陳 棟 張 艷李 明 尹注增 陳 剛 張偉杰 陳 實(shí) (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院器官移植研究所 教育部/衛(wèi)生部器官移植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢430030)

·移植免疫學(xué)·

短發(fā)夾狀RNA基因沉默補(bǔ)體受體C5aR及抑制LPS誘導(dǎo)的腎臟上皮細(xì)胞凋亡①

陳 棟 張 艷②③李 明 尹注增 陳 剛 張偉杰 陳 實(shí) (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院器官移植研究所 教育部/衛(wèi)生部器官移植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢430030)

目的:探討短發(fā)夾狀RNA基因沉默補(bǔ)體受體C5aR及抑制LPS誘導(dǎo)的腎臟上皮細(xì)胞凋亡的作用效果。方法:構(gòu)建針對(duì)大鼠補(bǔ)體受體C5aR基因編碼區(qū)的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)真核表達(dá)載體質(zhì)粒pRNAT-U6.1-C5aR shRNA,采用電穿孔的方法轉(zhuǎn)染RK3E細(xì)胞,經(jīng)G418篩選后,形成穩(wěn)定的表達(dá)C5aR shRNA的細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)分為3組,①正常對(duì)照組:未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞;②陰性對(duì)照組:轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞系;③實(shí)驗(yàn)組:轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞系。經(jīng)脂多糖(LPS)孵育12小時(shí)后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,RT-PCR檢測(cè)mRNA的表達(dá),γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定125I標(biāo)記的C5a與RK3E的結(jié)合情況。結(jié)果:與正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.01),C5aR mRNA水平顯著降低(P< 0.01),125I標(biāo)記的C5a與RK3E結(jié)合活性顯著下降。結(jié)論:針對(duì)C5aR的特異性短發(fā)夾RNA可以明顯引起靶基因的沉默,進(jìn)而抑制LPS誘導(dǎo)的腎臟上皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

RNA干擾;C5aR;基因沉默;凋亡

腎臟上皮細(xì)胞凋亡是急性腎功能衰竭等病理生理過(guò)程的重要機(jī)制之一,細(xì)胞凋亡的發(fā)生與補(bǔ)體系統(tǒng)的激活有關(guān),其中C5aR是補(bǔ)體系統(tǒng)的重要組成部分,表達(dá)于腎臟上皮細(xì)胞表面,參與補(bǔ)體系統(tǒng)的激活并介導(dǎo)靶細(xì)胞的凋亡[1]。RNA干擾(RNAi)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種高效、特異性阻斷mRNA表達(dá)而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象,從而不能表達(dá)相應(yīng)的特異性蛋白質(zhì),最終影響其生物學(xué)功能。這一干擾過(guò)程是由與目的基因有序列同源性的雙鏈RNA引起的。在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)21～23核苷酸(nt)的雙鏈RNA介導(dǎo)的RNAi現(xiàn)象,開(kāi)啟了應(yīng)用siRNA(Small interfering RNA)的治療應(yīng)用之門(mén)[2,3]。在本研究中,我們構(gòu)建了針對(duì)大鼠C5aR特異性的發(fā)卡結(jié)構(gòu)的RNAi質(zhì)粒表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染大鼠腎臟上皮細(xì)胞RK3E,建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,研究其基因沉默及抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用效果,為進(jìn)一步研究如何減輕急性腎功能衰竭等病理過(guò)程奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 RNAi表達(dá)載體 pRNAT-U6.1/Neo siRNA表達(dá)載體購(gòu)自美國(guó)Genescript公司。

1.1.2 細(xì)胞系 大鼠腎臟上皮細(xì)胞RK3E細(xì)胞由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院器官移植研究所保存。

1.1.3 試劑 DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自Sigma公司,胎牛血清購(gòu)自Sigma公司,LB培養(yǎng)基為Promega公司產(chǎn)品,Trizol試劑購(gòu)自Stratagene公司,C5aR的擴(kuò)增引物由Invitrogen公司合成。

1.2 方法

1.2.1 C5aR基因shRNA的設(shè)計(jì)及載體構(gòu)建 選用pRNAT-U6.1/Neo siRNA表達(dá)載體作為空載體,其攜帶有cGFP和U6的啟動(dòng)子,可以表達(dá)形成shRNA。根據(jù)GenBank提供的大鼠C5aR基因序列,使用美國(guó)Ambion公司在線設(shè)計(jì)軟件,通過(guò)基因序列比對(duì),挑選出一條長(zhǎng)為21個(gè)堿基的特異性寡核苷酸序列(5′-TG AAACTCTTGCTGTCCCTGC-3′),合成C5aR基因的發(fā)夾樣兩端配對(duì)的 siRNA寡核苷酸(Small hairpin RNA)(5′-G ATCCCGTG AAACTCTTGC TGTCCCTGCTTG ATATCCGGCAGGG ACAGCAAG AGTTTCATTTTTTCCAA A-3′),同時(shí)合成互補(bǔ)鏈5′-AGCTTTTGG AAAAAATG A AACTCTTGCTGTCCCTGCTCTCTTG AAGCAGGG ACAGC AAG AGTTTCACGG-3′),shRNA的寡核苷酸序列包括靶序列的正義鏈、反義鏈和環(huán)形區(qū)域。經(jīng)退火形成互補(bǔ)雙鏈,用于連接pRNAT-U6.1載體。

HindⅢ和BamHⅠ雙酶切RNAT-U6.1空載體成線性,T4連接酶將攜帶有C5aR特異性的RNAi核苷酸序列的互補(bǔ)雙鏈連接進(jìn)入表達(dá)載體,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,挑取單克隆菌落,小量擴(kuò)增,收集菌液,使用DNA小量提取試劑盒提取質(zhì)粒,經(jīng)測(cè)序正確后,采用氯化銫離心法大量提取質(zhì)粒。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠RK3E細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在5%CO2、37℃下培養(yǎng)傳代,接種于75 cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 采用電穿孔的方法進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。收集RK3E細(xì)胞,2×106個(gè)細(xì)胞混合40μg的shRNA,在170 V,25 ms的條件下,應(yīng)用Bio-Rad電穿孔儀進(jìn)行電穿孔,熒光顯微鏡下可見(jiàn)轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞呈綠色熒光,經(jīng)過(guò)G418篩選,形成穩(wěn)定的攜帶C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞系。

1.2.4 脂多糖(LPS)誘導(dǎo)RK3E細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)分為3組:(1)正常對(duì)照組:為正常的RK3E細(xì)胞;(2)陰性對(duì)照組:轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞系;(3)實(shí)驗(yàn)組:轉(zhuǎn)染 C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞。

分別將上述3組細(xì)胞接種于六孔板中。分別加入LPS 100 ng/ml誘導(dǎo)RK3E細(xì)胞凋亡。LPS孵育12小時(shí)后收集細(xì)胞,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106ml-1,70%冷乙醇固定,-20℃過(guò)夜。檢測(cè)前PBS洗滌1次,加入含RNA酶(終濃度為0.25 mg/ml)的碘化丙啶(終濃度為50μg/ml)染色液,室溫孵育30分鐘,用流式細(xì)胞儀(美國(guó)FACSort-BD公司產(chǎn)品,使用CellQuest軟件)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.2.5 半定量RT-PCR檢測(cè)RK3E細(xì)胞C5aR的表達(dá) 經(jīng)LPS刺激后,收集上述3組細(xì)胞,用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA,用3μg RNA合成cDNA。PCR條件:95℃5分鐘,94℃30秒,58℃30秒,72℃30秒,30個(gè)循環(huán),72℃延伸10分鐘。C5aR引物:上游引物為5′-GG ACCCCATAAGTAACG ACAGC-3′,下游引物為5′-CCACACCACCAGGGCATTTC-3′;內(nèi)參照磷酸甘油醛脫氫酶(G APDH)引物:上游引物為5′-TG ATG ACATCAAG AAGGTGGTG AA-3′,下游引物為5′-TCCTTGG AGGCCATGTAGGCCAT-3′,PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳分析。使用Chemilmager 5500軟件進(jìn)行圖像分析,測(cè)出擴(kuò)增產(chǎn)物條帶的吸光度(A)值,并與同一樣本G APDH的A值進(jìn)行比值定量分析,以此比值表示C5aR mRNA的相對(duì)含量。

1.2.6125I-rrC5a與RK3E的結(jié)合試驗(yàn) 上述3組細(xì)胞接種于六孔板,并置于0℃冰上,用2 ml Hanks液孵育0.5小時(shí),PBS液洗滌2次后,RK3E細(xì)胞與125I標(biāo)記的重組大鼠C5a(rrC5a)的PBS緩沖液(0.1%的胎牛血清)孵育20分鐘,隨后用PBS液洗滌4次后, 1%SDS裂解RK3E細(xì)胞,0.1%乙基苯基聚乙二醇洗滌后,采用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定125I標(biāo)記的C5a與RK3E的結(jié)合情況,數(shù)值用cpm值表示。

2 結(jié)果

2.1 成功構(gòu)建針對(duì)大鼠C5aR的shRNA表達(dá)載體pRNAT-U6.1-C5aR shRNA HindⅢ和BamHⅠ雙酶切pRNAT-U6.1空載體成線性,T4連接酶將攜帶有C5aR特異性的RNAi核苷酸序列的互補(bǔ)雙鏈連接進(jìn)入表達(dá)載體,經(jīng)測(cè)序鑒定,證明我們?cè)O(shè)計(jì)的寡核苷酸序列已經(jīng)成功退火,并連接至pRNAT-U6.1。

2.2 C5aR shRNA轉(zhuǎn)染的RK3E穩(wěn)定細(xì)胞系 電穿孔的方法將C5aR shRNA轉(zhuǎn)染 RK3E細(xì)胞,由于pRNAT-U6.1攜帶有cGFP基因,可以表達(dá)綠色熒光蛋白,因此,轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞顯示綠色熒光,經(jīng)G418篩選,形成穩(wěn)定表達(dá)C5aR shRNA的細(xì)胞系,該細(xì)胞系在熒光顯微鏡下可見(jiàn)遍布視野的綠色熒光,而未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞無(wú)綠色熒光,只見(jiàn)黑色背景視野(見(jiàn)圖1和圖2)。

2.3 LPS誘導(dǎo)的RK3E細(xì)胞凋亡率 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,在LPS的刺激12小時(shí)后,轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞凋亡率為24.81%±2.87%,而未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞凋亡率分別為 78.32%±3.62%和76.46%±5.54%,與未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E的細(xì)胞凋亡率顯著下降,差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖3。

圖1 未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞Fig.1 Untransfected RK3E cells

圖2 C5aR shRNA轉(zhuǎn)染RK3E細(xì)胞Fig.2 C5aR shRNA transfected RK3E cells

2.4 C5aR mRNA水平的表達(dá) LPS刺激12小時(shí)后,收集3組細(xì)胞,進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)mRNA水平的表達(dá),結(jié)果顯示:經(jīng)LPS刺激后,轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞的mRNA相對(duì)含量為26.11%±3.16%,而未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞中mRNA相對(duì)含量為98.74%±2.27%和105.21%±2.57%。與未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的 RK3E細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞mRNA表達(dá)水平顯著降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖4A、B。

2.5 各組RK3E細(xì)胞125I-rrC5a的結(jié)合活性 LPS刺激的條件下測(cè)定各組RK3E細(xì)胞中C5a的結(jié)合活性,結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,經(jīng)LPS刺激后,125I-rrC5a與轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞的結(jié)合活性顯著降低(P<0.05),見(jiàn)圖5。

圖3 LPS刺激后RK3E細(xì)胞凋亡率Fig.3 Apoptosis rate of RK3Eafter LPS stimulated

圖4 LPS刺激12小時(shí)后,RT-PCR檢測(cè)各組C5aR mRNA的表達(dá)(A,B)Fig.4 12 h after LPS stimulated,C5aR mRNA was detected by RT-PCR in different group(A,B)

圖5 LPS刺激條件下125I-rrC5a與RK3E細(xì)胞的結(jié)合活性Fig.5 Binding of125I-rrC5a to RK3E stimulated with LPS

3 討論

補(bǔ)體活化參與缺血再灌注損傷等眾多病理生理過(guò)程,是關(guān)聯(lián)先天免疫和獲得性免疫的重要紐帶。腎臟上皮細(xì)胞表達(dá)眾多的補(bǔ)體受體C5aR,在腎臟上皮細(xì)胞的損傷和細(xì)胞凋亡的執(zhí)行過(guò)程中起關(guān)鍵作用[1,4,5]。因此,本研究中我們?cè)O(shè)計(jì)了針對(duì)大鼠補(bǔ)體受體C5aR作為抑制細(xì)胞凋亡的靶位點(diǎn),進(jìn)而探討通過(guò)短發(fā)夾狀RNA基因沉默C5aR及抑制LPS誘導(dǎo)的腎臟上皮細(xì)胞的凋亡的作用。

在多種生物體細(xì)胞中,外源或內(nèi)源性雙鏈RNA (Double-stranded RNA,dsRNA)可觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)同源mRNA的特異性降解,從而使該基因表達(dá)沉默,這種現(xiàn)象稱(chēng)為RNA干擾(RNA interference,RNAi)。RNAi屬于轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機(jī)制,具有高度的序列特異性和抑制基因表達(dá)的高效性[6,7]。在本研究中我們根據(jù)大鼠C5aR的基因序列,設(shè)計(jì)發(fā)夾樣兩端配對(duì)的shRNA寡核苷酸,并連接到真核表達(dá)載體pRNAT-U6.1,構(gòu)建形成發(fā)夾狀siRNA的質(zhì)粒(shRNA)表達(dá)載體。然后進(jìn)行電穿孔的方法轉(zhuǎn)染腎臟上皮細(xì)胞RK3E,經(jīng)G418篩選后得到穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,在熒光顯微鏡下可見(jiàn)遍布視野的綠色熒光,而未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞只見(jiàn)黑色背景。該試驗(yàn)表明,采用shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞,就可以持續(xù)的轉(zhuǎn)錄出shRNA,通過(guò)篩選形成穩(wěn)定表達(dá)shRNA的細(xì)胞系,便于進(jìn)一步研究基因沉默的作用效果。與siRNA介導(dǎo)的 RNAi作用相比,shRNA介導(dǎo)的RNAi作用能更長(zhǎng)期,甚至穩(wěn)定地抑制目的基因的表達(dá),更適合于對(duì)目的基因功能進(jìn)行長(zhǎng)期研究。

在腎臟C5aR主要表達(dá)在腎臟系膜細(xì)胞和近曲小管上皮細(xì)胞,遠(yuǎn)曲小管和輸尿管、膀胱的移行上皮細(xì)胞也均有C5aR的表達(dá)。C5aR可能參與了腎臟上皮細(xì)胞多種細(xì)胞因子和補(bǔ)體成分的產(chǎn)生,誘導(dǎo)單核細(xì)胞釋放TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8等細(xì)胞因子。在血液循環(huán)中較低的C5a濃度就可以誘導(dǎo)粒細(xì)胞應(yīng)答,而如果組織表達(dá)C5aR,則通過(guò)與C5a的結(jié)合,使組織局部的C5a濃度比血液循環(huán)要高很多,更有利于粒細(xì)胞向炎癥部位聚集,而且還可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)P選擇素,后者促進(jìn)粒細(xì)胞粘附到血管壁,加速炎癥反應(yīng)[8,9]。給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射脂多糖可以引起腎臟、肺和肝的C5aR mRNA的表達(dá)增多,同時(shí)C5aR的表達(dá)也上調(diào),說(shuō)明其可能在組織炎癥反應(yīng)中扮演重要角色。本實(shí)驗(yàn)中觀察到,經(jīng)LPS刺激12小時(shí)后,在未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞、轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞均出現(xiàn)C5aR mRNA及蛋白的表達(dá),進(jìn)而誘導(dǎo)腎臟上皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。而與未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體的RK3E細(xì)胞相比,C5aR shRNA轉(zhuǎn)染RK3E細(xì)胞細(xì)胞凋亡率明顯下降,C5aR mRNA水平和蛋白活性顯著降低,該研究表明,一方面,LPS可以誘導(dǎo)腎臟上皮細(xì)胞RK3E出現(xiàn)凋亡,該細(xì)胞凋亡的發(fā)生與C5aR的表達(dá)增高有關(guān),在試驗(yàn)中C5aR mRNA水平和蛋白均顯著升高。另一方面,C5aR shRNA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RK3E細(xì)胞凋亡起到抑制作用,其主要機(jī)制是沉默RK3E細(xì)胞中的C5aR基因,試驗(yàn)中C5aR mRNA水平較未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體的RK3E細(xì)胞顯著降低,說(shuō)明了C5aR的基因沉默作用,C5aR基因沉默從而發(fā)揮抑制凋亡的作用。另外,我們?cè)贚PS的刺激性,測(cè)定了125I-rrC5a與未轉(zhuǎn)染的RK3E細(xì)胞、轉(zhuǎn)染空載體pRNAT-U6.1的RK3E細(xì)胞和轉(zhuǎn)染C5aR shRNA的RK3E細(xì)胞的結(jié)合活性,發(fā)現(xiàn)經(jīng)C5aR shRNA處理的RK3E細(xì)胞其結(jié)合活性顯著減低,提示經(jīng)RNA干擾處理的RK3E細(xì)胞表達(dá)C5aR顯著降低,進(jìn)一步證實(shí)了采用RNA干擾技術(shù)可以有效的沉默腎臟上皮細(xì)胞表達(dá)C5aR。因此,我們?cè)O(shè)想,采用針對(duì)C5aR的shRNA來(lái)干預(yù)細(xì)胞凋亡過(guò)程,可以作為抑制腎臟缺血再灌注損傷等病理生理過(guò)程的一條有效途徑,并有可能為研制含有siRNA的藥物來(lái)抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生提供了思路[8,9]。

本文研究表明,通過(guò)攜帶C5aR的shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體pRNAT-U6.1轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞是可行的,經(jīng)過(guò)篩選可以形成穩(wěn)定的表達(dá)C5aR shRNA的細(xì)胞系,形成持續(xù)shRNA表達(dá),C5aR shRNA可以顯著抑制靶基因達(dá)到基因沉默的效應(yīng)。LPS的刺激下, C5aR基因沉默可以明顯抑制腎臟上皮細(xì)胞的凋亡,該試驗(yàn)為進(jìn)一步研究抑制補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)性作用等奠定條件。

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[收稿2009-10-11]

(編輯 張曉舟)

Small hairpin RNA targeting rat C5aRcan inhibit the cell apoptosis induced by LPS in kidney epithelial cells

CHEN Dong,ZHANG Yan,LI Ming,YIN Zhu-Zeng,CHEN Gang,ZHANG Wei-Jie,CHEN Shi.Institute of Organ
Transplantation,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China

Objective:T o investigate RNA interference and apoptosis induced byLPS in kidney epithelial cells through silencing C5aR gene with small hairpin RNA(shRNA).Methods:We construct the eukaryotic expression vector of small hairpin RNA targeting rat C5aR gene, and transfected RK3E cell by electroporation,after G418 selection,so we got the stable cell line expressing C5aR shRNA.The experiment was designed into 3 groups:①normal control group,RK3E cells without transfection;②negative control group,RK3E cells transfected with blank vector;③experimental group,RK3E cells transfected with C5aR shRNA.After incubation withLPSfor 12 h,the ratio of apoptosiswas tested by flow cytometry,the level of mRNA was tested by RT-PCR,and bindingof125I-rrC5a to RK3E cells stimulated withLPSwere performed to examine the expression of C5aR in RK3E cells.Results:Compared with the normal control group and negative control group,in the experimental group the ratio of apoptosis was significantly decreased(P<0.01),and the expression of C5aR mRNA was significantly inhibited(P<0.01), and binding of125I-rrC5a to RK3E cells was significantly decreased also.Conclusion:Hairpin shRNA targeting C5aR gene can lead to obvious gene silence in vitro and inhibit the cell apoptosis induced by LPS in kidney epithelial cell.

RNA interference;C5aR;Gene silence;Apoptosis

R392.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1000-484X(2010)02-0151-04

①本文為教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目和國(guó)家自然科學(xué)基金(30600573)資助項(xiàng)目

②華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院綜合醫(yī)療科,武漢430030

③通訊作者,E-mail:yzhang1977@yahoo.com.cn

陳 棟(1973年-),男,醫(yī)學(xué)博士,主要從事器官移植臨床及移植免疫方面的研究,E-mail:dchen0369@yahoo.com.cn。