霍清萍,梁 芳,孔 林,王宇新,李金菩

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是指脂質(zhì)通過(guò)受損的內(nèi)膜進(jìn)入內(nèi)膜下并能夠沉積,同時(shí)伴有平滑肌細(xì)胞(SMC)及纖維成分增生,逐漸發(fā)展形成局限性的斑塊,動(dòng)脈壁因而增厚、變硬,斑塊內(nèi)部組織壞死崩解與沉積的脂質(zhì)結(jié)合形成粥樣物質(zhì),是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一。近年來(lái),隨著動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)研究的不斷深入,越來(lái)越多的證據(jù)表明,炎癥貫穿于AS病變發(fā)生、發(fā)展的始終。CRP不僅是反映炎癥活動(dòng)程度的一個(gè)炎癥指標(biāo),還是預(yù)示動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子。纖維蛋白原不僅反映血液的高凝狀態(tài),同時(shí)亦是AS活動(dòng)性的標(biāo)志。細(xì)胞因子CRP可上調(diào)纖維蛋白原(FIB)的合成。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)喂飼高脂飼料的方法,建立兔AS模型,觀察穩(wěn)消顆粒對(duì)AS血清CRP、FIB水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 36只體重2.2 kg～2.5 kg健康新西蘭大白兔,月齡3個(gè)月～4個(gè)月,雌雄不限,購(gòu)自上海市中科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,飼養(yǎng)條件為2級(jí),室溫保持在22℃～24℃,相對(duì)濕度50%,光照時(shí)間7:00～17:00。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 穩(wěn)消顆粒為免煎顆粒,由江陰天江藥業(yè)有限公司代為生產(chǎn)。水蛭、丹參、赤芍、半夏、石菖蒲、膽南星、丹皮、黃芩,各藥按2∶2.5∶2.5∶1.5∶1.5∶1.5∶2.5∶1比例混合,批號(hào):20070810。辛伐他汀:商品名舒降之,默沙東公司出品,批號(hào):20070114。根據(jù)臨床用藥劑量,按人與動(dòng)物體重比例折算,折合實(shí)驗(yàn)兔用量:水蛭660 mg/kg;丹參、丹皮、赤芍各825 mg/kg;石菖蒲、膽南星、半夏各495 mg/kg,黃芩330 mg/kg,辛伐他汀1.1 mg/kg,以上藥物以蒸餾水溶解,混勻后灌胃。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 C-反應(yīng)蛋白試劑盒:美國(guó)DARE BEHRING公司;凝血全套試劑盒:日本Sysmex公司。

1.4 分組及給藥方法 將 36只大白兔隨機(jī)分為空白組(9只)、造模組(27只)?？瞻捉M給予150 g/d的標(biāo)準(zhǔn)飼料,造模組高脂飲食喂養(yǎng)8周,高脂飲食100 g/d,余由標(biāo)準(zhǔn)飼料補(bǔ)足,均自由飲水。高脂飼料喂養(yǎng)8周后,在造模組任取1只兔子,處死,于腹主動(dòng)脈至髂總動(dòng)脈分叉處(以左右髂動(dòng)脈分叉為參照),向上留取2 cm標(biāo)本,作石蠟切片,光鏡下觀察造模情況,確立造模成功。再將造模組隨機(jī)分為穩(wěn)消顆粒組、辛伐他汀組、模型對(duì)照組;穩(wěn)消顆粒組、辛伐他汀組分別給予穩(wěn)消顆粒、辛伐他汀干預(yù);模型對(duì)照組、空白組均給予等體積蒸餾水灌胃;各組均標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng),灌胃每日1次,均自由飲水,連續(xù)8周。試驗(yàn)結(jié)束。取材前夜禁食,經(jīng)兔耳緣靜脈采血,離心分離血清,-40℃凍存,用作測(cè)定CRP、FIB。

1.5 檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法 HE染色結(jié)果為:藍(lán)色為細(xì)胞核,紅色為細(xì)胞間質(zhì)。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定CRP;采用凝固比濁法測(cè)定FIB。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)模型對(duì)照組動(dòng)脈硬化斑塊的觀察 高脂飲食喂養(yǎng)8周后,大體觀察兔腹主動(dòng)脈均有不同程度的AS改變。HE染色顯示實(shí)驗(yàn)兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)彌漫性、融合成片的黃色斑塊。

2.2 各組血清CRP、FIB檢測(cè)結(jié)果 與空白組比較,模型對(duì)照組、用藥組CRP與FIB水平均有不同程度的提高(P＜0.05)。穩(wěn)消顆粒組、辛伐他汀組CRP與FIB與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),但穩(wěn)消顆粒組、辛伐他汀組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 各組血清CRP、FIB檢測(cè)結(jié)果( ±s)

表1 各組血清CRP、FIB檢測(cè)結(jié)果( ±s)

項(xiàng)目 組別 n 實(shí)驗(yàn)前 造模后 治療后CRP 空白組 8 0.15±0.08 0.14±0.09 0.18±0.072)(mg/L) 穩(wěn)消顆粒組 7 0.14±0.07 4.45±0.65 2.15±0.531)2)辛伐他汀組 7 0.13±0.06 4.48±0.72 2.16±0.511)2)模型對(duì)照組 8 0.12±0.11 4.46±0.84 4.49±0.891)FIB 空白組 8 1.49±0.15 1.52±0.20 1.54±0.262)(g/L) 穩(wěn)消顆粒組 7 1.50±0.16 4.11±0.36 2.31±0.301)2)辛伐他汀組 7 1.48±0.14 4.12±0.41 2.54±0.611)2)模型對(duì)照組 8 1.51±0.17 4.13±0.38 4.14±0.401)與空白組比較,1)P＜0.05;與模型對(duì)照組比較,2)P＜0.05

3 討 論

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)[1]CRP是一個(gè)非特異性炎性標(biāo)記物,炎癥、感染、和組織損傷時(shí)均可使其濃度增高,取決于炎癥刺激的程度。有研究表明[2,3]CRP是AS發(fā)生和發(fā)展中最具有標(biāo)志性的,也是最具有敏感性的指標(biāo)。大量研究顯示[4,5],CRP不僅是反映炎癥活動(dòng)程度的一個(gè)炎癥指標(biāo),還是預(yù)示動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子。Paul等[6]的研究為CRP即直接參與動(dòng)脈粥樣硬化的理論提供了直接的證據(jù),他們的研究證實(shí)以敲除ApoE為背景的CRP轉(zhuǎn)基因大鼠,由于CRP過(guò)表達(dá),主動(dòng)脈粥樣硬化病變加速。

FIB是目前為止知道的最為復(fù)雜的蛋白質(zhì),其分子組成不均一,正常血漿中的含量為2 g～4 g,半衰期為 3 d～4 d。FIB增高時(shí),特別是其活性增強(qiáng)時(shí)能直接提高血漿黏度。而血漿黏度增高時(shí)又影響全血黏度,另外高纖維蛋白原的分子鏈結(jié)構(gòu)也可使紅細(xì)胞發(fā)生緡錢狀聚集,從而也使血黏度增高。血漿纖維蛋白原濃度直接或間接導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化程度,動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎性疾病,從動(dòng)脈硬化斑塊生長(zhǎng)、破裂構(gòu)成其全部病理基礎(chǔ)。斑塊破裂使其粥樣硬化核心接觸動(dòng)脈血而形成血栓。

中醫(yī)學(xué)治療動(dòng)脈粥樣硬化歷史悠久。認(rèn)為本病與體虛、年老、勞累、情緒、飲食、氣滯、瘀血、痰濁、寒侵等因素有關(guān)。 病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)。氣虛(或陰虛)為本,血瘀、痰濁、寒凝、氣滯為標(biāo),臨證多虛實(shí)夾雜?！把鎏禎帷敝C(jī)貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的整個(gè)過(guò)程。長(zhǎng)期以來(lái)治療多圍繞活血化瘀、化痰通絡(luò)、補(bǔ)虛而變化應(yīng)用,活血化瘀為其治療大法。但在長(zhǎng)期實(shí)踐中我們體會(huì),本病患者非但痰濕瘀滯,且蘊(yùn)而化熱者也頗多見。痰濕瘀滯內(nèi)結(jié),血脈艱澀;瘀滯越久,蘊(yùn)熱愈盛?！盁狃龌ソY(jié),痰濁蘊(yùn)聚”當(dāng)是本病的中醫(yī)學(xué)的基本病機(jī)之一;并以此擬定具有活血通絡(luò),溫化痰濁,清熱化瘀的穩(wěn)消顆粒,在緩解臨床癥狀、控制病情等方面均收到了較好的效果。近年來(lái),我們對(duì)穩(wěn)消顆粒的作用環(huán)節(jié)與藥用機(jī)制進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)消顆?？梢种茊魏思?xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的表達(dá),益于 AS斑塊防治與穩(wěn)定[7]。本次研究也發(fā)現(xiàn),穩(wěn)消顆粒組與辛伐他汀組的CRP和FIB水平均分別明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.05),盡管兩組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。穩(wěn)消顆粒可抑制CRP表達(dá),降低FIB水平。再次顯示利于穩(wěn)消顆粒益于AS斑塊的穩(wěn)定,具體作用環(huán)節(jié)還待日后進(jìn)一步深入研究。

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