周曉兵 ，秦 燕 ，孫 艷 ，劉振權(quán) ，杜樹(shù)山 ，方 翼

(1.中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院，北京 100853; 2.北京師范大學(xué)資源學(xué)院·教育部資源藥物工程研究中心，北京 100875)

中藥治療癌性疼痛，具有使用安全、無(wú)成癮性、無(wú)毒副反應(yīng)和藥物作用維持時(shí)間較長(zhǎng)等特點(diǎn);中醫(yī)中藥治療因與病因病機(jī)相聯(lián)系、與辨證施治相結(jié)合，除能直接止痛外，還具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和抑制腫瘤細(xì)胞的作用[1]。天元克痛方由元胡、香附、天仙子等中藥組成，系解放軍總醫(yī)院著名老中醫(yī)總結(jié)幾十年臨床經(jīng)驗(yàn)而提出的治療疼痛的中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方[2]，具有溫經(jīng)活血、行氣止痛之功效。方中延胡索(元胡)為罌粟科植物延胡索 Corydalisyanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖，可行血中之氣滯、氣中之血滯，善治身體各部位疼痛?，F(xiàn)代臨床藥理研究表明，延胡索的主要有效成分延胡索乙素對(duì)慢性持續(xù)性疼痛止痛效果較好，并有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，無(wú)成癮性等不良反應(yīng)，為一種非麻醉性鎮(zhèn)痛成分，且不屬于解熱消炎鎮(zhèn)痛藥范疇。臨床實(shí)踐證明，該方鎮(zhèn)痛作用顯著，用于癌癥疼痛的止痛作用尤為明顯。為了使天元克痛方更好地應(yīng)用于臨床，筆者以出膏量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)進(jìn)行了提取工藝優(yōu)選，并對(duì)其鎮(zhèn)痛作用作了初步研究。

1 提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 材料與試藥

各藥材均購(gòu)自北京同仁堂藥店;甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

因素水平選擇:根據(jù)延胡索、天仙子、白芷等藥材所含成分的性質(zhì)，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，以出膏量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)L9(34)進(jìn)行試驗(yàn)，選定提取時(shí)間(因素A)、提取次數(shù)(因素B)、加水量(因素C)作為影響水煎煮的主因素[3]，水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

出膏量測(cè)定:按處方比例稱(chēng)取天仙子、延胡索、白芷等藥材共9份，每份投入85 g，加入水，按照正交試驗(yàn)表試驗(yàn)，得水提取液，濃縮至稠膏，轉(zhuǎn)移并加甲醇定容至100 mL量瓶?jī)?nèi)，搖勻，備用。取50 mL置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干溶劑，并減壓干燥成干膏，測(cè)定干膏量，計(jì)算出膏量。

正交試驗(yàn)結(jié)果:結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。由表2中 R值可知，各因素對(duì)提取工藝出膏量的影響大小分別為B＞C＞A;由表3可知，對(duì)提取工藝出膏量影響的各因素而言，因素B具有極顯著影響，因素C有顯著影響，因素A影響不顯著。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

表3 方差分析結(jié)果表

最佳提取工藝確定:根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，最佳提取工藝組合為B3C3A1，即加水煎煮3次，10倍量，提取1 h。

驗(yàn)證試驗(yàn):按優(yōu)選的提取工藝提取3批樣品，結(jié)果出膏率滿(mǎn)意。

2 對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用研究

2.1 動(dòng)物和試藥

動(dòng)物:昆明種小鼠，雌性，17～20g，清潔級(jí)，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(京)2002－0001。

受試藥物:天元克痛方，由北京師范大學(xué)資源藥物與中藥資源研究所藥劑室提供，人日用量生藥15 g/人。對(duì)提取結(jié)果進(jìn)行測(cè)定，均達(dá)到要求。

陽(yáng)性藥物:鹽酸曲馬多緩釋片(商品名奇曼丁，北京萌蒂制藥有限公司)，批準(zhǔn)文號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字 H19980214，批號(hào)為05080812，有效期為2007－07，人日用量1片/人(0.247 g/片，含鹽酸曲馬多100 mg)。

2.2 方法

分組:將小鼠隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、曲馬多組(陽(yáng)性藥對(duì)照組，16.67 mg/kg)，天元克痛方低劑量組(1.25 g/kg)、中劑量組(2.5 g/kg)、高劑量組(5 g/kg)。

建立模型:先將水浴槽加滿(mǎn)水，使水面接觸熱板，調(diào)節(jié)恒溫裝置使水溫控制在(55±0.5)℃，熱板預(yù)熱10 min。每次取1只小鼠放在熱板上，自小鼠放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間(s)為該鼠的痛閾值。凡舔后足時(shí)間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用。

痛閾值:重復(fù)測(cè)定其正常痛閾值，取兩次正常痛閾平均值作為給藥前痛閾值?？瞻讓?duì)照組、曲馬多組及天元克痛方低、中、高劑量組連續(xù)給藥5 d，每天分上下午兩次給藥，末次給藥前禁食10～12 h，不禁水。于末次給藥后30，60，90 min分別測(cè)定小鼠痛閾值。

2.3 結(jié)果

對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行組間單因素方差分析，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，1.25，2.5，5 g/kg的天元克痛方能不同程度地提高小鼠痛閾值，鎮(zhèn)痛作用的時(shí)間分布在給藥后30～90 min，以低劑量組鎮(zhèn)痛效果最優(yōu)、持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。

表4 天元克痛方對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(±s)

表4 天元克痛方對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(±s)

注:與空白對(duì)照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

組別 劑量(g/kg) n 潛伏期(s)空白對(duì)照組組曲馬多組天元克痛方低劑量組中劑量組高劑量組－0.017 1.25 2.5 5 13 14 14 13 10給藥前22.25 ± 5.19 23.36 ± 4.88 22.75 ± 3.99 22.25 ± 3.89 22.71 ± 4.25給藥30 min 19.31 ±5.74 24.21 ±5.99△26.71 ±8.27△24.23 ±4.87△25.00 ±7.23△給藥60 min 19.69 ± 4.80 26.79 ±6.09▲29.43 ±8.60▲27.38 ±7.95▲23.40 ± 7.63給藥90 min 19.31 ± 3.77 25.36 ±6.74▲26.50 ±6.53▲24.62 ±5.16▲19.20 ± 6.37

3 討論

藥物療法是疼痛治療最常用的方法。天元克痛方由元胡、香附、天仙子組成，方中天仙子、元胡為君藥，具有活血散瘀、理氣止痛之功效，善治身體各部位疼痛;香附為臣藥，具有理氣止痛之功效?，F(xiàn)代研究表明，元胡中主要含生物堿，其中延胡索乙素具有中樞鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛作用較強(qiáng);天仙子中含有氫溴酸東莨菪堿，對(duì)平滑肌疼痛可能有較好的作用。延胡索乙素含量測(cè)定可用雙波長(zhǎng)薄層掃描法及高效液相色譜法等。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，根據(jù)臨床的服用方式，采用水煎煮的方法就能夠?qū)⒀雍饕宜鼗咎崛〕鰜?lái)，且提取方法經(jīng)濟(jì)、方便、毒性小、對(duì)人體無(wú)損害，為天元克痛方提取工藝的優(yōu)選提供了參考依據(jù)。

對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用研究顯示，天元克痛方具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，可對(duì)緩解疼痛產(chǎn)生有益的治療效果[5]。受試藥高劑量組鎮(zhèn)痛效果不如中、低劑量組，可能是因?yàn)楦邉┝拷o藥使動(dòng)物產(chǎn)生了藥物耐受性，從而對(duì)藥效的敏感性下降。

[1]李達(dá)周.中醫(yī)藥治療癌性疼痛研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥，2000，31(2):55－56.

[2]方 冀，王 睿，徐 偉，等.HPLC法測(cè)定天元克痛方主要成分研究[J].藥物與臨床，2003，18(5，6):40 －42.

[3]曹春林，范順清.中藥藥劑學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986:172.

[4]景志杰，牛拴成，張軒萍，等.化痔靈片對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性疼痛的鎮(zhèn)痛作用[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，37(1):19－20.