石志軍，徐以亮

（江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 江陰 214434）

小柴胡湯配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

石志軍*，徐以亮

（江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 江陰 214434）

目的：對(duì)小柴胡湯配方顆粒進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法：采用薄層色譜法對(duì)小柴胡湯配方顆粒進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)黃芩中的黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：該方法黃芩苷的線性范圍為0.248 8～1.244 0μg，平均回收率為99.29%（n＝6），RSD＝0.53%。結(jié)論：方法可行、重復(fù)性好，能有效地控制小柴胡湯配方顆粒的質(zhì)量。

小柴胡湯；配方顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

小柴胡湯出自漢朝張仲景的《傷寒雜病論》，被稱為少陽(yáng)樞機(jī)之劑，和解表里之總方［1］，臨床功效卓著，為歷代醫(yī)家所推崇。由柴胡、黃芩、人參、姜半夏、炙甘草、生姜、大棗等7味中藥組成，具有和解少陽(yáng)之功效，用于傷寒少陽(yáng)證，寒熱往來(lái)，胸脅苦滿；婦人傷寒，熱入血室。小柴胡湯配方顆粒為上述藥味經(jīng)現(xiàn)代制劑技術(shù)制成的顆粒劑。有關(guān)小柴胡湯的臨床應(yīng)用報(bào)道比較多，而其質(zhì)量控制方面的報(bào)道比較少［2，3］。為有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床用藥安全有效，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［4］，應(yīng)用薄層色譜法建立了柴胡的薄層鑒別方法，采用高效液相色譜法對(duì)黃芩中主要有效成分黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)證明，該法簡(jiǎn)便快捷，專屬性強(qiáng)，結(jié)果滿意，可作為該制劑的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200 Series（美國(guó)Agilent公司），AT-330柱溫箱（天津奧特賽恩斯科學(xué)儀器有限公司），超聲清洗機(jī)（無(wú)錫超聲電子設(shè)備廠），十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士梅特勒公司）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

1.2 試藥

硅膠G（青島海洋化工廠），黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)110715-200514，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

小柴胡湯配方顆粒（批號(hào)200906，200908，200911）均由江陰天江藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 柴胡的薄層鑒別［4］

取本品3g，研細(xì)，加甲醇30mL，超聲處理30m in，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0m L使溶解，用水飽和的正丁醇提取兩次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次40m L，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取不含柴胡的對(duì)照樣品3g，同法制成陰性對(duì)照溶液。再取柴胡對(duì)照藥材3g，加水100m L煎煮30min，濾過(guò)，濾液濃縮至近干，殘?jiān)蛹状?0mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液在同一位置則無(wú)斑點(diǎn)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 小柴胡湯的TLC圖

2.2 黃芩苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18（江蘇漢邦科技有限公司，200mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸溶液（47∶53∶0.2）［4］；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；柱溫：35℃；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品約12mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（0.124 4mg·mL－1）。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇100mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備 取缺黃芩的陰性對(duì)照樣品約0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法，同法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.2.5 干擾試驗(yàn) 照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各5μL，分別注入色譜儀。供試品色譜圖中，在與對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上，顯示相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性溶液在此保留時(shí)間無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

圖2 小柴胡湯顆粒HPLC圖

2.2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.124 4mg·mL－1）2，4，6，8，10mL置10mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配成濃度分別為0.024 88，0.049 76，0.074 64，0.099 52，0.124 4mg·mL－1系列對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，黃芩苷濃度（X）為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y＝33 269.06X＋18.53，r＝0.999 9。結(jié)果表明黃芩苷進(jìn)樣量在0.248 8～1.244 0μg與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.124 4mg·mL－1）各5μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定黃芩苷峰面積積分值，計(jì)算其RSD＝0.98%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批小柴胡湯配方顆粒樣品，平行6份，分別按供試品溶液的制備方法制備，分別進(jìn)樣5μL，測(cè)定樣品中黃芩苷的含量，結(jié)果小柴胡湯顆粒中黃芩苷的平均含量為20.30mg·g－1，RSD＝1.05%。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取小柴胡湯顆粒（批號(hào)為200911）的供試品溶液，分別于0，1，2，4，8h進(jìn)樣5μL，測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算其RSD＝0.61%，結(jié)果表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品（批號(hào)200811）0.5g，精密稱定，分別加入黃芩苷對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣5μL，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)

2.2.11 樣品測(cè)定 取小柴胡湯配方顆粒約0.5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法分別制成供試液，分別進(jìn)樣5ul，測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 小柴胡湯配方顆粒樣品中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 定性鑒別

小柴胡湯配方顆粒中柴胡的定性鑒別，采用TLC法，并分別與陰性對(duì)照液進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果沒(méi)有干擾、斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，收到良好的效果。

3.2 流動(dòng)相選擇

本實(shí)驗(yàn)中采用《中國(guó)藥典》2005年版一部黃芩藥材［含量測(cè)定］項(xiàng)下的流動(dòng)相，結(jié)果，分離效果好，因此，確定該流動(dòng)相為實(shí)驗(yàn)研究的流動(dòng)相。

3.3 提取方法選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了回流、冷浸、超聲等提取方法，結(jié)果表明超聲提取可提取完全，且操作簡(jiǎn)便、快捷。對(duì)超聲時(shí)間、溶媒用量等因素進(jìn)行考察，最后確定樣品的制備選擇70%乙醇100mL超聲處理30min為宜。

3.4 方法評(píng)價(jià)

本文建立的定性、定量方法，可有效控制小柴胡湯配方顆粒的質(zhì)量；另外，小柴胡湯配方顆粒制備工藝先進(jìn)，服用攜帶方便，可為臨床應(yīng)用提供新的用藥方式。

［1］王愛(ài)軍.小柴胡湯臨床治驗(yàn)舉隅［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2009，7（6）：151.

［2］石瑩.HPLC測(cè)定小柴胡湯丸中黃芩苷的含量［J］.中成藥，2007，29（7）：附23.

［3］牛獲山，吳悅濤.HPLC檢測(cè)小柴胡湯劑型改良后黃芩苷含量［J］.黑龍江醫(yī)藥，2008，21（2）：6.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：211.

Study on Quality Standard for Xiaochaihutang Dispensing Granule

Shi Zhijun，Xu Yiliang
（Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Jiangyin Jiangsu214434）

Objective：To study the quality standard for Xiaochaihutang dispensing granule.Methods：Xiaochaihutang dispensing granule was identified by TLC.The content of baicalin in radix scutellariae was determined by HPLC.ResultsThe linear relationship of baicalin was at the rang of0.248 8～1.244 0μg，The average recovery was 99.29%（n＝6），RSD＝0.53%.ConclusionThe methods are available with good reproducibility and can control the quality of Xiaochaihutang dispensing granule effectively.

Xiaochaihutang；dispensing granule；TLC；HPLC；Quality standard

*石志軍，Email：shizj＠tianjiang.com

2010-03-02）