孫 瑩,吳 荒,王 波,張 靈*,趙雪儉

(1.吉林大學(xué)前列腺疾病防治研究中心白求恩醫(yī)學(xué)院病理生理教研室,吉林長春130021;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院;3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院)

胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,每年新增病例90多萬[1]。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(Signal Transducer and Activator of Transcription,STAT)是一類DNA結(jié)合蛋白,Stat3是STAT家族的重要成員,其信號傳導(dǎo)通路與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡密切相關(guān),該通路持續(xù)激活可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化,目前定義為癌基因[2]。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族成員之一。該基因在完成分化的組織中是沉默的,在大多數(shù)癌癥組織中都有很強(qiáng)的表達(dá)。Bcl-2(B cell lymphoma leukemia-2)基因是一類重要的原癌基因,可以使染色體受損的細(xì)胞免于凋亡,此類細(xì)胞的積累在增殖基因和生長抑制基因的共同調(diào)控下可發(fā)展為腫瘤[3]。Stat3、Survivin和Bcl-2三者的高表達(dá)都可能與腫瘤的發(fā)生相關(guān),本研究對 42例胃癌組中的Stat3、Survivin和Bcl-2表達(dá)進(jìn)行檢測,為揭示腫瘤發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后規(guī)律的研究做前期工作。

1 對象和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象

隨機(jī)抽取2005年1月-2008年1月間吉林大學(xué)第一醫(yī)院診斷并術(shù)后病理檢查證實(shí)的胃癌患者病理切片42例作為實(shí)驗(yàn)組,19例正常胃組織切片作為對照組。手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)中性福爾馬林固定。自動脫水,浸蠟,包埋,切片。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

脫蠟:二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各 30 min;100%酒精Ⅰ 、100%酒精 Ⅱ各 5 min、95%酒精 Ⅰ、95%酒精 Ⅱ各5 min;80%酒精5 min;蒸餾水、PBS各洗 5 min×3。阻斷:3%H2O2孵育25 min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,PBS洗 5 min×3。封閉:正常羊血清50 μ l/片滴于組織片上,室溫下孵育20 min,封閉非特異位點(diǎn)。一抗:倒去多余血清,分別滴加Stat3,Survivin及Bcl-2兔抗人多克隆抗體(1∶50稀釋濃縮型抗體),50 μ l/片,室溫1 h,PBS 5 min×3。二抗:滴加生物素化羊抗兔IgG于組織切片,50 μ l/片,37℃30 min,PBS洗5 min×3。滴加辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的親和素,50 μ l/片,37℃30 min,PBS洗 5 min×3。DAB 顯色。用蒸餾水終止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染核。弱氨水中分化/鹽酸返蘭;酒精逐級脫水,二甲苯透明,樹膠封片。顯微鏡下觀察組織中Stat3、Survivin和Bcl-2表達(dá)情況,照相。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。采用兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)分析組間差異,具體采用Mann-Whitney U法。

2 結(jié)果

采用免疫組織化學(xué)染色,結(jié)果:

2.1 42例胃癌樣本中,有31例Stat3表達(dá)陽性(74%),19例正常組織中,有2例Stat3表達(dá)陽性(11%)。Mann-Whitney U法檢驗(yàn)組間差異,Z=-4.555,P ＜0.01。

2.2 42例胃癌樣本中,有29例Survivin表達(dá)陽性(69%),19例正常組織中,未見survivin陽性表達(dá)。Mann-Whitney U法檢驗(yàn)組間差異,Z=-4.960,P＜0.01。

2.3 42例胃癌樣本中,有 25例Bcl-2表達(dá)陽性(60%),19例正常組織中,有3例Bcl-2表達(dá)陽性(16%),Mann-Whitney U法檢驗(yàn)組間差異,Z=-3.148,P＜0.01。

圖1 胃正常組織及胃癌組織中Stat3、Survivin和 Bcl-2的表達(dá)

3 討論

胃癌在惡性腫瘤中患病率位居第四,死亡率位居第二(僅次于肺癌)[1],胃癌除了腫瘤本身的生長,癌細(xì)胞還會通過肌肉粘膜浸潤,通過血管、淋巴管轉(zhuǎn)移[4],治療方案的選擇、預(yù)后的判斷對于醫(yī)患雙方均有非常現(xiàn)實(shí)的意義。研究開發(fā)新的治療方法則有賴于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的突破。在惡性腫瘤研究中,一些基因的表達(dá)產(chǎn)物與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等環(huán)節(jié)存在一定的相關(guān)性。

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(STAT)是一類DNA結(jié)合蛋白,由750-850個(gè)氨基酸組成,分子量為84-113 kDa[5]。Stat3是STAT家族的重要成員,1994年作為白細(xì)胞介素-6信號傳遞中的急性期反應(yīng)因子被純化。Stat3信號傳導(dǎo)通路與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡密切相關(guān),該通路持續(xù)激活可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化,目前定義為癌基因。在前列腺癌、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、腦星形細(xì)胞瘤等諸多腫瘤中,均可發(fā)現(xiàn)其持續(xù)性過度激活與表達(dá)。如抑制Stat3的過度表達(dá),許多癌細(xì)胞系出現(xiàn)細(xì)胞凋亡;Survivin是凋亡抑制蛋白家族成員之一。Survivin蛋白的分子量為16.3kD,由142個(gè)氨基酸構(gòu)成。Survivin在胚胎發(fā)育時(shí)期大量表達(dá),對維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和組織分化起著重要的作用。該基因在完成分化的組織中是沉默的。在IAP家族成員中,Survivin在成人組織中的表達(dá)限制性是最強(qiáng)的。Survivin在大多數(shù)癌癥組織中都有很強(qiáng)的表達(dá)[6]。在癌細(xì)胞中,Survivin的表達(dá)量增加與細(xì)胞增殖指數(shù)增加、凋亡水平下降、抵抗化療藥物能力增強(qiáng)、腫瘤復(fù)發(fā)率增加相關(guān)[7]。回顧性研究顯示Survivin表達(dá)量增加與惡性腫瘤臨床病理進(jìn)展密切相關(guān),可縮短無病存活時(shí)間。對于大部分腫瘤而言,Survivin可以作為一個(gè)預(yù)測指標(biāo),協(xié)助判斷預(yù)后[8]。Bcl-2基因是一類重要的原癌基因,可以使染色體受損的細(xì)胞免于凋亡,此類細(xì)胞的積累在增殖基因和生長抑制基因的共同調(diào)控下可發(fā)展為腫瘤。在白血病、骨髓瘤、結(jié)腸癌及前列腺癌等多種組織與細(xì)胞系中均可見其異常表達(dá)[9]。

本研究結(jié)果顯示,與其他惡性腫瘤一樣,Stat3、Survivin和Bcl-2在人胃癌組織中表達(dá)上調(diào),與正常胃組織相比存在明顯差異,三者的高表達(dá)都可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。Stat3、Survivin和Bcl-2間存在交互作用,但具體通路如何尚待更為深入研究。如果能找到關(guān)鍵環(huán)節(jié),采用特異分子拮抗劑,抑制腫瘤組織中相關(guān)因子的表達(dá),就有可能在腫瘤治療方面取得突破。

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