疫吸附試驗法與甲苯胺紅不加熱血清試驗法檢測梅毒螺旋體感染的臨床價值[J].醫(yī)療裝備，2020，33（11）：66-67.

[3] 吳博文，鄒光美.化學發(fā)光法、TPPA及TRUST法在住院老年患者梅毒檢測中的應用效果[J].臨床醫(yī)學研究與實踐，2020，5（20）：111-113.

[4] 姚金坊.酶聯(lián)免疫吸附試驗對梅毒螺旋體感染的診斷價值[J].河南醫(yī)學研究，2021，30（17）：3228-3230.

[5] 職建軍.ELISA聯(lián)合TRUST在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效果及效能ROC曲線研究[J].臨床研究，2021，29（8）：137-138.

[6] 黃玉林，周玉航，李偉清.三種梅毒螺旋體血清學檢驗方法的臨床應用[J].中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生，2021，36（7）：140-142.

[7] 鄭維威，崔迪，梅傳忠，等.TPPA和TRUST試驗在梅毒診斷中的應用[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2020，43（4）：276-277.

[8] 謝新火.TRUST與TP-ELlSA聯(lián)合檢測對梅毒的診斷價值分析[J].基層醫(yī)學論壇，2020，24（26）：3794-3795.

[9] 李春樹.酶聯(lián)免疫吸附試驗法與甲苯胺紅不加熱血清試驗法診斷梅毒螺旋體感染的臨床價值比較[J].中國民康醫(yī)學，2020，32（19）：98-99.

[10] 周貴芬.CLIA、ELISA、TRUST診斷梅毒螺旋體抗體的價值分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2020，38（6）：1096-1099.

[11] 謝芳鈺，鐘貞玲.酶聯(lián)免疫吸附法與TRUST檢測梅毒螺旋體感染的價值分析[J].基層醫(yī)學論壇，2020，24（32）：4664-4665.

[12] 劉學政.酶聯(lián)免疫吸附試驗與膠體金法檢測梅毒螺旋體抗體的結果比較[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2022，19（23）：3283-3285.

[13] 胡麗.ELISA法在診斷梅毒螺旋體感染中的臨床價值分析[J].結直腸肛門外科，2021，27（增刊1）：69-70.

[14] 汪磊，張瑞生.ELISA法與TRUST法在梅毒檢測中的應用價值比較[J].國際免疫學雜志，2019，42（2）：157-161.

[15] 黃亞玲.酶聯(lián)免疫吸附測定法與甲苯胺紅不加熱血清試驗在梅毒檢測中的應用價值比較[J].現(xiàn)代診斷與治療，2023，34（16）：2488-2490.

[16] 何小霞，馮月平.梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗和梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集確證試驗在梅毒血清學檢測中的應用價值分析[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2021，15（9）：74-76.

（編輯：徐亞麗）