王麗君 秦濤 馬少林

自體脂肪移植操作簡(jiǎn)便、組織損傷小，術(shù)后皮膚表面不遺留瘢痕、無(wú)異物免疫反應(yīng)及毒性物質(zhì)吸收，是矯正小范圍凹陷或缺損畸形的較好方法，目前廣泛用于治療軟組織凹陷或缺損，如面部衰老[1]、半面萎縮[2]、足底脂肪墊萎縮[3]，還可以用于修補(bǔ)鼓膜[4]、增寬聲帶[5]等。

由于脂肪組織在獲取、處理、注射等步驟中，受到眾多理化因素的影響，活性有所降低。為提高脂肪組織自體移植的成活率，有必要控制和調(diào)節(jié)各影響因素，減少脂肪損傷。本實(shí)驗(yàn)旨在研究脂肪受腫脹麻醉液抑制后，經(jīng)不同漂洗液及不同漂洗次數(shù)處理后的活性差異，為臨床實(shí)踐提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

共23名患者，均為女性，年齡25～45歲，因單純性肥胖和需自體脂肪移植接受腫脹吸脂術(shù)。

1.2 主要試劑及配方

平衡液:氯化鈉83.8 mol/mL、氯化鉀10.1 mol/mL、氯化鈣4.3 mol/mL、氯化鎂1.48 mol/mL、枸櫞酸鈉5.78 mol/mL、醋酸鈉28.6l mol/mL，pH值8.2、滲透壓298 mOsm。

腫脹液:生理鹽水1 000 mL、2%鹽酸利多卡因30 mL、0.1%鹽酸腎上腺素1 mL、5%碳酸氫鈉10 mL。

實(shí)驗(yàn)用DMEM:高糖和低糖DMEM(美國(guó)Gibco公司)以1∶1的比例配成含糖15 mmol/L的溶液，不添加血清。

1.3 脂肪的獲取

按常規(guī)腫脹吸脂法吸取脂肪組織。吸出液靜置30 min，棄去下層腫脹液及雜質(zhì)后，用50 mL注射器吸取待用。

1.4 脂肪的漂洗

取10個(gè)培養(yǎng)皿，各注入5 mL脂肪組織，分別用生理鹽水、平衡液漂洗0、1、3、5、10次。漂洗方法為:每次吸取15 mL漂洗液，與脂肪組織混勻后靜置10 min，去除下層液體。

1.5 葡萄糖轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)[6－7]

在上述培養(yǎng)皿中加入10 mL實(shí)驗(yàn)用DMEM和1 U正規(guī)胰島素，作為實(shí)驗(yàn)組。另設(shè)3個(gè)空白標(biāo)本:10 mL實(shí)驗(yàn)用DMEM和1 U正規(guī)胰島素，不含脂肪。將培養(yǎng)皿置入35℃、5%CO2培養(yǎng)箱，孵育1 h后，測(cè)定DMEM中葡萄糖含量?？瞻讟?biāo)本的葡萄糖濃度均值為基本濃度。葡萄糖轉(zhuǎn)移量代表脂肪活性，葡萄糖轉(zhuǎn)移量大，說(shuō)明脂肪代謝旺盛、活性較高。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用析因設(shè)計(jì)進(jìn)行方差分析，用SPSS 11.5軟件處理數(shù)據(jù)。P0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P0.01代表有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

生理鹽水組葡萄糖轉(zhuǎn)移量大于平衡液組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組中，漂洗0和1次時(shí)的葡萄糖轉(zhuǎn)移量明顯低于漂洗3次(P0.01)；生理鹽水組中，漂洗3次和5次時(shí)的葡萄糖轉(zhuǎn)移量無(wú)明顯差異(P0.05)，但漂洗10次時(shí)的葡萄糖轉(zhuǎn)移量明顯低于漂洗3次和5次(P0.05)；平衡液組中，漂洗3次、5次和10次時(shí)的葡萄糖轉(zhuǎn)移量無(wú)明顯差異(P0.05)(表1)。

表1 葡萄糖轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

在自體脂肪移植術(shù)中，脂肪的活性在漂洗前就受到多種理化因素的影響。目前，對(duì)于如何提高脂肪組織活性尚存疑義[13－14]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，灌注腫脹麻醉液后，鹽酸利多卡因及鹽酸腎上腺素對(duì)脂肪的活性有明顯抑制作用，應(yīng)該用離心或是漂洗的方法去除其抑制作用、提高脂肪存活率[15]。

本實(shí)驗(yàn)為量化漂洗過(guò)程，每次漂洗吸取15 mL漂洗液，與脂肪組織混勻后靜置10 min，脂肪組織即與漂洗液充分分離。葡萄糖轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，敏感度高，并可定量檢測(cè)脂肪細(xì)胞的活性。因此，采用該方法來(lái)比較經(jīng)生理鹽水和平衡液處理不同次數(shù)后脂肪組織的活性是可靠的。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，生理鹽水漂洗組脂肪組織的葡萄糖轉(zhuǎn)移量大于平衡液組。原因可能是，平衡液中除了含有氯化鈉之外，還有氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、枸櫞酸鈉、醋酸鈉等多種成分，其中某些成分可能會(huì)抑制脂肪組織的活性。無(wú)論是用生理鹽水還是平衡液，漂洗1次后，脂肪組織的活性沒(méi)有變化，這可能是因?yàn)?，漂洗不充分，殘存腫脹麻醉液或是破碎的組織細(xì)胞，影響了測(cè)定結(jié)果。漂洗3次以上，脂肪組織活性有所提高，考慮與漂洗較完全有關(guān)，但是并不能明確腫脹麻醉液的抑制作用是否完全去除。

生理鹽水漂洗3、5、10次之后，脂肪組織的葡萄糖轉(zhuǎn)移量增大，說(shuō)明生理鹽水漂洗能提高脂肪活性。而生理鹽水漂洗3次與5次時(shí)，脂肪組織的葡萄糖轉(zhuǎn)移量無(wú)明顯變化，說(shuō)明用生理鹽水漂洗時(shí)，漂洗3次即能達(dá)到較好的效果。

平衡液漂洗3、5、10次之后，脂肪組織葡萄糖轉(zhuǎn)移量增大，說(shuō)明平衡液漂洗也能提高脂肪活性。但是漂洗3、5、10次，脂肪活性無(wú)明顯變化，說(shuō)明3次之后再增加漂洗次數(shù)，對(duì)改變脂肪活性并無(wú)明顯影響。

綜上所述，通過(guò)漂洗可以提高腫脹麻醉下所得脂肪組織的活性。生理鹽水漂洗的效果優(yōu)于平衡液。用生理鹽水漂洗時(shí)，充分漂洗3次，就可以提高脂肪活性。

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