謝冬梅，劉 斐

(1.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233004; 2.合肥遠(yuǎn)志醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)有限公司，安徽 合肥 230028)

鬼臼毒素屬木脂素類(lèi)化合物，主要存在于中藥小檗科多年生草本類(lèi)群鬼臼亞科八角蓮屬、桃兒七屬、山荷葉屬及足葉草屬植物中，是一種具抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物。鬼臼毒素能抑制正常皮膚的角朊細(xì)胞和宮頸癌細(xì)胞的分裂增殖，以及這些細(xì)胞對(duì)核苷酸的攝取和DNA的合成，臨床上常用其酊劑治療尖銳濕疣[1]。筆者用高效液相色譜法測(cè)定鬼臼毒素的含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP型高效液相色譜儀(日本島津)。鬼臼毒素酊(合肥遠(yuǎn)志醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)有限公司，批號(hào)分別為080517，080518，080519);鬼臼毒素酊(遼寧華衛(wèi)制藥股份有限公司，批號(hào)為20071207);鬼臼毒素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Shimpack VP-ODS柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(63∶37);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):292 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取經(jīng)70℃減壓干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋成0.5 g/L的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密量取供試品1 mL，置10 mL量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例取輔料制成空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱(chēng)取70℃下減壓干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品25 mg，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 2，3，4，5，6，7，8 mL，分別置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，分別取10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=1.139×107C+2.869×105，r=0.999 93(n=7)。結(jié)果表明，鬼臼毒素質(zhì)量濃度在0.201 2～0.804 8 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

回收率試驗(yàn):按處方比例，精密稱(chēng)取鬼臼毒素對(duì)照品20，30，40 mg各兩份，分別置50 mL量瓶中，同時(shí)加入相應(yīng)的輔料1 mL，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件每次進(jìn)樣10 μL。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

精密度試驗(yàn):取線性關(guān)系考察項(xiàng)下低、中、高質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD分別為0.58% ，0.37% ，0.58%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取回收率試驗(yàn)項(xiàng)下低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果鬼臼毒素峰面積的 RSD分別為0.85%，0.83%，0.78%(n=7)。

重復(fù)性試驗(yàn):精密量取樣品(批號(hào)為080517)6份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按擬訂的色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算百分含量。結(jié)果鬼臼毒素含量的 RSD為0.54%(n=6)。

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算3批樣品與1批已上市銷(xiāo)售藥品的鬼臼毒素含量。結(jié)果批號(hào)為 080517，080518，080519，071207的鬼臼毒素含量分別為標(biāo)示量的100.60%，100.50%，100.30%，99.26%。

3 討論

鬼臼毒素的最大吸收波長(zhǎng)在292 nm，制劑中的輔料在此波長(zhǎng)處無(wú)干擾，故選292 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。以甲醇-水(63∶37)為流動(dòng)相，鬼臼毒素與相鄰雜質(zhì)峰分離度好，保留時(shí)間為9.98 min，峰理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算為9 184.641，拖尾因子為0.978，符合2005年版《中國(guó)藥典(二部)》[2]的要求。

高效液相色譜法簡(jiǎn)單、快速、回收率高、重現(xiàn)性好，并且可排除處方中輔料對(duì)鬼臼毒素含量測(cè)定的影響，適用于鬼臼毒素酊的質(zhì)量控制。

[1]WS1-(X-044)-2002Z，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄29.