黃金忠 陳應(yīng)柱 劉 剛 徐 耀

[摘要] 目的 探討急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化狀態(tài)及通心絡(luò)治療對(duì)血小板活化狀態(tài)的影響。方法 采用流式細(xì)胞檢測(cè)方法,對(duì)急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物P選擇素(CD62p)及PAC-1進(jìn)行檢測(cè)研究。結(jié)果 急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物表達(dá)高于單純腦梗死組,明顯高于正常對(duì)照組,通心絡(luò)及阿司匹林能明顯抑制血小板活化標(biāo)記物表達(dá),兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 急性腦梗死發(fā)生過(guò)程中,血小板活化起著重要作用,且高血糖促進(jìn)體內(nèi)血小板活化,加重腦血管病的發(fā)生;通心絡(luò)及阿司匹林在治療急性腦梗死及腦梗死合并2型糖尿病中能明顯抑制血小板活化,在一定程度上阻斷了血小板活化過(guò)程,具有治療作用。

[關(guān)鍵詞] 通心絡(luò); 腦梗死; 糖尿病; CD62P; PAC-1

[中圖分類號(hào)] R743 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2009)33-53-02

血小板活化在急性缺血性腦血管病的發(fā)生過(guò)程中起著重要作用。研究表明,血小板膜表面蛋白標(biāo)記物P選擇素(CD62p)及PAC-1為檢測(cè)血小板活化程度和功能狀態(tài)的靈敏指標(biāo),流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用為評(píng)價(jià)血小板在體內(nèi)的活化程度提供了可靠方法[1]。

本研究我們通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù),對(duì)急性腦梗死患者采用不同抗血小板治療,分析對(duì)照阿司匹林及通心絡(luò)兩種抗血小板藥物對(duì)血小板活化標(biāo)記物表達(dá)的影響,為急性缺血性腦血管病的預(yù)防、治療提供可靠理論依據(jù)。

1 對(duì)象和方法

1.1 一般資料

腦梗死患者32例,男20例,女12例;年齡43～76歲,平均(60±8.2)歲。腦梗死合并2型糖尿病患者86例,男50例,女36例;年齡45～75歲,平均(58.3±7.8)歲。全部病例選自2006年6月～2007年12月神經(jīng)科住院治療患者,診斷符合第四屆腦血管病制定的診斷標(biāo)準(zhǔn),2型糖尿病診斷符合WHO在1985年制定的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn),血糖控制理想,同時(shí)經(jīng)頭顱MRI檢查證實(shí),排除大面積腦梗死患者,病程在起病6h～3d以內(nèi),排除腫瘤、血液系統(tǒng)疾病及免疫性疾病,患者入院后按隨機(jī)分組的原則分成三組,第一組(n=42)給予通心絡(luò)口服,每次4粒,每天3次;第二組(n=40)給予拜阿司匹林治療,首次200mg,次日始每次100mg,1次/日,頓服;第三組(n=36)不用抗血小板藥物治療,所有患者在入院第1日開(kāi)始治療,基礎(chǔ)治療相同,全部給予疏血通注射液靜脈滴注,6mL每日一次連用2周,2周后復(fù)查血小板活化標(biāo)記物的表達(dá)。陰性對(duì)照組30例,男18例,女12例;年齡28～60歲,平均(48.3±7.9)歲;為同期醫(yī)院體檢中心健康者,排除高血壓、糖尿病、冠心病、血液系統(tǒng)疾病。

1.2 試劑與儀器

FITC、PE標(biāo)記的血小板對(duì)照IgGl、IgM,PE標(biāo)記的抗血小板α顆粒膜蛋白-140(CD62P)McAb,FITC標(biāo)記的PAC-1,PerCP標(biāo)記CD61,均為美國(guó)BD公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀為BECTONDICKISON公司的FACS Galibur,用Cell Quset軟件。

1.3 方法

取兩只試管,一只加入5μL全血,再加入血小板陰性對(duì)照IgG-FITC、IgM-PE和CD61-PerCP McAb各10μL;另一只試管加入5μL全血及PAC-FITC、CD62P-PE和CD61-PerCP McAb各10μL。PerCP McAb各10μL,混勻后室溫避光孵育30min,加入0.5mL PBS緩沖液,立即上機(jī)檢測(cè)。

樣品測(cè)試前,用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球調(diào)整熒光檢測(cè)CV值在2%以下,并設(shè)定血小板光散射的最佳閾值,消除其他細(xì)胞和噪聲干擾。熒光檢測(cè)經(jīng)對(duì)數(shù)放大,收集30000個(gè)血小板。測(cè)試完畢數(shù)據(jù)存盤后用Cell quest分析軟件分析結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)軟件SAS8.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,三組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)(Newman-Keuls法),組內(nèi)治療前后比較用配對(duì)t檢驗(yàn),以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

通心絡(luò)對(duì)腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物表達(dá)的影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1-a～d。

流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板活化指標(biāo)結(jié)果:圖1-a為檢測(cè)時(shí)使用的陰性對(duì)照;圖1-b為正常對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果,血小板活化水平較低;圖1-c為腦梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平明顯增高;圖1-d經(jīng)過(guò)通心絡(luò)治療,腦梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平較治療前下降。

急性期腦梗死組、腦梗死合并糖尿病組及對(duì)照組血小板活化指標(biāo)見(jiàn)表1,三組間兩兩比較采用q檢驗(yàn),急性腦梗死及腦梗死合并2型糖尿病組血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p均顯著高于健康對(duì)照組,腦梗死合并2型糖尿病血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p高于腦梗死組,但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

對(duì)腦梗死合并2型糖尿病患者,通心絡(luò)及拜阿司匹林治療治療2周后,組內(nèi)治療前后比較采用t檢驗(yàn),血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p顯著下降,但是三組間比較q檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表2。

3 討論

血小板的質(zhì)與量的變化在腦梗死發(fā)病中起重要作用。正常人的血小板基本處于靜息狀態(tài),而在生理和病理性的血栓前狀態(tài)、血栓性疾病過(guò)程中,血小板發(fā)生活化、激活,血小板可釋放出多種活性物質(zhì)以及表達(dá)多種分子標(biāo)志物,促進(jìn)血管內(nèi)血栓的形成。腦梗死時(shí)由于組織損傷,內(nèi)皮下膠原組織暴露,血小板向內(nèi)皮下黏附,誘使血小板活化,使血小板表面CD62p表達(dá)明顯增加。CD62p、凝血酶敏感蛋白和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa一起加速血小板與內(nèi)皮下基質(zhì)的黏附及與纖維蛋白原等結(jié)合,血小板活化時(shí)表達(dá)的CD62p選擇糖蛋白配體結(jié)合,促進(jìn)白細(xì)胞與血小板的黏附及在血栓部位聚集,在啟動(dòng)及擴(kuò)大的血栓形成中具有重要意義[1,2]。

陳保國(guó)[3]等研究表明均衡其他危險(xiǎn)因素后,PAC-1、CD62p與腦梗死程度具有獨(dú)立相關(guān)性,對(duì)活化血小板功能的檢測(cè)可作為預(yù)測(cè)腦梗死發(fā)生的指標(biāo)。當(dāng)血小板黏附于血管破損處或受到活化作用后即被活化,暴露出纖維蛋白原受體(PAC-1),啟動(dòng)并促進(jìn)血栓形成;而位于血小板α顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞棒狀小體內(nèi)的CD62p在靜止期不表達(dá)或很少表達(dá)。CD62p不僅對(duì)血小板的黏附起促進(jìn)作用,而且對(duì)血小板聚集有重要作用,在腦梗死的發(fā)生中具有重要作用。

通心絡(luò)膠囊是由人參、水蛙、全蝎、娛蛤、土鱉蟲、蟬蛻、赤芍、冰片等制成的復(fù)方制劑,具有益氣活血、通絡(luò)止痛功效[4],藥效學(xué)研究顯示:通心絡(luò)膠囊能減輕局灶性腦缺血所致的腦組織損傷,減小腦梗死范圍,改善神經(jīng)損傷癥狀,增加腦血流量,降低全血粘度,明顯抑制血小板聚集和血栓形成,延長(zhǎng)凝血時(shí)間。

糖尿病是心腦血管病的重要危險(xiǎn)因素,高血糖可損傷內(nèi)皮細(xì)胞,促使血小板活化。血小板活化為腦梗死的早期因素,應(yīng)早期檢測(cè)血小板活化標(biāo)記物CD62p、PAC-1的水平;應(yīng)用抗血小板藥物預(yù)防,可以有效治療糖尿病患者血小板的活化,對(duì)防止糖尿病患者腦血管病發(fā)生具有重要意義。

本研究表明腦梗死患者血小板明顯活化,腦梗死合并2型糖尿病患者活化更加顯著,血小板活化是腦梗死的重要發(fā)病機(jī)制。通心絡(luò)具有抗血小板聚集、活化及降低血粘度作用;本研究顯示通心絡(luò)在腦梗死合并2型糖尿病患者,能夠有效降低血小板的活化。在腦梗死的治療中如果患者存在阿司匹林抵抗或者禁忌,可以使用通心絡(luò)控制血小板活化,在腦梗死的治療中具有應(yīng)用價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Atkinson C,Zhu H,Qiao F,et al. Complement-dependent P-selectin expression and injury following ischemic stroke[J]. J Immunol,2006,177(10):7266.

[2] Ishikawa M,Cooper D,Arumugam TV,et al. Platelet-leukocyte-endothelial cell interactions after middle cerebral artery occlusion and reperfusion[J]. J Cereb Blood Flow Metab,2004,24(8):907.

[3] 陳保國(guó). 頸動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死引起血小板活化機(jī)制[J]. 老年醫(yī)學(xué)雜志,2005,6(24):448-449.

[4] 吳以嶺. 絡(luò)病學(xué)[M]. 北京:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,2004:277-278.

(收稿日期:2009-06-15)