周慧 高劍鋒

HPLC法測定佳樂靜液中阿普唑侖的含量

周慧 高劍鋒

目的建立高效液相色譜法測定佳樂靜液中阿普唑侖的含量的方法。方法采用高效液相色譜法測定佳樂靜液中阿普唑侖的含量，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為磷酸鹽緩沖液:乙腈:甲醇(65:35:5);流速:1 ml/min;進樣:20 μl;阿普唑侖紫外檢測波長:220nm［1］。以外標法計算樣品中阿普唑侖的含量。結(jié)果阿普唑侖濃度在9.318～31.06 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999(n=5)。阿普唑侖精密度RSD(%)=0.98;重復(fù)性RSD(%)=0.28;穩(wěn)定性RSD(%)=0.85。樣品的平均回收率為100.0%，RSD(%)=0.34。三批樣品含量測定的平均值分別為97.18%、97.73%、98.60%。結(jié)論方法簡便、迅速、靈敏、準確，并獲得了滿意的測定結(jié)果，可以推廣使用。

反相高效液相色譜法;阿普唑侖;佳樂靜液

佳樂靜液為口服液，溶液呈灰褐色，氣微香，味苦后澀。是臨床常用的治療精神憂郁藥物，應(yīng)用非常廣泛。佳樂靜液由阿普唑侖、甘草、小麥、大棗等藥物組成，主要用于治療精神憂郁，也用于養(yǎng)心、健腦、安神、易驚失眠、煩躁不安。原標準僅對佳樂靜液處方中做了鑒別、檢查等常規(guī)項目，而處方中主藥阿普唑侖卻沒有含量控制標準，顯然不能有效的控制藥品的質(zhì)量和療效。本課題采用高效液相色譜法、紫外分光光度法等現(xiàn)代分析手段，對佳樂靜液中的阿普唑侖含量測定方法進行研究，本方法科學(xué)、方便，為藥品質(zhì)量標準的修訂提供了科學(xué)依據(jù)。

1 實驗

1.1 實驗儀器與試藥 P680A LPG-4型高效液相色譜儀(美國戴安公司)，四元梯度泵;色譜柱:KromasiL C18(250 mm×4.6 mm，5μm);TU-1800 spc型紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);BS21S型電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司);乙腈與甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀為分析純，阿普唑侖對照品(1218-9702)購于中國藥品生物制品檢定所;佳樂靜液(濟寧市精神病防治院制劑批號:Z0820030114;Z0820030320;Z0820031060)。

圖1 空白溶液

圖2 對照品

圖3 樣品

1.2 實驗條件

1.2.1 阿普唑侖紫外檢測波長的選擇［1］:取阿普唑侖對照品適量，用流動相溶解，配制阿普唑侖對照品的標準溶液4 μg/ml，在200 nm～350 nm的波長范圍內(nèi)測定。在220 nm處有最大吸收，所以選擇220 nm為阿普唑侖檢測波長。

1.2.2 流動相的選擇 根據(jù)阿普唑侖的化學(xué)性質(zhì)，按磷酸鹽緩沖溶液-乙腈-甲醇(65:35:5)的比例進行測定［1］。

1.2.3 阿普唑侖對照品溶液的制備 精密稱取阿普唑侖對照品(1218-9702)0.01564 g，置于100 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，從中精密量取1 ml置于100 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，得對照品溶液。

1.2.4 供試品溶液的制備 精密量取佳樂靜液15 ml，置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上層清夜，將合并液水浴蒸干，用流動相將其溶解到10 ml容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜將其過濾，取續(xù)濾液進樣。

1.2.5 空白干擾實驗 精密量取不含阿普唑侖而含佳樂靜液中其他成分的空白溶液15 ml，按供試品溶液的制備方法操作取續(xù)濾液進樣。見圖1、圖2、圖3。

1.2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取阿普唑侖對照品(1218-9702)0.01553 g，置于100 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度。分別精密量取阿普唑侖對照品貯備溶液3.0 ml、5.0 ml、6.5 ml、8.0 ml、10 ml置 50 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μl。

以阿普唑侖濃度為橫坐標、以峰面積為縱坐標作圖，阿普唑侖線性回歸方程為:Y=-37830.2+162660.8X，r=0.9999(n=5);阿普唑侖進樣量在9.318～31.06μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.2.7 精密度實驗 取1.2.4項下的續(xù)濾液連續(xù)進樣5次，進樣 20 μl，阿普唑侖 RSD(%)=0.38。

1.2.8 重復(fù)性實驗 精密量取佳樂靜液15 ml 5份，置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上層清夜，將合并液水浴蒸干，用流動相將其溶解到10 ml容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜將其過濾，各取續(xù)濾液進樣，進樣20 μl，阿普唑侖RSD(%)=1.38。

1.2.9 穩(wěn)定性實驗 取2.3.1項下的續(xù)濾液作為供試品溶液，分別于0，1，2，3，6，12，24 h，進樣20 μl，測得峰面積值，計算得阿普唑侖的RSD(%)=0.85。

1.2.10 回收實驗 阿普唑侖回收率測定:精密量取不含阿普唑侖而含佳樂靜液中其他成分的空白溶液15 ml 9份，置于分液漏斗中，精密加入2.4.1項下阿普唑侖對照品貯備溶液 0.8 ml、1 ml、1.2 ml各 3 份，再用乙醚提取 5 次各 20 ml，取上層清夜，合并，水浴蒸干，用流動相溶解到10 ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。進樣20 μl，結(jié)果見表1。

表1 阿普唑侖的回收率測定結(jié)果

2 樣品含量測定

精密量取佳樂靜液15 ml置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上層清夜，水浴蒸干，置于10 ml容量瓶中，用流動相溶解，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，進樣20 μl。同法制備不含阿普唑侖而含佳樂靜液中其他成分的空白溶液進樣20ul。精密量取1.2.5項下阿普唑侖對照品貯備溶液1 ml置于10 ml容量瓶中，用流動相稀釋，搖勻，進樣20ul。樣品含量測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(例，%)

3 結(jié)果討論

3.1 佳樂靜液為中藥，由于中藥成分復(fù)雜，不能直接進樣，須選擇溶劑進行提取。佳樂靜液藥物提取過程中選擇乙醚作提取溶劑提取阿普唑侖，比用氯仿的提取效果好，并且乙醚比氯仿易揮發(fā)，對人體的危害程度小，操作簡單。在操作過程中比較得出結(jié)論，選擇乙醚作提取溶劑提取阿普唑侖是最佳選擇。

3.2 佳樂靜液中阿普唑侖的提取有一定的難度，經(jīng)過多次的嘗試和比較，得出結(jié)論要用乙醚提取5次才能把阿普唑侖從口服液中完全提取出來，其含量測定才能達到要求。

3.3 根據(jù)阿普唑侖的化學(xué)性質(zhì)，采用磷酸鹽緩沖液:乙腈:甲醇(65:35:5)的比例進行采集高效液相圖譜得到的分離度、理論塔板數(shù)均符合要求［1］。

3.4 本課題制定的高效液相色譜法測定佳樂靜液中阿普唑侖含量的方法，專屬性強，重現(xiàn)性高，回收率高，適于作為質(zhì)量控制標準推廣應(yīng)用。

3.5 通過對3個批號的佳樂靜液中阿普唑侖含量的測定，我們發(fā)現(xiàn)藥物中阿普唑侖含量均符合要求，但由于阿普唑侖的毒副作用比較大，有較強鎮(zhèn)靜催眠作用。因此，有必要在佳樂靜液質(zhì)量標準中加入阿普唑侖含量的測定項目，以確保藥品監(jiān)督管理部門更全面的監(jiān)管佳樂靜液的藥品內(nèi)在質(zhì)量，進而更有力的保障廣大人民群眾的用藥安全、有效。

［1］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典.二部.2005年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

Objective To establish a Determination of in Alprazolam Jiale hydrostatic.MethodsDetermination of Jiale hydrostatic in the content of Alprazolam，18 alkyl silane bonded silica filler for the mobile phase for PBS:acetonitrile:methanol(65:35:5);velocity:1 ml/min;sampling:20 μl;Alprazolam detection wavelength:220 nm.Samples outside the standard method of calculating the content of Alprazolam.Resultsalprazolam concentration in the 9.318 ～31.06 μg/ml and the peak area within the framework of a good linear relationship，r=0.9999(n=5).Alprazolam precision RSD(%)=0.98;repetitive RSD(%)=0.28;stability RSD(%)=0.85.Samples of the average recovery was 100.0percent，RSD(%)=0.34.Three batches of samples of the average of 97.18 percent，respectively，97.73 percent，98.60 percent.ConclusionThe method is simple，rapid，sensitive and accurate，and was satisfied with the results of，you can use.

RP-HPLC;Alprazolam;Jialejing hydrostatic

272100 濟寧市藥品檢驗所(周慧);山東省安康醫(yī)院(高劍鋒)