馮善祥

(菏澤學院動物科學系,山東菏澤274015)

雞腎型傳染性支氣管炎(IB)是由冠狀病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病。我國于1982年由鄺榮祿首次發(fā)現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎,1990年分離出腎型傳染性支氣管炎病毒(IBV)。目前已發(fā)現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎病毒毒株的血清型已有16個之多,且不同血清型之間缺乏交叉免疫力,給疫苗控制本病帶來了極大的困難[1]。目前,有很多雞場采用抗生素控制繼發(fā)感染、補液通腎等綜合防制方法,但效果不甚滿意。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 1日齡健康AA肉仔雞。

1.2 雞胚 9日齡非免疫雞胚40枚,由青島易邦有限公司提供,母源抗體陰性。

1.3 攻毒株 腎型傳染性支氣管炎病毒強毒株IBV-C1株,由山東家禽研究所禽病中心室提供,由臨床分離并經(jīng)鑒定的野毒株。

1.4 供試藥品 中藥組方由金銀花、連翹、黃連、梔子、黃芩、芍藥、玄參、浙貝母、桔梗、甘草等共 10味藥材。

1.5 對照藥品 中藥對照組：清瘟敗毒散,由石膏、地黃、水牛角、黃連、梔子等14味中藥組成,功能、適應癥與本品相似,按2005版《中國獸藥典》標準上用量為每只雞0.5～1.5 g(按每只雞1 g應用)。

西藥對照組：利巴韋林,批號200509049,遼寧制藥總廠生產(chǎn),用生理鹽水配成1%濃度的溶液備用。按常規(guī)劑量每1 L水用利巴韋林0.1 g。

1.6 疫苗 腎型傳染性支氣管炎疫苗28/86,批號214670,1 000頭份/瓶,購自Abic公司,其他疫苗為國產(chǎn)常規(guī)疫苗。

1.7 IBV-C1株的增殖 將IBV-C1株種毒用滅菌生理鹽水按1∶10比例稀釋,除菌器除菌,接種9日齡非免疫雞胚,0.1 mL/胚,37℃恒溫培養(yǎng),去除24 h內(nèi)死胚,無菌收集24 h～48 h內(nèi)死亡雞胚尿囊液,4℃,15 000 r/min離心30 min去除雜蛋白,分裝成5 mL/瓶,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.8 攻毒劑量的確定 17日齡健康AA雛雞20只,隨機分成4組,每組5只,四組分別接種增殖后的含IBV-C1的尿囊液 0.1 mL/只、0.2 mL/只、0.3 mL/只、0.4 mL/只。攻毒方法為點眼、滴鼻各2滴,余下劑量腿部肌肉注射。接種病毒后常規(guī)隔離飼養(yǎng),連續(xù)觀察15 d,記錄各組的發(fā)病情況及死亡數(shù),以半數(shù)發(fā)病組攻毒劑量的2倍劑量確定為試驗的攻毒劑量。

1.9 動物分組 從320只1日齡AA肉雛雞中,選擇體重、大小均勻一致、健康的雛雞240只,按照公母各半簡化分層的方法,隨機分為8組,每組30只(見表1)。除疫苗對照組于1日齡用28/86疫苗滴鼻、點眼各1滴外,其他各組不免疫傳染性支氣管炎疫苗,其他疫苗按常規(guī)免疫程序按時免疫,平時加強消毒,各組隔離飼養(yǎng)。在試驗期間,自由采食和飲水,所用的飼料、飲水和用具嚴格分開,避免交叉污染。

表1 中藥組方對腎型傳染性支氣管炎試驗分組

表2 不同攻毒劑量致雞IB發(fā)病及死亡情況

1.10 給藥方法及劑量 按照表1方法,中藥組方和對照藥物組(中藥對照組、西藥對照組)從15日齡開始經(jīng)給藥,連用5 d。除健康對照組外,各組于17日齡用IBV-C1強毒株滴鼻和點眼各2滴,余下劑量腿部肌肉注射,劑量根據(jù)確定的攻毒劑量給藥。

1.11 臨床觀察與記錄 感染后,每日3次觀察雞只的健康狀況、飲水、采食及糞便情況,記錄各組雞的發(fā)病和死亡情況,并對病死雞剖檢。感染后第15天(即32日齡)結(jié)束試驗,全部剖殺試驗雞,進行病變檢查和記錄。

1.12 判定標準

1.12.1 保護 攻毒后,未出現(xiàn)臨床癥狀,精神、采食、飲水、糞便等未見異常。

保護率=每組未發(fā)病雞數(shù)/每組試驗雞總數(shù)×100%

1.12.2 發(fā)病 精神沉郁,采食量減少,排白色水樣稀便,打堆,害冷。

發(fā)病率=每組發(fā)病雞總數(shù)/每組試驗雞總數(shù)×100%

1.12.3 有效 試驗期內(nèi),無臨床癥狀及有臨床癥狀但未死亡者為有效。

有效率=每組存活雞總數(shù)/每組試驗雞總數(shù)×100%

1.12.4 死亡率 凡在試驗期間,試驗雞出現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎典型癥狀并死亡,尸檢發(fā)現(xiàn)典型病變,判定為感染死亡,根據(jù)死亡數(shù)計算各組死亡率。

死亡率=每組死亡雞總數(shù)/每組試驗雞總數(shù)×100%

1.13 數(shù)據(jù)分析和處理 保護率、發(fā)病率、死亡率、有效率用X2檢驗其組間差異性。

2 結(jié)果

2.1 攻毒劑量的確定 在攻毒劑量的確定試驗中,根據(jù)觀察指標中的臨床癥狀及剖檢特征確定其由IBV引起發(fā)病,結(jié)果表明,攻毒劑量在 0.1～0.2 mL/只,發(fā)病率在40%～80%之間,因而試驗攻毒劑量確定為0.3 mL/只。見表2。

2.2 臨床癥狀與病理變化 感染后的32 h出現(xiàn)輕微呼吸癥狀,40 h后病情加重,表現(xiàn)為全群發(fā)病。72 h后出現(xiàn)死亡,死亡集中在4～7 d,11 d后未見死亡。病雞表現(xiàn)精神沉郁,張口呼吸,甩頭,食欲減退或廢絕,排白色稀糞,最后衰竭死亡。剖檢可見氣囊渾濁,氣管下端充血,腎臟腫大,切面有大量的白色尿酸鹽顆粒,質(zhì)地脆弱,呈現(xiàn)花斑狀。直腸和泄殖腔充滿白色的尿酸鹽,輸尿管擴張達正常3～5倍。陰性對照組的病變比受試藥物組、陽性對照組更為嚴重,腹膜、胸膜及以包膜上都有尿酸鹽沉積。

2.3 清毒康對強毒感染雞的防治結(jié)果 試驗結(jié)果顯示,在保護率上,西藥對照組與中藥對照組差異不顯著(P＞0.05);受試藥物高、中劑量組與疫苗對照組相當,差異不顯著(P＞0.05);受試藥物高、中劑量組與對照藥物組(中藥對照組、西藥對照組)差異顯著(P＜0.05);低劑量組與對照藥物組(中藥對照組、西藥對照組)差異顯著(P＜0.05)。在有效率方面,受試藥物高、中劑量組與疫苗對照組顯著高于藥物低劑量組與藥物對照組(中藥對照組、西藥對照組)(P＜0.05),藥物高、中劑量組之間、低劑量組與藥物對照組(中藥對照組、西藥對照組)之間差異都不顯著(P＞0.05)。

表3 中藥組方對雛雞腎型傳染性支氣管炎的試驗結(jié)果

3 討論

3.1 試驗過程中人工攻毒感染雞的腎型傳染性支氣管炎,陰性對照組發(fā)病率為86.7%,受試藥物組發(fā)病率在23.3%～60%之間,而中藥對照組發(fā)病率為60%,西藥對照組發(fā)病率為63.3%,疫苗對照組發(fā)病率為 30.0%。感染后的雛雞潛伏期為32～40 h,72 h后出現(xiàn)死亡,病程約7 d。臨床癥狀與剖檢變化明顯,張口呼吸或咳嗽喘息,排白色石灰樣糞便,畏寒擠堆,采食量減少,飲水量增加,精神沉郁,外觀全身衰竭。氣管下端充血,腎腫大,腎小管及輸尿管內(nèi)充滿白色尿酸鹽,整個腎呈現(xiàn)花斑腎。試驗結(jié)束后,受試藥物各組剩余雞只精神良好,發(fā)病雞逐漸康復,食欲、飲水正常。剖檢觀察,所有剩余雞只腎臟、輸尿管恢復正常,無尿酸鹽沉積[2]。由此表明中藥組方對雞的腎型傳染性支氣管炎具有顯著的防治效果。

3.2 根據(jù)中醫(yī)理論,腎型傳染性支氣管炎的防治,臨床上應以清熱解毒、清肺化痰、止咳平喘、利水通淋為治療原則。本制劑中金銀花、連翹、黃芩藥性苦、寒,入肺,心經(jīng),具辛涼解表、清熱解毒、涼血之功,共為君藥;梔子為肺經(jīng)之要藥,對呼吸中樞具有抑制作用,使呼吸運動趨于安靜而達止咳平喘作用,浙貝母苦、寒,具開泄肺氣化痰之功,黃連清熱、燥濕,瀉中焦之火,三藥共起清熱、燥濕、化痰之效,為臣藥;桔梗宣利肺氣,止咳化痰,并能載諸藥上行入肺,為佐藥;甘草味甘、性平緩,補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩和方中諸藥之性,對多種病毒具有直接作用,并能誘生干擾素,為使藥。方中君臣佐使協(xié)同作用,取長補短,具清熱解毒、止咳化痰、宣肺平喘之功,有益于病毒性疾病的防治[3-4]。

3.3 由于我國迄今為止還沒有普遍認可的腎型傳染性支氣管炎標準強毒株,本試驗的攻毒株采用臨床分離并經(jīng)鑒定的野毒株攻毒,毒力較強,且攻毒日齡偏低,保護率普遍不高。又因疫苗株血清型與野毒株也不可能完全一致,且僅在一日齡進行1次免疫,故疫苗組的保護率只有70%,與受試藥物組方量組無顯著差異,說明受試藥物組方高、中劑量都可用于腎型傳染性支氣管炎的預防和治療。因此本制劑的研制可以用于發(fā)生腎型傳染性支氣管炎時的輔助治療,或在病毒性疾病多發(fā)季節(jié)及多發(fā)日齡用于預防,根據(jù)臨床試驗結(jié)果,此組方推薦使用劑量為：混飼,每只雞1 g,連用5 d。

[1] 何穎,陳忠偉,劉偉.復方中草藥對雞傳染性支氣管炎的臨床療效[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2007(2)：74-75.

[2] 畢玉霞,劉詩柱.“麻杏石甘散”對蛋雞腎型傳染性支氣管炎的療效觀察[J].河南農(nóng)業(yè)科學,2006(9)：122-123.

[3] 薛樹山,張喜臣,劉欣,等.喘咳停抗雞傳染性支氣管炎病毒H52株和M41株感染的療效試驗[J].遼寧畜牧獸醫(yī),2002(4)：1-2.

[4] 徐龍.荊防敗毒散超微粉治療雞傳染性支氣管炎與傳染性鼻炎混合感染的效果[J].山東農(nóng)業(yè)科學,2001(6)：35-36.