肖 慧， 劉清飛， 王義明， 羅國安*， 鄭亞玉

(1.清華大學(xué)生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究院，北京100084;2.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550002)

巖白菜素(Bergenin)，又稱巖白菜內(nèi)酯、矮茶素、佛手配質(zhì)，分子式為C14H16O9，為白色疏松針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末;氣微，味苦。遇光和熱變色，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶。巖白菜素具有鎮(zhèn)咳祛痰，提高免疫的作用，是治療慢性支氣管炎的常用藥，2005年版《中國藥典》一部收載為鎮(zhèn)咳祛痰藥，用于慢性支氣管炎。目前市場上主要?jiǎng)┬陀衅胀ㄆ?、口含片、口崩片、滴丸、軟膠囊、糖漿、口服液等等，其中以普通片劑應(yīng)用最廣泛。但普遍存在口服吸收差，生物利用度低的問題。緩釋片的吸收時(shí)間長，血藥峰濃度相對(duì)降低且血藥濃度波動(dòng)減小，藥物總吸收不變，因此可更好的維持平穩(wěn)的血藥濃度，提高患者的治療依從性。但是緩釋制劑也有不足之處，如釋藥緩慢，所以藥物起效較普通制劑慢，為了改善這一點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)將巖白菜素壓制成既有速釋又有緩釋部分的雙層片，達(dá)到既速效又長效的目的。本研究探討巖白菜素雙層片的制備并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。

1 儀器與試藥

大連依利特 C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);Agilent 1100型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司);YST-100雙層壓片機(jī)(江蘇省金壇市威克壓片廠);XS105 型電子天平(d=0.01 mg，METTLERTOLEDO);AL104型電子天平(METTLER-TOLEDO);Tu-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);RC-8溶出度測試儀(天津市新天光分析儀器技術(shù)有限公司);CJY-300B型片劑脆碎度測試儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);YPD-200C型片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)。

巖白菜素(批號(hào):20080515，純度:98.2%，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司);巖白菜素雙層片(自制，批號(hào):20080801，20080802，20080803，規(guī)格:325 mg);羥丙基甲基纖維素(K100M，K15M，K4M，藥用級(jí)，上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司);乳糖(藥用級(jí)，武漢合中醫(yī)藥化工有限公司);微晶纖維素(101，藥用級(jí)，曲阜市天利藥用輔料有限公司);硬脂酸鎂(藥用級(jí)，湖州展望藥業(yè)有限公司);水為蒸餾水;甲醇(色譜純，美國Merck公司);甲醇、乙醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 巖白菜素雙層片制備 為使巖白菜素雙層片既具有速釋作用又具有緩釋作用，欲制備的巖白菜素雙層片的理論累積釋放度標(biāo)準(zhǔn)如表1。

表1 巖白素雙層片理論累積釋放度

10 min前主要由速釋層釋藥，發(fā)揮速效作用;10 min～10 h由緩釋層釋藥，發(fā)揮長效作用。

2.1.1 緩釋層骨架材料的篩選 為篩選出適合的骨架材料，根據(jù)初步研究，對(duì)20%的 HPMCK4M、HPMCK15M和HPMC K100M壓制的單層緩釋片的累積釋放度進(jìn)行比較，結(jié)果見圖1。

圖1 不同黏度HPMC制得緩釋片釋放曲線

由圖1可知，隨著HPMC黏度增加藥物釋放速度逐漸減慢，本試驗(yàn)選用HPMCK4M作為骨架緩釋材料。

2.1.2 HPMCK4M用量的篩選 選擇占總片重的比率分別為20%、30%、40%的HPMCK4M用量，同時(shí)加入巖白菜素及其它輔料，以乳糖調(diào)節(jié)片重恒定250 mg。按照制備工藝制備緩釋片，測定不同時(shí)間的累積釋放度，繪制釋放曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。

由圖2可知，隨著HPMCK4M用量的增加藥物釋放速度逐漸減慢，HPMCK4M占20%時(shí)釋放快，30%時(shí)釋放慢，最佳HPMCK4M用量在20% ～30%之間。

圖2 不同用量的HPMCK4M釋放曲線

對(duì)HPMCK4M的用量和片劑硬度大小進(jìn)行進(jìn)一步篩選，結(jié)果表明當(dāng)水凝膠骨架材料選用HPMCK4M且用量為25%，硬度為40N～70 N時(shí)，釋放度曲線與緩釋層理論釋放曲線接近，2、5、10h累積釋放度分別為 24.03%、53.16%、92.65%。根據(jù)巖白菜素的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，緩釋層:速釋層以2:1比例的巖白菜素量添加速釋層，制備的巖白菜素雙層片的釋放曲線與設(shè)計(jì)的理論釋放曲線比較接近。

2.1.3 巖白菜素雙層片制備 將雙層片各組分過80目篩。按緩釋層處方量稱取巖白菜素及輔料，按等量遞增法混勻，用適量1%的PVPK30乙醇溶液制軟材，24目制粒，烘干，24目整粒，外加0.5%硬脂酸鎂混勻，制備得緩釋顆粒;按速釋處方量稱取巖白菜素、微晶纖維素及乳糖等輔料，充分混勻，用適量5%PVPK30乙醇溶液制成軟材，24目制粒，烘干，24目整粒，外加0.5%硬脂酸鎂混勻，制備得速釋顆粒。先以較小的壓力壓制緩釋片，再在緩釋片的基礎(chǔ)上壓制雙層片。

2.2 巖白菜素陰性雙層片制備 除巖白菜素外，將其它所有組分按巖白菜素雙層片的處方配比和制備方法制備即得。

2.3 外觀性狀 制備的巖白菜素雙層片表面光潔，白色片。

2.4 硬度 隨機(jī)從制備的3批白菜素雙層片中各取20片，用硬度儀檢測硬度。結(jié)果:巖白菜素雙層片的硬度均在40 N～70 N，3批巖白菜素雙層片的硬度均較好。

2.5 脆碎度 隨機(jī)從制備的3批巖白菜素雙層片中各取45片，按照《中國藥典》2005年版二部附錄XG(片劑脆碎度檢查法)檢測?！吨袊幍洹?005年版二部附錄XG(片劑脆碎度檢查法)規(guī)定，本實(shí)驗(yàn)一般僅作1次，如減失重量超過1%時(shí)，應(yīng)復(fù)檢2次，3次的平均減失重量不得超過1%，并不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。結(jié)果表明，3批樣品均符合《中國藥典》2005年版規(guī)定。

2.6 片重差異 隨機(jī)取3批巖白菜素雙層片各20片，按照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠA片劑中重量差異檢測方法檢測。結(jié)果表明，3批巖白菜素雙層片片重差異較小，RSD分別為0.98%、1.17%、1.25%，符合《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠA片劑中重量差異要求。

2.7 含量測定

2.7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱取巖白菜素對(duì)照品24.82 mg，置25 mL棕色量瓶中，用5 mL甲醇溶解，并用水稀釋制成濃度為每1 mL含巖白菜素0.9928 mg的溶液，即得對(duì)照品貯備液。精密吸取上述對(duì)照品貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于 10 mL棕色量瓶中，加入20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 49.64、99.28、198.6、297.8、397.1、496.4 μg/mL的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測定，測定峰面積，以巖白菜素峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程:Y=12190X-17.917(r=1.0000)，結(jié)果表明巖白菜素在49.64～496.4 μg/mL 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.7.2 樣品溶液制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于巖白菜素10 mg)置50 mL量瓶中，加10 mL甲醇溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得巖白菜素雙層片樣品溶液。

2.7.3 巖白菜素雙層片陰性溶液的制備 取陰性雙層片，照供試品溶液制備項(xiàng)下制備，即得巖白菜素陰性溶液。

2.7.4 色譜條件 色譜柱:大連依利特 C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);柱溫:25 ℃;流動(dòng)相:甲醇-水(23:77);檢測波長:275 nm;流速:1.0 mL/min。

2.7.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 本試驗(yàn)采用流動(dòng)相甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，測定本品中巖白菜素的含量，分離效果良好，色譜圖見圖3。

從以上HPLC圖可見，巖白菜素的保留時(shí)間在7.3 min左右，陰性無干擾，理論塔板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)為10786。

2.7.6 檢測限和定量限的測定 在選定的色譜條件下，按信噪比為3:1、10:1分別對(duì)其最低檢測限和定量限進(jìn)行測定，結(jié)果表明，檢測限和定量限分別為2.97 μg、9.93 μg。

2.7.7 樣品的含量測定 取批號(hào)為20080801批、20080802批、20080803的巖白菜素雙層片按2.7.2項(xiàng)下制備9份樣品，按2.7.4項(xiàng)下的色譜條件測定峰面積，根據(jù)線性方程計(jì)算含量，三批巖白菜素雙層片的含量分別為 57.18%、57.41%、57.18%。

圖3 巖白菜素HPLC圖

2.8 巖白菜素雙層片釋放度檢測

2.8.1 標(biāo)準(zhǔn)液配制 精密稱取巖白菜素對(duì)照品22.00 mg置于50 mL棕色量瓶中，用10 mL甲醇溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，得濃度為440 μg/mL的對(duì)照品貯備液，精密量取此對(duì)照品貯備液2、3、4、5、6、7 mL置于100 mL棕色量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 8.800、13.20、17.60、22.00、26.40、30.80 μg/mL 巖白菜素對(duì)照品溶液。

2.8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取上述對(duì)照品溶液在275 nm波長處測定吸度，吸收度A對(duì)濃度C對(duì)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，A=22.591C+0.0006(r=0.9999)。結(jié)果表明在275 nm處，巖白菜素的濃度在8.80～30.80 μg/mL范圍內(nèi)與吸收度線性相關(guān)。

2.8.3 釋放度測定 根據(jù)2005年版《中國藥典》緩釋制劑指導(dǎo)原則(附錄X D)釋放度測定法的有關(guān)規(guī)定，采用第1法測定緩釋片在不同時(shí)間點(diǎn)的累積釋放度。分別量取經(jīng)脫氣處理的純水900 mL于6個(gè)溶出杯中，加溫至釋放介質(zhì)溫度恒定在(37±0.5)℃。調(diào)整攪拌漿的轉(zhuǎn)速至100 r/min。自巖白菜素雙層片接觸釋放介質(zhì)起，立即計(jì)時(shí);分別于第10 min、30 min、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h 和 10 h 吸取釋放液6 mL，用0.45 μL 微孔濾膜過濾，收集濾液，待檢測。同時(shí)補(bǔ)充6 mL空白釋放介質(zhì)。采用UV法進(jìn)行樣品含量測定，計(jì)算累積釋放度。

2.8.4 巖白菜素雙層片的累積釋放度檢測 分別對(duì)巖白菜素雙層片和巖白菜素速釋部分在水中累積釋放度進(jìn)行了考察。從而推算出巖白菜素緩釋部分的累積釋放度，結(jié)果見表2。累積釋放曲線見圖4。

2.8.5 釋藥動(dòng)力學(xué)分析 巖白菜素雙層片及巖白菜素速釋、緩釋部分的體外釋放行為見圖4。巖白菜素雙層片速釋部分在10 min內(nèi)完全崩解，巖白菜素雙層片緩釋部分釋藥持續(xù)10 h。

表2 巖白菜素雙層片的累積釋放度

圖4 巖白菜素雙層片、速釋部分、緩釋部分的體外釋放曲線

對(duì)10 min ～10 h 分別按 Peppas、Higuchi、零級(jí)方程和一級(jí)方程進(jìn)行擬合，結(jié)果見表3。

表3 10 min～10 h巖白菜素雙層片緩釋層釋放方程的擬合

如表3所示，在10 min～10 h，Peppas方程相關(guān)系數(shù)最大，最能反應(yīng)緩釋層的釋放動(dòng)力學(xué)特征及釋放過程。

3 討論

3.1 巖白菜素雙層片的緩釋層采用國內(nèi)外應(yīng)用廣泛的非離子型纖維素，其具有可壓性好、流動(dòng)性好、釋藥特性不受pH影響等優(yōu)點(diǎn)［1-2］，巖白菜素雙層片速釋層應(yīng)用易崩解輔料，使其在10 min內(nèi)崩解完全。因速釋層釋放非常快，雖然壓成雙層片后有一個(gè)側(cè)面被隔離不能與溶出介質(zhì)直接接觸，但考慮到速釋片釋放非?？?，因此可以認(rèn)為不影響雙層片中速釋部分的檢測。此外，緩釋部分的釋放因?yàn)橐彩怯幸粋€(gè)面被隔離，但速釋部分崩解快，因此可認(rèn)為不影響緩釋層釋放。

3.2 從圖4釋放度曲線可看出，0～10 min曲線斜率遠(yuǎn)大于10 min～10 h曲線斜率，由此可見0～10 min主要是速釋層釋藥，10 min后則是緩釋層釋藥。速釋層快速釋藥使血藥濃度快速達(dá)到有效濃度，發(fā)揮療效;緩釋層緩慢釋藥能使機(jī)體在一段時(shí)間內(nèi)維持平穩(wěn)有效血藥濃度，提高治療依從性。

3.3 巖白菜素雙層片的釋放曲線按Peppas方程進(jìn)行擬合，n為0.88(10 min～10 h)，說明在10 min～10 h段表現(xiàn)為不規(guī)則轉(zhuǎn)運(yùn)。

3.4 國內(nèi)已上市的巖白菜素的劑型基本為口服制劑，分為單方和復(fù)方，但普遍存在口服吸收差，生物利用度低的問題。通過查閱資料僅能得知普通制劑給予人和狗口服后，吸收快但不完全，半衰期短(T1/2β)為 4.13 h［3］，生物利用度不高，4 h 后尿中出現(xiàn)原型藥物。狗肌注后出現(xiàn)血藥濃度高峰，1 h后出現(xiàn)尿藥濃度高峰。本文雙層片中的緩釋層釋藥使有效血藥濃度維持一定時(shí)間，提高生物利用度。

3.5 本試驗(yàn)僅進(jìn)行了巖白菜素雙層片的體外釋藥，巖白菜素雙層片的體內(nèi)釋藥有待進(jìn)一步研究。

［1］羅明生，高天惠.藥劑輔料大全［M］.成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社，1995.

［2］Mehuys E，Vervaet C，Remon J P.Hot-melt extruded ethyllellulose cylinders containing a HPMC-Gelucire core for sustained drug delivery［J］.J Controlled Release，2004，94(2):273.

［3］Yan B S，Yan P S，Qing G M.Determination and pharmacokinetic study of bergenin in rat Plasma by RP-HPLC method［J］.Biomed Chromatogr，2006，20:1069.