盧春鳳,陳廷玉,王麗敏,白 雪,商 宇,王淑湘,譚 宏

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

異煙肼(Isoniazid,IN H)是常用的抗結(jié)核治療一線藥物[1],因其具有明顯的肝毒性[2,3],故嚴(yán)重限制了它的臨床應(yīng)用。為此,從中草藥中尋找安全有效的保護(hù)肝損傷藥物,顯然具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。槲皮素(Quercetin)是廣泛存在于植物中的類黃酮化合物,具有較強(qiáng)的抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肝纖維化、抗腫瘤等作用[4～7]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究已觀察到槲皮素對(duì) INH所致肝損傷有明確的保護(hù)作用,本研究將在以往工作的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究槲皮素對(duì) IN H誘導(dǎo)的肝臟氧化損傷的影響,探討其對(duì)IN H致肝損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康 SD大鼠40只,雌雄各半,體重(180～ 200)g,由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ,動(dòng)物合格證號(hào):SYXK(黑)2006-004。

1.2 藥品與試劑

異煙肼購(gòu)自西南藥業(yè)有限公司;槲皮素購(gòu)自北京華美生科生物技術(shù)有限公司。2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)、福林酚試劑、四乙氧基丙烷 (1,1,3,3-tetraethoxypropane,TEP)購(gòu)自 Sigma公司;谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及處理

動(dòng)物經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后,按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)、IN H組(100mg/kg)、槲皮素低劑量組(槲皮素 50mg/kg+INH100mg/kg)和槲皮素高劑量組(槲皮素 100mg/kg+ IN H 100mg/kg),每組10只 ,每天灌胃 1次,連續(xù) 14d。動(dòng)物自由攝食飲水,飼養(yǎng)室光照 12h,黑暗 12h,室溫 (22± 2)°C,相對(duì)濕度 (50± 10)% 。

1.3.2 觀察指標(biāo)與方法

實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠飲食、活動(dòng)、皮毛及體重變化等一般狀況。連續(xù)用藥14d,末次給藥后禁食過夜,將大鼠麻醉,股靜脈取血,分離紅細(xì)胞,制備紅細(xì)胞懸液。剖開腹腔取適量肝臟立即置于液氮中凍存,于測(cè)試前取出,制備 10%組織勻漿。采用 TBA法測(cè)定血和肝組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(malondialdehyde,M DA)含量;采用 DTNB直接法測(cè)定血和肝組織中 GSH-Px活性;采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血和肝組織中 SOD活性。肝組織勻漿中蛋白含量采用Lowry’s法測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般狀況

與正常對(duì)照組比較,IN H損傷組在用藥后有不同程度的精神萎靡,活動(dòng)遲緩,毛發(fā)蓬亂,體重減少等;槲皮素各劑量組大鼠的一般狀況明顯優(yōu)于 IN H損傷組,但較正常對(duì)照組稍差。

2.2 槲皮素對(duì)大鼠血中 M DA含量和 SOD、GSH-Px活性的影響

與正常對(duì)照組比較,IN H損傷組M DA的含量顯著增高(P ＜ 0.01),而 SOD和 GSH- Px活性顯著下降(P ＜0.01)。與 IN H損傷組比較,高劑量槲皮素能使 MDA含量顯著下降 (P＜0.01),而使SOD和 GSH-Px活性明顯增高 (P ＜ 0.05),見表1。

表1 槲皮素對(duì)大鼠血中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影響 ±s,n=10)

表1 槲皮素對(duì)大鼠血中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影響 ±s,n=10)

注:與正常對(duì)照組比較:**P＜0.01;與IN H損傷組比較:ΔP＜0.05,Δ Δ P＜0.01。

2.3 槲皮素對(duì)大鼠肝組織中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影響

與正常對(duì)照組比較,IN H損傷組M DA的含量明顯升高(P ＜ 0.01),而 SOD和 GSH- Px活性明顯降低(P ＜0.01)。與 IN H損傷組比較,高劑量槲皮素能使 MDA含量降低 (P＜0.05),并使 SOD和 GSH-Px活性明顯升高(P ＜ 0.05),見表2。

表2 槲皮素對(duì)大鼠肝組織中 M DA含量和SOD、GSH-Px活性的影響 ±s,n=10)

表2 槲皮素對(duì)大鼠肝組織中 M DA含量和SOD、GSH-Px活性的影響 ±s,n=10)

注:與正常對(duì)照組比較:** P＜0.01;與 IN H損傷組比較:ΔP ＜0.05。

3 討論

IN H在肝臟中可被代謝為乙酰肼,其代謝物具有脂質(zhì)過氧化作用,可使細(xì)胞膜及線粒體膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),引起肝臟損傷[8]。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物之一,通過測(cè)定其在血與肝組織中的含量,可反映機(jī)體和肝臟發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的情況,間接反映出肝臟毒性損傷程度。 SOD和GSH-Px是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶,對(duì)機(jī)體氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)平衡起著至關(guān)重要的作用,測(cè)定血和肝組織中 SOD和 GSH-Px活性變化在一定程度上可間接反映機(jī)體抗氧化的能力。本實(shí)驗(yàn)中,INH損傷組大鼠血和肝組織中MDA含量顯著升高,SOD和GSH-Px活性顯著降低 ,表明IN H可造成大鼠肝臟氧化損傷。

槲皮素屬類黃酮化合物中的黃酮醇,富含酚羥基,對(duì)各種自由基 (超氧陰離子、羥自由基等)有直接清除作用。研究表明,槲皮素在體外可通過直接清除各種活性氧自由基、抑制 DNA氧化損傷、鰲合金屬離子等發(fā)揮明顯的抗氧化作用。此外,Lee等研究發(fā)現(xiàn)槲皮素能明顯抑制 DMN導(dǎo)致大鼠血清 ALT和 AST活性的升高,增加血清 GSH含量,并能明顯降低肝組織中M DA水平,表明槲皮素對(duì) DMN誘導(dǎo)的肝氧化損傷具有保護(hù)作用。Molina等也證實(shí)槲皮素可通過降低M DA水平、增加 GSH含量及提高 SOD和 GSH-Px等抗氧化酶活性來預(yù)防小鼠酒精性肝氧化損傷。在本研究中,槲皮素可使大鼠血和肝組織中 MDA含量明顯降低,SOD和 GSH-Px的活性明顯增高,提示槲皮素可以通過提高機(jī)體抗氧化酶的活性來拮抗INH引起的肝臟氧化損傷。表明槲皮素能夠明顯提高大鼠抗氧化系統(tǒng)的功能,從而抑制 IN H所致大鼠肝臟脂質(zhì)過氧化反應(yīng),發(fā)揮肝臟保護(hù)作用。

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