田昆侖 楊志華

大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與病理生理學(xué)教研室，云南 大理 671000

缺血后再灌注，不僅不能使組織、器官的功能恢復(fù)，反而加重機(jī)能結(jié)構(gòu)的損害，目前研究認(rèn)為其發(fā)生與體內(nèi)超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）活力，一氧化氮（nitric oxide,NO）水平變化有關(guān)［1，2］。心脈龍注射液（Xinmailong injecrion,XML）是我院藥學(xué)院發(fā)明的國(guó)家二類新藥（中藥），其在臨床上主要用于改善缺血導(dǎo)致的微循環(huán)障礙，對(duì)缺血再灌注方面的影響，目前研究尚少，本研究旨在探討心脈龍注射液對(duì)低血容量休克缺血再灌注兔的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物模型

健康家兔16只，雌雄不限，體重1.8～2.5kg，本院動(dòng)物室提供。3%戍巴比妥鈉（30mg/kg）耳緣靜脈注射麻醉，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，肝素化后（800цg/kg）頸總動(dòng)脈插管連接三通和血壓測(cè)定裝置（PC-lab多道生物信號(hào)分析系統(tǒng)）。

分離雙側(cè)輸尿管并插管，計(jì)數(shù)每分鐘尿量。經(jīng)三通管放血使血壓在10min內(nèi)由正常的16.2kpa降至5.3kpa，維持30min，失血量占總血量的50%。經(jīng)頸外靜脈快速回輸自體血液的20mL生理鹽水，外加100mL液體補(bǔ)充手術(shù)丟失的水分（1h內(nèi)輸完）。

1.2 分組和標(biāo)本采集

輸入自體血和等量鹽水（I-R+NS）。分別于失血前（before ischemia，BI），I-R后30min、1h、2h、頸外靜脈取血測(cè)定血漿SOD活力、NO代謝產(chǎn)物亞硝酸鹽/硝酸鹽（）含量、血液pH值，并計(jì)數(shù)相應(yīng)時(shí)段每分鐘尿量（mL/min）。

1.3 檢測(cè)方法

SOD活力測(cè)定用黃嘌呤氧化酶法，試劑盒購自南京建程生物工程研究所。NO含量測(cè)定用比色法：待測(cè)血漿經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后，同Griess試劑進(jìn)行重氮偶氮反應(yīng)，其產(chǎn)物在548nm處有最大吸收峰，用亞硝酸鹽做標(biāo)準(zhǔn)，721B型分光光度計(jì)測(cè)定含量，間接反應(yīng)NO水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)處理

數(shù)據(jù)均以±s表示，組內(nèi)=組間比較采用t檢驗(yàn)判斷差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 I—R時(shí)血漿含量變化及SM對(duì)其影響

2.2 I—R時(shí)血漿SOD活力變化及SM對(duì)其影響

表1 XML對(duì)血漿SOD活力的影響Tab 1 effect of xinmailongi injection on SOD activity of plasma(Nu/Ml，n＝8)

表2 XML對(duì)血液PH值的影響Tab 2 effect of xinmailong injection on blood pH（n＝8）

將兔隨機(jī)分兩組，XML組：缺血30min，再灌注時(shí)頸外靜脈快速輸入自體血和20mL生理鹽水（XML加入生理鹽水中，1.5ML/kg）（I-R+SM）。對(duì)照組：缺血30min，再灌時(shí)

由表1可見，I—R后30min、1h、2h均較BI明顯下降(p＜0.01，P＜0.001）。SM注射液可有效防止SOD活力下降，I—R后1h已有所增加，2h明顯高于對(duì)照組（p＜0.01）表1。

2.3 I—R時(shí)血漿pH值變化及XML對(duì)其影響

由表2可見，I—R克引起血液pH下降，對(duì)照組I—R2h已由BI7.34±0.02降至7.18±0.09（p＜0.01）。SM可防止pH值已開增高，2hpH值顯著高于對(duì)照組（p＜0.01）。

2.4 尿量變化（mL/min）

缺血前，對(duì)照組0.15±0.03；XML組0.13±0.04，兩組比較無明顯差異（p＞0.05）.I-R30min,兩組均無尿，XML組委0.05±0.03，兩組比較有顯著差異（p＜0.01）；I-R2h，對(duì)照組仍無尿，XML組0.08±0.02，兩組比較有非常顯著差異（p＜0.001）。

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，免缺血再灌注后血漿NO-2／NO-3含量和SOD活力均逐漸下降；SM能夠阻止NO-2／NO-3水平下降；增加pH值，改善循環(huán)血液狀態(tài)，使尿量增加。

有研究證明［1，2］缺血再灌注時(shí)由于大量自由基產(chǎn)生，使SOD消耗增多，活力下降，同時(shí)使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損傷，NO合成釋放減少，滅活加快，加之缺血氧致酸中毒，NO濃度進(jìn)一步下降。NO為血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的內(nèi)皮細(xì)胞衍生舒張因子，正常情況下不斷產(chǎn)生進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞激活鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+水平降低，平滑肌松弛，血管舒張［3］。病理情況下，NO合成釋放減少，滅活增加，血中NO濃度降低，輸血管作用減弱，縮血管作用增加，使血管壁增厚，管腔狹窄，血流減少，加之血小板聚集，粘附并釋放大量活性物質(zhì)，導(dǎo)致微循環(huán)障礙，內(nèi)臟血流減少，出現(xiàn)少尿或無尿。故缺血再灌注后血漿NO含量和SOD活力下降，互為因果，造成惡性循環(huán)。

心脈龍注射液是我院藥物研究所研制的國(guó)家二類新藥，有研究報(bào)道心脈龍注射液能抑制缺氧/缺糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及鈣超載，有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用[4、5]，同時(shí)有對(duì)抗氧自由基、減少腦出血時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用和對(duì)缺血再灌注心肌有保護(hù)作用[3、4]。因此，心脈龍注射液通過增加血漿SOD活力，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。NO含量增加可以抑制纖維蛋白原與血小板結(jié)合，防止血小板粘附損傷的內(nèi)皮或沉積在損傷的血管壁上，組織血小板與其它細(xì)胞聚集，同時(shí)解聚已聚合的血小板，而被激活的血小板能釋放5-羥色胺，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放血管舒張因子NO[1]。NO本身具有抑制白細(xì)胞粘附、中和氧自由基而拮抗過氧化作用[5]，同時(shí)擴(kuò)張血管，改善血液循環(huán)狀態(tài)。試驗(yàn)中觀察到XML組再灌注1h，家兔尿量明顯增強(qiáng)，表明內(nèi)臟血供開始恢復(fù)；血液pH值由再灌注后30min7.24±0.07逐漸增至7.31±0.04，也提示缺血再灌注后引發(fā)的酸中毒有所糾正。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，心脈龍注射液對(duì)缺血再灌注兔有一定保護(hù)作用。

[1] Hazem A,Irce PG,Carhal JK.Nitric oxide(Endonthelium derived relaxing factor)attenuates revascularization induced lung in jury[J].J Surg Res，1994（57）：39－43.

[2] Suznki J.The protective effect of combined administration of anti-oxidants and perfluorchemicals on cerebral iachemia[J］.Stroke，1984（15）：672－674.

[3] Vallance P,Collier J,Moncada S.Effects of endothelial derived＆127;nitric oxide on peripheral arteriolar tone in man［J］.Lancet，1989（8670）：997－999.

[4] 田昆侖，蘇娟，等.心脈龍注射液對(duì)肝缺血/再灌注損傷脂質(zhì)過氧化的[J].中華臨床醫(yī)藥雜志，2003，17(4)：7－8.

[5] 田昆侖，蘇娟，等.心脈龍注射液對(duì)骨骼肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中外健康文摘，2008，5(3)：331－333.