〔摘要〕 目的 探討電針內(nèi)關(guān)、膻中穴對(duì)慢性心力衰竭（CHF）大鼠癥狀及代謝組學(xué)特征的作用。方法 SD大鼠經(jīng)7 d適應(yīng)性喂養(yǎng)后，采用腹腔隔日注射多柔比星（DOX）誘導(dǎo)建立CHF模型。采用隨機(jī)數(shù)字表法將造模成功的CHF大鼠隨機(jī)分為模型組（n=11）和電針組（n=14），另設(shè)置空白對(duì)照組（n=11），共3組。電針組大鼠接受內(nèi)關(guān)、膻中穴電針干預(yù)，每日1次，持續(xù)2周;模型組與空白對(duì)照組不做干預(yù)，僅進(jìn)行常規(guī)束縛。干預(yù)結(jié)束后，通過(guò)超聲心動(dòng)圖評(píng)估各組大鼠的心臟泵血功能、HE染色評(píng)估各組大鼠左心室心肌組織的病理變化。采用LC-MS檢測(cè)各組大鼠的心肌組織代謝物，通過(guò)對(duì)不同組之間的代謝物含量的變化進(jìn)行主成分分析、偏最小二乘法判別分析，篩選出差異代謝物，使用Metabo Analyst進(jìn)行代謝通路分析。結(jié)果 與空白對(duì)照組相比，模型組超聲心動(dòng)圖左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室短軸縮短率（LVFS）明顯降低（Plt;0.01）。電針治療后，與模型組相比，電針組的超聲心動(dòng)圖LVEF、LVFS明顯升高（Plt;0.01），說(shuō)明電針可有效改善CHF大鼠心臟泵血功能。與模型組相比，電針干預(yù)后的心肌組織炎癥浸潤(rùn)減少、平滑肌更加平滑，細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨向完整，表明電針可逆轉(zhuǎn)CHF造成的心肌損傷。代謝組學(xué)檢測(cè)中，與空白對(duì)照組相比，模型組心肌組織中有3種代謝物水平發(fā)生變化（Plt;0.05），4條代謝通路發(fā)生改變。電針治療后，與模型組相比，電針組有4種代謝物水平發(fā)生變化（Plt;0.05），其中1種代謝物出現(xiàn)明顯回調(diào);代謝通路分析表明，電針可調(diào)節(jié)嘌呤代謝、葉酸合成代謝和谷胱甘肽代謝3條通路。結(jié)論 電針內(nèi)關(guān)、膻中穴對(duì)CHF大鼠的心臟泵血功能具有顯著的改善作用，其機(jī)制可能與調(diào)控心肌能量代謝、氧化應(yīng)激及核酸合成有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 慢性心力衰竭;電針;內(nèi)關(guān);膻中;代謝組學(xué);超聲心動(dòng)圖

〔中圖分類號(hào)〕R245.9" " " " "〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.01.009

On the improvements of electroacupuncture at \"Neiguan\" （PC6） and

\"Danzhong\" （CV17） acupoints on symptoms and metabolomic characteristics in a rat model of chronic heart failure

LI Zuqiang， DING Panting， LIANG Zhiyi， ZHOU Jingying， LIU Qiong， ZHONG Huan*， LIU Mi*

School of Acupuncture-moxibustion， Tuina and Rehabilitation， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha，

Hunan 410208， China

〔Abstract〕 Objective To explore the effects of electroacupuncture （EA） at \"Neiguan\" （PC6） and \"Danzhong\" （CV17） acupoints on symptoms and metabolomic characteristics in rats with chronic heart failure （CHF）. Methods After seven days of adaptive feeding， a CHF model was established in SD rats by intraperitoneal injections of doxorubicin （DOX） on alternate days. The successfully modeled CHF rats were randomized using a random number table into model group （n=11）， EA group （n=14）， and blank control group （n=11） Rats in the EA group received EA intervention at \"Neiguan\" （PC6） and \"Danzhong\" （CV17） acupoints once a day for two weeks， while the model and blank control groups only underwent routine restraint without intervention. At the end of the intervention， cardiac pumping function was evaluated by echocardiography， and pathological changes in left ventricular myocardial tissue of the rats in each group were assessed using Hamp;E staining. LC-MS was used to check the metabolites in myocardial tissue of rats in each group. Principal component analysis （PCA） and partial least squares-discriminant analysis （PLS-DA） were conducted to screen out differential metabolites. Metabolic pathway analysis was performed using Metabo Analyst. Results Compared with the blank control group， the left ventricular ejection fraction （LVEF） and left ventricular fractional shortening （LVFS） in the model group significantly decreased （Plt;0.01）. After EA treatment， the LVEF and LVFS of echocardiogram in EA group were significantly increased compared with those in the model group （Plt;0.01）， indicating that EA can effectively improve the cardiac pumping function of CHF rats. Compared to the model group， the myocardial tissues showed reduced inflammatory infiltration， smoother muscle fibers， and more intact cell structures after intervention in the EA group， suggesting that EA can reverse myocardial damage caused by CHF. In the metabolomic test， compared with the blank control group， the model group revealed changes in three metabolites （Plt;0.05） and four metabolic pathways in the myocardial tissues. After EA treatment， four metabolites showed changes （Plt;0.05）， with one metabolite significantly reversed. Metabolic pathway analysis indicated that EA can modulate purine metabolism， folate biosynthesis， and glutathione metabolism pathways. Conclusion EA at \"Neiguan\" （PC6） and \"Danzhong\" （CV17） acupoints significantly improves cardiac pumping function in CHF rats. The mechanism may be related to the regulation of myocardial energy metabolism， oxidative stress， and nucleotide synthesis.

〔Keywords〕 chronic heart failure; electroacupuntcture; \"Neiguan\" （PC6）; \"Danzhong\" （CV17）; metabolomics; echocardiography

慢性心力衰竭（chronic heart failure， CHF）是一種全球常見(jiàn)的心血管疾病，以心臟泵血功能不足為主要特征，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí){生命[1]。CHF是導(dǎo)致死亡和再次住院的主要原因之一[2]。盡管藥物治療在提高CHF患者的生存率和生活質(zhì)量方面取得一定的進(jìn)展[3]，但仍然存在治療效果不佳、毒副作用多以及治療成本高等問(wèn)題[4]。因此，尋求安全有效的替代療法對(duì)于提高CHF患者的生活質(zhì)量具有重要的臨床意義。

針灸作為一種傳統(tǒng)的中醫(yī)療法，因其獨(dú)特的治療機(jī)制和較少的不良反應(yīng)，在心血管疾病的輔助治療中顯示出潛在價(jià)值[5-6]，并在臨床實(shí)踐中被廣泛應(yīng)用于心力衰竭的治療[7-8]。內(nèi)關(guān)與膻中穴的配伍組合是治療心系疾病最常用的穴對(duì)之一[9]，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)心系疾病的潛在效應(yīng)[10-12]，但其具體的作用機(jī)制仍不明確。

代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要分支之一，能通過(guò)檢測(cè)生物體的代謝物質(zhì)譜，反映細(xì)胞功能和生物學(xué)狀態(tài)的變化。心力衰竭的代謝特點(diǎn)之一是心肌能量代謝發(fā)生一系列的變化[13]。心肌細(xì)胞的能量代謝功能受損，特別是線粒體氧化磷酸化的效率降低，會(huì)導(dǎo)致心臟主要能量來(lái)源腺苷三磷酸（adenosine triphosphate， ATP）的合成減少[14]。線粒體功能障礙會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的活性氧并引發(fā)過(guò)度的氧化應(yīng)激，這些因素加劇心肌細(xì)胞的損傷，促進(jìn)心肌重塑和纖維化，最終導(dǎo)致心肌功能的進(jìn)一步衰退[15]。然而，目前關(guān)于電針內(nèi)關(guān)、膻中穴干預(yù)CHF后心肌代謝變化的系統(tǒng)研究相當(dāng)有限。因此，本研究利用代謝組學(xué)方法探究CHF模型大鼠心肌代謝物的變化規(guī)律，分析CHF模型大鼠的心肌代謝情況，觀察電針內(nèi)關(guān)、膻中穴的治療效應(yīng)是否通過(guò)影響心肌代謝物質(zhì)譜來(lái)實(shí)現(xiàn)，旨在確定電針治療CHF心肌代謝的變化規(guī)律，并探討其與心臟泵血功能改善的相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1" 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40只雄性SPF級(jí)SD大鼠購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)：SCXK（湘）：2019-0004]，體質(zhì)量150～170 g。所有大鼠均飼養(yǎng)于溫度（22±2） ℃、12 h光照/黑暗循環(huán)、濕度50%～70%的環(huán)境下，并可以自由獲取食物和水。該實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核通過(guò)（SLBH-202007120001）。

1.2" 主要試劑與儀器

注射用鹽酸多柔比星（doxorubicin， DOX）（批號(hào)：C27H29NO11.HCl，深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司）;HE染液（批號(hào)：G1005，武漢賽維爾生物科技有限公司）;C2H3N、CH2O2、NH4HCO3、CH3OH（批號(hào)：A433526-1 L、F301957-50 mL、A431333-500 g、M433281-2.5 L，阿拉丁控股集團(tuán)有限公司）;CHCl3（批號(hào)：67-66-3，上海吉至生化科技有限公司）;NaN3（批號(hào)：02-0031-01，廈門(mén)鷺隆生物科技發(fā)展有限公司）。

華佗牌電針儀（型號(hào)：SDZ-II，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）;電子天平[型號(hào)：PL-203，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];電子秤（型號(hào)：YP10002，上海佑科儀表有限公司）;脫水機(jī)、包埋機(jī)（型號(hào)：JJ-12J、JB-P5，武漢俊杰電子有限公司）;冰凍切片機(jī)（型號(hào)：RM2016，上海徠卡儀器有限公司）;液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（型號(hào)：Qtrap 5500，美國(guó)SCIEX公司）;-20 ℃冰箱（型號(hào)：BCD-630W，德國(guó)西門(mén)子公司）;-80 ℃冰箱（型號(hào)：TSX600，美國(guó)Thermo公司）;組織勻漿儀、低溫離心機(jī)、渦旋混勻儀（型號(hào)：Vortex 2、IKA G-L、4047700-Vortex1，德國(guó)IKA公司）;冷凍干燥機(jī)（型號(hào)：100YG/B，寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3" CHF模型大鼠的制備及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，采用隨機(jī)數(shù)字表法選擇11只大鼠分配到空白對(duì)照組，29只大鼠進(jìn)行CHF造模。采用DOX隔日腹腔注射法復(fù)制CHF大鼠模型[16]。給藥劑量依次為第1、3天1 mg/kg，第5、7天2 mg/kg，第9、11天3 mg/kg，第13、15天4 mg/kg，共8次，累積劑量達(dá)到20 mg/kg?？瞻讓?duì)照組在相同時(shí)間段腹腔注射等量的生理鹽水。腹腔注射結(jié)束后正常喂養(yǎng)3周，對(duì)大鼠進(jìn)行觀察。觀察期間，CHF造模導(dǎo)致4只大鼠死亡，存活25只。觀察期結(jié)束后對(duì)所有存活的大鼠進(jìn)行心功能評(píng)價(jià)，并分別從空白對(duì)照組和CHF造模大鼠中隨機(jī)各選取3只取材，觀測(cè)其心功能變化和心肌組織病理學(xué)變化，判定模型是否成功。（1）心功能變化：左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction， LVEF）、左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening， LVFS）下降。（2）心肌組織病理學(xué)變化：①心肌細(xì)胞呈水腫樣、空泡變性、脂肪變性、壞死;②心肌細(xì)胞間隙增寬、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);③肌源纖維溶解、心肌纖維斷裂等一系列心肌損傷改變。根據(jù)上述心功能和心肌組織病理學(xué)變化，判定25只大鼠CHF造模成功。將剩余22只CHF模型大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行二次分組，模型組8只、電針組14只，剩余空白對(duì)照組大鼠8只。

1.4" 腧穴定位

穴位定位根據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠》[17]及《動(dòng)物解剖學(xué)彩色圖譜》[18]，模擬人體腧穴骨度分寸法量取，針刺穴位為內(nèi)關(guān)（雙側(cè)）、膻中：內(nèi)關(guān)穴位于前肢內(nèi)側(cè)，距離腕關(guān)節(jié)約3 mm的尺橈骨縫間;膻中穴位于胸部前正中線上，橫平第4、5肋間隙。

1.5" 干預(yù)方法

觀察期結(jié)束后，對(duì)所有大鼠進(jìn)行干預(yù)。電針組干預(yù)由接受統(tǒng)一培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行操作：將大鼠固定在特殊定制的鼠板上，用75%乙醇對(duì)大鼠局部皮膚消毒，無(wú)菌針灸針（0.25 mm×13 mm）刺入皮膚1～2 mm，并在內(nèi)關(guān)（雙側(cè)）、膻中穴循經(jīng)脈向上3～5 mm處扎一根輔助針，設(shè)為參考電極，然后連接電針儀。電針參數(shù)[19]：疏密波，頻率2 Hz/100 Hz，強(qiáng)度為1 mA，每次治療30 min，每天1次，連續(xù)治療2周。模型組和空白對(duì)照組僅對(duì)大鼠進(jìn)行常規(guī)束縛，不做其他干預(yù)。CHF大鼠模型制備及干預(yù)的時(shí)間線見(jiàn)圖1A，膻中、內(nèi)關(guān)穴在大鼠身上的位置見(jiàn)圖1B。

1.6" 樣本采集

治療2周后，在測(cè)試大鼠心功能后采集樣本，取材前1天對(duì)大鼠禁食。采用20%烏拉坦注射液腹腔注射麻醉（4 mL/kg），隨后打開(kāi)腹腔，剖開(kāi)胸腔，于左心室、右心耳處剪一小口，用0 ℃預(yù)冷生理鹽水沖洗至無(wú)血性液體流出，剪取左心室中間部分厚約3 mm的心肌組織，置于多聚甲醛中固定1～2 d，以備病理學(xué)檢查。其余心肌組織分2份移入凍存管中，放入-80 ℃冰箱中保存，以備代謝組學(xué)檢測(cè)。

1.7" 心肌組織病理學(xué)檢查

將固定好的心肌組織用乙醇梯度脫水，二甲苯透明及石蠟包埋后切片（厚4～5 μm），經(jīng)HE染色后置于顯微鏡下觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)，HE染色步驟如下。（1）脫蠟：二甲苯10 min，無(wú)水乙醇2 min，90%乙醇2 min，80%乙醇2 min，70%乙醇2 min，自來(lái)水清洗去乙醇，移入蒸餾水中2 min;（2）染色：蘇木素染色8～15 min，自來(lái)水沖洗，分化液分化，流水沖洗，伊紅液染色4 min，自來(lái)水沖洗;（3）脫水：吸去載玻片上多余水分，80%乙醇2 min，90%乙醇4 min，無(wú)水乙醇5 min;（4）透明：二甲苯Ⅰ 4 min，二甲苯Ⅱ 10 min;（5）封片：中性樹(shù)膠封片，放在溫箱中烤干，或平置晾干后裝盒;（6）顯微鏡觀察。

1.8" LC-MS代謝組學(xué)技術(shù)檢測(cè)心肌代謝物

1.8.1" 實(shí)驗(yàn)樣本的收集與處理" （1）樣品濃縮：首先對(duì)CH3OH、CHCl3進(jìn)行預(yù)冷，即放于-20 ℃冰箱中。將心肌樣品從-80 ℃冰箱中拿出放入冰盒，稱重，再取100 mg+50 mg大小的組織，以4 mL/g的比例添加冰CH3OH，在0 ℃下，組織勻漿機(jī)處理1 min至沒(méi)有組織塊;按4、2.85 mL/g的比例加入CHCl3、DH2O，勻漿1 min，渦旋1 min，實(shí)現(xiàn)充分提取;靜置樣品于冰上15 min，將5 mL的離心管改用成2 mL離心管，再離心（轉(zhuǎn)速12 000 r/min，時(shí)長(zhǎng)15 min，溫度4 ℃，離心半徑7 cm）;樣品離心后分3層，上層為H2O和CH3OH溶液，中間層為變性的蛋白和細(xì)胞器等，底層為CHCl3（含微量CH3OH）;取上清液（水相0.5 mL）轉(zhuǎn)移到新的離心管中，經(jīng)氮吹儀濃縮去除甲醇。（2）樣品冷凍干燥：將樣品放在冷凍干燥機(jī)中，-80 ℃處理24 h，再把殘留的溶劑抽干。（3）樣品制備：上層和底層的凍干粉末，加入100 μL 80% CH3OH水溶液復(fù)溶，渦旋均勻，轉(zhuǎn)速為10 000 r/min、4 ℃、半徑7 cm離心10 min，分別取40 μL上清液放入-20 ℃冰箱保存，待LC-MS檢測(cè)。

1.8.2" LC-MS采樣參數(shù)" 正離子模式：BEH C8（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色譜柱，柱溫50 ℃。流動(dòng)相（A1）為0.1% HCOOH，梯度洗脫：0～0.5 min，95%A1;0.5～24 min，0%～95% A1;24～28 min，0% A1;28～28.1 min，0%～95% A1;28.1～30 min，95% A1。流動(dòng)相流速為0.35 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。負(fù)離子模式：HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色譜柱，柱溫50 ℃。流動(dòng)相（A2）為 6.5 mmol/L NH4HCO3，梯度洗脫：0～0.5 min，98% A2;0.5～20 min，0%～98% A2;20～24 min，0% A2;24～24.1 min，0%～98% A2;24.1～26 min，98% A2。流動(dòng)相流速為0.35 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。質(zhì)譜條件：使用Thermo Orbitrap Exploris120質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧電離源為質(zhì)譜離子源。具體參數(shù)為：噴霧電壓為4.5 kV，鞘氣和輔助氣（N2，99.99%）流量分別為1.5、4.5 L/min，離子傳輸桿溫度為320 ℃，碰撞氣（Ar，99.999%）壓力為23.8 Pa。掃描寬度為m/z0.001，掃描時(shí)間為0.2 s。

1.9" 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 25.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以“x±s”表示。完全隨機(jī)兩樣本均值比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn);多組間比較若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性采用單因素方差分析，若不滿足正態(tài)性則采用秩和檢驗(yàn)。以Plt;0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有統(tǒng)計(jì)圖的繪制均用GraphPad Prism 8.0.2完成，所有圖片均通過(guò)Adobe Illustrator 2022組合完成。

采用LC-MS實(shí)驗(yàn)整理數(shù)據(jù)并分析，使用ProteoWizard將原始數(shù)據(jù)格式改為.mzXML后，上傳到XCMS，矯正譜峰、峰對(duì)齊，得到峰面積。使用精確質(zhì)量數(shù)TOP匹配（lt;25 ppm）和二級(jí)譜匹配鑒定代謝物結(jié)構(gòu)，在自建數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索數(shù)據(jù)。通過(guò)Pareto標(biāo)度化對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理后，做多維分析如主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘法判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）等，單向統(tǒng)計(jì)分析、t檢驗(yàn)、變異倍數(shù)分析，用R程序包繪制火山圖，用MetaboAnalyst和KEGG進(jìn)行代謝通路分析。

2 結(jié)果

2.1" 電針內(nèi)關(guān)、膻中穴緩解大鼠的CHF癥狀

超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠的LVEF和LVFS明顯降低（Plt;0.01）（圖2A—B）。HE結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CHF模型大鼠的心室平滑肌組織均出現(xiàn)不同程度水腫、細(xì)胞質(zhì)稀疏、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、心肌萎縮及纖維斷裂等病理改變（圖2C），提示CHF模型復(fù)制成功。

經(jīng)過(guò)電針干預(yù)之后，與模型組對(duì)比，電針組大鼠的LVEF和LVFS明顯升高（Plt;0.01）（圖3A—B）;HE結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電針組心室平滑肌組織更加光滑，細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨向完整，纖維斷裂減少等。

2.2" 電針內(nèi)關(guān)、膻中穴改變CHF模型大鼠的心肌組織代謝

代謝組學(xué)的PCA和PLS-DA揭示，模型組和空白對(duì)照組的心肌代謝物出現(xiàn)分離（Plt;0.05）（圖4A—B）。火山圖結(jié)果表明，相對(duì)于空白對(duì)照組，模型組代謝物尿嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤核苷、黃嘌呤含量均升高（Plt;0.05）（圖4C）。代謝氣泡圖分析發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組對(duì)比，嘌呤代謝、泛酸鹽和輔酶A生物合成、β-丙氨酸代謝及嘧啶代謝4條代謝通路發(fā)生改變（圖4D）。與模型組對(duì)比，電針組心肌代謝物的PCA和PLS-DA也出現(xiàn)分離（Plt;0.05）（圖4E—F）;代謝物谷胱甘肽、ATP、鳥(niǎo)嘌呤核苷、鳥(niǎo)苷三磷酸（guanosine triphosphate，GTP）含量均降低（Plt;0.05）（圖4G），且嘌呤代謝、葉酸生物合成、谷胱甘肽代謝3條代謝通路發(fā)生變化（圖4H）。

3 討論

本研究采用心功能評(píng)價(jià)、HE染色對(duì)各組大鼠的心臟功能以及心肌組織進(jìn)行比較，利用LC-MS代謝組學(xué)方法對(duì)DOX誘導(dǎo)的CHF大鼠及電針內(nèi)關(guān)、膻中穴對(duì)CHF大鼠的影響作用進(jìn)行心肌組織代謝組學(xué)分析。心功能評(píng)價(jià)和HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電針顯著提高CHF大鼠的LVEF、LVFS，并部分逆轉(zhuǎn)心肌組織損傷，這提示電針可能有效改善CHF大鼠的心臟泵血功能。進(jìn)一步的代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組代謝物尿嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤核苷和黃嘌呤含量顯著升高，這些代謝物的變化涉及嘌呤代謝、泛酸與輔酶A生物合成、β-丙酮酸代謝和嘧啶代謝4條關(guān)鍵代謝通路。這些代謝通路的變化可能反映心力衰竭狀態(tài)下的大鼠心肌能量產(chǎn)生和利用之間的平衡遭到破壞。CHF是一種復(fù)雜的多系統(tǒng)疾病，其發(fā)生發(fā)展的核心是心室重塑[20]。其中，氧化應(yīng)激和心肌能量代謝的失衡會(huì)促進(jìn)心室重塑[21-22]。嘌呤代謝的變化可能與ATP的過(guò)度消耗和合成有關(guān)，泛酸與輔酶A的變化則影響了脂肪酸的氧化與能量轉(zhuǎn)化，而嘧啶代謝的改變與DNA的修復(fù)和細(xì)胞再生的需求增加有關(guān)。這些通路及代謝物的變化，提示CHF大鼠的心肌組織出現(xiàn)氧化應(yīng)激以及代謝能量失衡，需要通過(guò)增加心肌代謝，增強(qiáng)代償作用，維持正常的心臟泵血功能。而在電針干預(yù)后，與模型組相比，電針組代謝物谷胱甘肽、ATP、鳥(niǎo)嘌呤核苷以及GTP含量顯著降低，嘌呤代謝、葉酸生物合成和谷胱甘肽代謝3條代謝通路出現(xiàn)變化。嘌呤代謝的改變可能提示ATP與GTP的消耗減少，這有助于減輕心臟的能量需求和提高能量的利用效率，降低心臟負(fù)擔(dān)。谷胱甘肽代謝的變化提示心臟氧化應(yīng)激的改善;葉酸生物合成的調(diào)節(jié)涉及心臟細(xì)胞的修復(fù)和再生能力的增強(qiáng)。這些變化反映電針可能通過(guò)調(diào)節(jié)心肌的能量代謝和抗氧化能力來(lái)改善心力衰竭帶來(lái)的負(fù)擔(dān)，這些代謝調(diào)節(jié)的累積效應(yīng)為心力衰竭患者提供了一種可能的非藥物治療方式，展示了電針在心臟病理狀態(tài)下調(diào)控心臟代謝和改善心臟功能的潛力。

中醫(yī)理論認(rèn)為，CHF的發(fā)生可歸因于外邪入侵、飲食失宜、勞倦內(nèi)傷、婦人妊娠產(chǎn)后、臟腑失調(diào)等因素[23]。其為本虛表實(shí)之證，本虛以氣虛為主，標(biāo)實(shí)以血瘀為主[24]。治療以活血益氣為主，根據(jù)不同證型輔以化瘀、溫陽(yáng)、利水等[25]。心包以膜的形式包裹心臟，為心之外衛(wèi)，代心受邪。當(dāng)心遇到外邪侵襲時(shí)，心包往往先受到損傷。內(nèi)關(guān)為心包經(jīng)之絡(luò)穴，早在《針灸甲乙經(jīng)》《百癥賦》《攔江賦》等古籍中就記載如“胸中之病內(nèi)關(guān)主之”等論述[26]。臨床研究亦表明，內(nèi)關(guān)是治療心絞痛、室性早搏、CHF等心系病癥常用的穴位之一[27-29]。任脈有“陰脈之海”之稱，五臟在臟腑中屬陰，因此任脈具有調(diào)節(jié)五臟氣血的功能。膻中為任脈經(jīng)穴，居于胸中，既是心包經(jīng)之募穴，又是八脈交會(huì)穴中的氣會(huì)，具有寬胸理氣、益氣活血的作用。依據(jù)“經(jīng)脈所過(guò)，主治所及”的理論，故膻中常用于心系疾病的治療。《備急千金要方·卷十三》言：“胸痹心痛，灸膻中百壯?！爆F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，膻中是治療胸痹心痛、冠心病、心律失常等心系病癥的常用穴位之一[30-32]。內(nèi)關(guān)與膻中穴均為治療心系病癥的常用穴位，二者皆具有調(diào)氣活血、疏經(jīng)通絡(luò)的作用，是治療CHF的經(jīng)典配伍穴對(duì)[33]。

本研究結(jié)合代謝組學(xué)技術(shù)，從代謝通路的視角揭示電針內(nèi)關(guān)與膻中穴對(duì)CHF大鼠心肌的代謝調(diào)控作用，具有一定的創(chuàng)新性和應(yīng)用價(jià)值。本研究揭示，電針對(duì)嘌呤代謝、谷胱甘肽代謝及葉酸生物合成具有特異性調(diào)節(jié)作用，明確其改善心功能的分子機(jī)制。這些發(fā)現(xiàn)為電針在心力衰竭治療中的作用提供新的理論支持，為其未來(lái)的臨床研究奠定基礎(chǔ)。盡管本研究揭示電針改善CHF的潛在機(jī)制，但仍有局限需要注意。首先，本研究基于動(dòng)物模型，結(jié)果能否直接推廣到臨床尚需進(jìn)一步驗(yàn)證;其次，代謝組學(xué)雖然揭示代謝物和代謝通路的變化，但與基因和蛋白質(zhì)水平的關(guān)聯(lián)尚未明確，需要結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進(jìn)一步研究;最后，電針治療的長(zhǎng)期效應(yīng)仍需通過(guò)更大樣本量的研究和長(zhǎng)期觀察來(lái)確定。未來(lái)的研究可通過(guò)多組學(xué)聯(lián)合分析，以及臨床試驗(yàn)驗(yàn)證其療效與安全性，為電針在CHF中的應(yīng)用提供更有力的證據(jù)。

綜上所述，電針內(nèi)關(guān)、膻中穴位能夠調(diào)控CHF大鼠心肌中與能量代謝、氧化應(yīng)激和核酸合成相關(guān)的關(guān)鍵代謝通路，降低心臟能量消耗，增強(qiáng)抗氧化防御能力，進(jìn)而改善其心臟泵血功能，這一發(fā)現(xiàn)為電針改善CHF的作用機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

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〔收稿日期〕2024-09-23

〔基金項(xiàng)目〕國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81904097）;湖南省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2024JK2132）;國(guó)家中醫(yī)藥管理局2022年青年岐黃學(xué)者培養(yǎng)項(xiàng)目（國(guó)中醫(yī)藥人教函〔2022〕256號(hào)）;湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2020JJ5430）;湖南省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目（B2023109）。

〔通信作者〕*劉" 密，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：newmean@hnucm.edu.cn;鐘" 歡，男，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：359653775@qq.com。