莫娟娟 劉 芃

貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,貴州 貴陽(yáng) 550002

山豆根為豆科植物越南槐 Sophora tonkinensis Gagnep.的干燥根及根莖[1]。用于治療咽喉腫痛,牙齦腫痛,濕熱黃疸,濕熱帶下,以及鉤端螺旋體病,心律失常,跖疣,膀胱癌,喉癌,惡性葡萄胎等癥[2]。目前,對(duì)于山豆根的生藥學(xué)研究多集中在傳統(tǒng)的性狀、光學(xué)顯微、基礎(chǔ)理化等方面,而對(duì)于新技術(shù)、新方法如電鏡掃描技術(shù) (SEM)等的運(yùn)用還較缺少。筆者經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)有其它同屬或不同屬的豆科類(lèi)植物的根及根莖充當(dāng)山豆根藥材在藥材市場(chǎng)流通,如包氏木藍(lán) Indigofera balfouriana Craib.、茸毛木藍(lán) Indigoferastachyoides Lindle.Baker.、西南槐 Sophoraprazeri Prain.的干燥根及根莖等。因此,為了更準(zhǔn)確地鑒別山豆根及其混淆品藥材,保證臨床和藥廠(chǎng)等用藥準(zhǔn)確性,我們采用電鏡掃描技術(shù)從超微形態(tài)結(jié)構(gòu)方面對(duì)四種藥材進(jìn)行鑒定[3]。

1 儀器及試藥

HUS-5GB型高真空鍍膜機(jī) (日本 HITACHI公司)、JFC-1600型離子濺射儀 (日本 JEOL公司)、JSM-6490LV型掃描電子顯微鏡 INCA-350X型射線(xiàn)能譜儀 (中國(guó)科學(xué)院科學(xué)儀器廠(chǎng))。山豆根、包氏木藍(lán)、茸毛木藍(lán)、西南槐采自貴州省的黔東南地區(qū),經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生藥教研室劉芃教授鑒定。實(shí)驗(yàn)所用的試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 分別取山豆根、包氏木藍(lán)、茸毛木藍(lán)、西南槐根及根莖洗凈烘干,用 50%乙醇溶液浸泡一個(gè)月使之軟化,并定期更換乙醇溶液。藥材軟化后切成 1-2mm的薄片,自然陰干。實(shí)驗(yàn)時(shí)用導(dǎo)電膠將樣品粘在樣品臺(tái)上,于 HUS-5GB型高真空鍍膜機(jī)中進(jìn)行高真空鍍碳膜,再于JFC-1600型離子濺射儀中鍍鉑金膜,在加速電壓 20KV、電流 100HA的條件下掃描、觀察并進(jìn)行顯微拍照。

2.2 掃描電鏡超微形態(tài)鑒別

2.2.1 山豆根的超微結(jié)構(gòu)

30倍下：組織構(gòu)造明顯,從外到內(nèi)依次為木栓層、栓內(nèi)層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部。韌皮部稍寬,木質(zhì)部發(fā)達(dá),導(dǎo)管和木射線(xiàn)分布密集,導(dǎo)管較小。

100倍下：木射線(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)方形、方形,排列緊密,略彎曲。

200倍下：木薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形,較小,可見(jiàn)增厚的光亮細(xì)胞壁,導(dǎo)管類(lèi)圓形、長(zhǎng)圓形,木質(zhì)部和韌皮部?jī)?nèi)密布纖維束,木栓層細(xì)胞扁長(zhǎng)方形,排列緊密。

500倍下：木薄壁細(xì)胞、射線(xiàn)細(xì)胞、韌皮薄壁細(xì)胞及栓內(nèi)層薄壁細(xì)胞內(nèi)含有極多的淀粉粒,木射線(xiàn)細(xì)胞壁上具有清晰的圓形紋孔,紋孔較小,整齊排列成行,較稀疏。

1000倍下,韌皮部和栓內(nèi)層內(nèi)可見(jiàn)發(fā)亮的草酸鈣方晶。

1500倍下：薄壁細(xì)胞和射線(xiàn)細(xì)胞表面附有多數(shù)散在的草酸鈣砂晶,并可見(jiàn)少數(shù)淀粉粒的裂縫狀臍點(diǎn)。(見(jiàn)圖1A、B、 C、 D、 E、F、 G、 H、 I)。

2.2.2 包氏木藍(lán)的超微結(jié)構(gòu)

30倍下：組織構(gòu)造明顯,從外到內(nèi)依次為木栓層、栓內(nèi)層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部。韌皮部較窄,木質(zhì)部發(fā)達(dá),導(dǎo)管分布極為密集,較大,木射線(xiàn)不太清晰。

100倍下：木薄壁細(xì)胞較小,導(dǎo)管相對(duì)較大,多為類(lèi)圓形,少數(shù)長(zhǎng)圓形。

200倍下：木薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形、長(zhǎng)圓形,較小,可見(jiàn)增厚的光亮細(xì)胞壁,少數(shù)導(dǎo)管腔內(nèi)含有發(fā)亮的團(tuán)塊狀物質(zhì),木質(zhì)部和韌皮部?jī)?nèi)密布纖維束。

300倍下：組織表面附有部分發(fā)亮的圓形顆粒狀物。

500倍下：木射線(xiàn)細(xì)胞細(xì)長(zhǎng)條形,壁平滑,少數(shù)呈波浪狀彎曲,壁上圓形、長(zhǎng)圓形紋孔小,不太清晰,數(shù)目較多,排列較整齊,導(dǎo)管壁內(nèi)側(cè)紋孔清晰可見(jiàn)。

1000倍下：多數(shù)薄壁細(xì)胞內(nèi)含有較多的淀粉粒,木射線(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)方形或長(zhǎng)梭形,兩端鈍形或短尖,壁上紋孔圓形或長(zhǎng)圓形,腔內(nèi)不含淀粉粒,纖維束橫切面類(lèi)圓形、類(lèi)多角形,壁極厚,中央胞腔小,呈條狀。 (見(jiàn)圖 2A、B、C、D、 E、 F、 G、 H、 I)。

2.2.3 茸毛木藍(lán)的超微結(jié)構(gòu)

30倍下：組織構(gòu)造明顯,從外到內(nèi)依次為木栓層、栓內(nèi)層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部。韌皮部稍寬,木質(zhì)部發(fā)達(dá),導(dǎo)管分布較稀疏,多數(shù)較小,部分較大,木射線(xiàn)不太清晰。

100倍下：導(dǎo)管多為長(zhǎng)圓形,少數(shù)類(lèi)圓形。

300倍下：木質(zhì)部中央有顏色較深的組織,呈梅花狀,木薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形、類(lèi)多角形,較大,可見(jiàn)增厚的光亮細(xì)胞壁,絕大多數(shù)薄壁細(xì)胞和射線(xiàn)細(xì)胞內(nèi)含有較多淀粉粒,木質(zhì)部和韌皮部?jī)?nèi)密布纖維束。

500倍下：淀粉粒類(lèi)圓形、半圓形或長(zhǎng)圓形,并可見(jiàn)復(fù)粒淀粉粒及半復(fù)粒淀粉粒。

600倍下：在栓內(nèi)層偶見(jiàn)石細(xì)胞,壁增厚明顯,壁上孔溝不太清晰,中央胞腔極窄,呈細(xì)長(zhǎng)條狀。

1000倍下,木射線(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)方形,壁上紋孔圓形、橢圓形,呈裂縫狀,不太清晰,分布較稀疏,少數(shù)淀粉?？梢?jiàn)裂縫狀臍點(diǎn),另外,少數(shù)淀粉粒有表面向下凹陷而成的類(lèi)圓形的坑,形如血紅細(xì)胞。 (見(jiàn)圖 3A、B、C、D、E、F、G、 H)。

2.2.4 西南槐的超微結(jié)構(gòu)

30倍下：組織構(gòu)造明顯,從外到內(nèi)依次為木栓層、栓內(nèi)層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部。韌皮部較寬,木質(zhì)部較發(fā)達(dá),導(dǎo)管分布較為密集,內(nèi)部導(dǎo)管較小,向外依次增大,木射線(xiàn)較清晰,細(xì)長(zhǎng)條形,稍彎曲。

100倍下：木栓層細(xì)胞扁長(zhǎng)方形,略彎曲,排列緊密。

200倍下：木薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形、長(zhǎng)圓形,較大,可見(jiàn)增厚的光亮細(xì)胞壁,栓內(nèi)層和韌皮部薄壁細(xì)胞內(nèi)含有極多淀粉粒。

500倍下：木射線(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)方形、方形或長(zhǎng)條形,壁平滑或呈波浪狀彎曲,壁上紋孔圓形、長(zhǎng)圓形,很小,清晰或不太清晰,多排列成 1～2行,木薄壁細(xì)胞和木射線(xiàn)細(xì)胞內(nèi)含有較多淀粉粒。

1000倍下：在栓內(nèi)層和韌皮部?jī)?nèi)可見(jiàn)草酸鈣方晶。(見(jiàn)圖 4A、B、 C、 D、 E、 F、G)

2.3 黔產(chǎn)山豆根及其三種混淆品的電鏡超微特征比較 (見(jiàn)表 1)

表1 黔產(chǎn)山豆根及其三種混淆品的電鏡超微特征比較

3 討論

電鏡掃描方法快速清晰、操作簡(jiǎn)便,而且特征明顯、極易區(qū)分。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2000：21.

[2]李希新.山豆根的研究概況 [J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2000,24(3)：235-237.

[3]樓之岑,李勝華.中草藥性狀和顯微鑒定法 [M].北京：北京醫(yī)科大學(xué),中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1997：112.