陳鵬飛,伍 莉

(1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系,重慶榮昌402460;2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,重慶 榮昌 402460;3.重慶市獸藥工程技術(shù)研究中心,重慶 北碚 400715)

在魚類生長環(huán)境中,存在水質(zhì)惡化、個(gè)體間的相互競爭、水溫大幅度變化、運(yùn)輸中的振蕩以及因養(yǎng)殖密度過高而造成的擁擠脅迫等[1]。其中,擁擠脅迫較為常見,此時(shí)血液中皮質(zhì)醇和血糖水平隨應(yīng)激強(qiáng)度呈規(guī)律性變化,因而皮質(zhì)醇和血糖水平變化成為衡量應(yīng)激水平的重要指標(biāo)[2-4]。苗王云鯽[5](miao wangyun crucian carp)為雜交新品種,屬淡水底層雜食性不育魚類,生長速度快、病害少、存活率高,飼養(yǎng)成本低,養(yǎng)殖簡便,大小水面均適合單養(yǎng)、混養(yǎng)和網(wǎng)箱養(yǎng)殖;其適宜養(yǎng)殖溫度0℃～40℃,在10℃以上仍能正常攝食生長。該魚體形大、食用口感滑嫩,香甜,肉質(zhì)細(xì)膩,肌間刺少,可食率高;低脂肪,高蛋白;肉味近似土鯽。本文以苗王云鯽作試驗(yàn)材料,探討擁擠脅迫狀態(tài)下血液皮質(zhì)醇和血糖水平的變化規(guī)律,分析養(yǎng)殖生產(chǎn)和運(yùn)輸中因密度過高而導(dǎo)致的高死亡率的原因,為養(yǎng)殖生產(chǎn)提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 苗王云鯽240尾,由西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系實(shí)驗(yàn)漁場提供,雌雄不限,均重100.54±13.23 g,放在循環(huán)流水的水泥池中暫養(yǎng)1周,暫養(yǎng)密度為2.3 g/L,投喂商業(yè)配合飼料。飼養(yǎng)用水為充分曝氣的自來水,p H值7.8左右,水溫25℃左右,正常投飼,自然光照。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)魚放養(yǎng)于水產(chǎn)系蠡園相同規(guī)格的12個(gè)水族箱(1.5×0.6×1.0 m3)中進(jìn)行擁擠脅迫試驗(yàn),密度組的構(gòu)建參照李愛華[6]進(jìn)行。試驗(yàn)魚隨機(jī)分為4個(gè)處理組,每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù),即對(duì)照3組(密度2.3 g/L)、低密度 3組(密度10.0 g/L)、中密度3組(密度35.0 g/L)、高密度3組(密度80.0 g/L)。每組20尾魚,注入不同體積的水,保持流水放養(yǎng),流速120 L/h。

1.3 飼養(yǎng)管理 每天分別在 8：30、12：30、6：30 投喂3次,投喂量為魚體重的3%～5%,具體投喂量視天氣、水質(zhì)及魚的采食情況而定,如有剩餌及時(shí)吸出,以免水質(zhì)惡化。每2～4 d換水1/3左右,試驗(yàn)期間水溫為25℃±2℃,24 h充氧,使溶氧保持在6.0～8.0 mg/L,正式試驗(yàn)時(shí)間 30 d。

1.4 測定指標(biāo)

1.4.1 血樣采集 分別于試驗(yàn)的第0、3、10、20、30天采取血樣。采樣前,將試驗(yàn)魚迅速撈起并立即投入濃度為200 mg/L的MS-222中做快速深度麻醉,以減少采血過程中試驗(yàn)魚的應(yīng)激反應(yīng),再斷尾取血,以3 000 r/min離心20 min,所得血樣置于-20℃暫存,用于血液皮質(zhì)醇和血糖水平測定。

1.4.2 皮質(zhì)醇測定 參照Picketing[7]方法,用放射免疫法(RIA)進(jìn)行測定,試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所,液閃計(jì)數(shù)器為中國科學(xué)院上海原子核研究所日環(huán)儀器廠生產(chǎn)的SN-6100型放射免疫γ計(jì)數(shù)器。

1.4.3 血糖測定 在7080型日立全自動(dòng)生化分析儀上完成,試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析,差異顯著時(shí),用LSD進(jìn)行多重比較,試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示。

2 結(jié)果

2.1 擁擠脅迫對(duì)苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平的影響試驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果顯示,各采樣期對(duì)照組皮質(zhì)醇水平波動(dòng)不大,平均為13.39±1.93 ng/mL,說明放養(yǎng)環(huán)境安靜,滿足應(yīng)激試驗(yàn)條件。擁擠脅迫后苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平明顯升高,高、中、低密度組皮質(zhì)醇水平均在脅迫后第3天達(dá)到最大,分別為321.34±28.85 ng/mL、247.65±21.67 ng/mL 和175.87±12.56 ng/mL,都與同期對(duì)照組皮質(zhì)醇水平有極顯著差異(P＜0.01)。之后,隨脅迫時(shí)間延長,各密度組皮質(zhì)醇水平開始回落,但高密度組至第30天時(shí)與對(duì)照組相比仍維持較高水平(191.94±12.78)ng/mL(P＜0.01),說明由于擁擠脅迫產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)使苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平極顯著升高。

表1 擁擠脅迫后苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平的變化(n=5,±S,ng/mL)

表1 擁擠脅迫后苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平的變化(n=5,±S,ng/mL)

試驗(yàn)分組 0 d 3 d 10 d 20 d 30 d高密度組 13.15±1.99 321.34±28.85 249.27±27.31 224.74±22.64 191.94±23.75中密度組 11.01±2.78 247.65±21.67 165.57±22.14 135.41±18.43 120.17±23.42低密度組 12.23±2.32 175.87±12.56 78.73±8.53 47.08±5.06 36.29±4.22對(duì)照組 12.25±1.23 14.11±2.11 13.01±1.75 13.22±2.41 14.36±2.17

2.2 擁擠脅迫對(duì)苗王云鯽血糖水平的影響 試驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果顯示,試驗(yàn)前苗王云鯽血糖水平較低,脅迫血糖水平出現(xiàn)升高,且高、中、低密度組血糖水平均在脅迫后第3天達(dá)到最大,分別為10.51±1.23 mmol/L、8.78±0.92 mmol/L和 7.11±0.81 mmol/L,與對(duì)照組相比,差異極顯著(P＜0.01)。之后,隨脅迫時(shí)間延長,各密度組血糖水平開始下降,至第30天試驗(yàn)結(jié)束時(shí),各密度組血糖水平基本回到試驗(yàn)前水平,與對(duì)照組相比,差異不顯著(P＞0.05)。

表2 擁擠脅迫后苗王云鯽血糖水平的變化(n=5,±S,ng/mL)

表2 擁擠脅迫后苗王云鯽血糖水平的變化(n=5,±S,ng/mL)

試驗(yàn)分組 0 d 3 d 10 d 20 d 30 d高密度組 4.22±0.56 10.51±1.23 7.83±0.78 6.32±0.64 5.14±0.62中密度組 4.14±0.46 8.78±0.92 6.61±0.71 5.67±0.61 4.34±0.51低密度組 4.19±0.51 7.11±0.81 6.23±0.73 5.10±0.58 4.29±0.49對(duì)照組 4.23±0.52 4.28±0.53 4.18±0.51 4.27±0.5 4.21±0.45

3 討論與結(jié)論

3.1 應(yīng)激對(duì)苗王云鯽血液皮質(zhì)醇水平的影響 本試驗(yàn)過程中,各密度組血液皮質(zhì)醇水平均迅速上升,且密度越高升幅越大,表明擁擠脅迫引起了苗王云鯽的應(yīng)激反應(yīng),其強(qiáng)度為密度依賴型。之后,隨試驗(yàn)時(shí)間延長,各密度組血液皮質(zhì)醇水平均有所回落,但高密度組第30天仍維持較高水平,表明在較長時(shí)間的應(yīng)激刺激后,低密度組魚對(duì)脅迫已逐漸適應(yīng),但高密度組魚仍不適應(yīng)。這與鯉在運(yùn)輸[8]下皮質(zhì)醇的變化情況相似。皮質(zhì)醇能夠促進(jìn)魚類蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物代謝,應(yīng)激期間皮質(zhì)醇水平升高反映了與應(yīng)激有關(guān)的能量需求的增加。

3.2 應(yīng)激對(duì)苗王云鯽血糖水平的影響 葡萄糖是機(jī)體重要組織的必需燃料,恒定的血糖水平對(duì)維持魚類正常生命活動(dòng)起著重要作用。本試驗(yàn)中血糖水平在脅迫開始后保持持續(xù)上升狀態(tài),在脅迫第3天時(shí)已顯著高于對(duì)照組,至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)血糖基本回到試驗(yàn)前水平,表明在較長時(shí)間的刺激后,各密度組苗王云鯽對(duì)脅迫已逐漸適應(yīng),這一結(jié)果與Ruane N M等[9]的結(jié)果一致。究其原因,可能是因?yàn)槠べ|(zhì)醇能激活糖元異生中的葡萄糖-6-磷酸酶,使機(jī)體各組織對(duì)葡萄糖的利用率降低,從而使糖元異生作用增強(qiáng)、血糖濃度升高[10]。此外,脅迫時(shí)腎上腺髓質(zhì)釋放腎上腺素的量也增加,亦可促使糖元分解成葡萄糖進(jìn)入血液,引起血糖升高[11]。

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