林三清，洪劍浩，李 芳，夏敬民

(湛江師范學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣東 湛江 524048)

檸檬桉葉油對復(fù)方阿司匹林軟膏的透皮促進(jìn)作用研究＊

林三清，洪劍浩，李 芳，夏敬民

(湛江師范學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣東 湛江 524048)

目的探討復(fù)方阿司匹林軟膏劑的最佳處方及檸檬桉葉油對阿司匹林透皮擴(kuò)散作用的影響。方法用正交試驗法對復(fù)方阿司匹林軟膏處方進(jìn)行優(yōu)化;用離體家兔皮膚作為試驗材料，用藥物透皮儀對軟膏中阿司匹林進(jìn)行透皮擴(kuò)散試驗，紫外分光光度法測定阿司匹林透皮擴(kuò)散的累積滲透量，配對 t檢驗法驗證檸檬桉葉油對阿司匹林是否有促透作用。結(jié)果復(fù)方阿司匹林軟膏的最佳處方是阿司匹林占2%，十二烷基硫酸鈉占1.2%，硬脂醇占20%，檸檬桉葉油占1%，三乙醇胺占2%。檸檬桉葉油能明顯提高軟膏中阿司匹林的皮膚累積滲透量和穩(wěn)態(tài)滲透流量(P＜0.05)。結(jié)論檸檬桉葉油對阿司匹林有透皮促進(jìn)作用。

檸檬桉葉油;阿司匹林軟膏;透皮擴(kuò)散

阿司匹林作為傳統(tǒng)的非甾體抗炎藥，不良反應(yīng)較多，尤其易引起胃腸道不良反應(yīng)[1]，劑量過大時還可能引起水楊酸反應(yīng)，誘發(fā)中樞神經(jīng)癥狀等[2]。目前，為了減輕阿司匹林對胃的損傷，多將其制成腸溶制劑，但內(nèi)服制劑并不能解決其對全身其他系統(tǒng)的影響。因此，在治療局部炎癥性疾病時，研究一種對全身不良反應(yīng)小的制劑非常重要。透皮給藥系統(tǒng)具有獨特優(yōu)勢，如可避免首過效應(yīng)和胃腸道因素對藥物吸收的影響、恒速釋藥、使用方便、安全、降低藥物毒副作用等，其給藥劑量是由有效釋藥面積和藥物的透皮速率決定的。大多數(shù)藥物的透皮速率滿足不了治療要求，而實際應(yīng)用又制約了有效釋藥面積，故提高藥物的透皮速率是開發(fā)透皮給藥系統(tǒng)的關(guān)鍵。烯萜類中藥促透劑多為揮發(fā)油成分，研究較多的有薄荷油、丁香油、主要含1，8－桉葉素的桉葉油、冰片、樟腦等。其中主要含1，8－桉葉素的桉葉油是同類物質(zhì)中最有價值的一種透皮吸收促進(jìn)劑，即使與經(jīng)典的透皮吸收促進(jìn)劑氮酮相比[3]，也有較好的透皮吸收促進(jìn)作用，而且皮膚刺激性很小[4]。檸檬桉葉油的主要成分是香茅醛和β香茅醇，具有與上述桉葉油相似的理化性質(zhì)，但其促透作用研究卻未見報道，故研究其促透作用有較大的實用意義和經(jīng)濟(jì)價值。本試驗中，將檸檬桉葉油與阿司匹林制成復(fù)方軟膏劑，并初步觀察了檸檬桉葉油對軟膏中阿司匹林透皮擴(kuò)散的影響。

1 動物、儀器與試藥

健康家兔(雌雄兼用，體重2～3 kg)，由廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供(合格證號為粵實動證字第2009035號)。

RYJ－6A型藥物透皮儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);Gold Spectrumlab 53/54型紫外可見分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司);BS124S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);XC69－HGFHGF型恒溫水浴鍋(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

檸檬桉葉油(湛江師范學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院自制，批號為20091206);阿司匹林(A Johnson Matthey Company，批號為10112030);十八醇(批號為 20091109)，尼泊金乙酯(批號為20091010)，酒石酸(批號為 20091109)，三乙醇胺(批號為20091015)，均由天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn);月桂醇(批號為0709182)，乙醇(批號為20090815)，均為廣東汕頭市西隴化工廠產(chǎn)品;1，2－丙二醇(汕頭市光華化學(xué)廠，批號為20081213);氯化鈉(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號為20081009);磷酸氫二鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為20090119);磷酸二氫鈉(廣東化學(xué)試劑廠，批號為20090630)。以上試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 離體皮膚的制備

取健康家兔，用5.5%的Na2S脫凈腹部皮膚的毛，用生理鹽水仔細(xì)清洗家兔腹部的Na2S殘液，然后敲擊家兔后腦，使之被擊暈。用手術(shù)剪取下腹部皮膚，剝離皮下脂肪組織，不傷角質(zhì)層，將皮膚用新鮮生理鹽水沖洗干凈，然后浸泡于生理鹽水中冷藏12 h，備用。

2.2 離體皮膚滲透試驗裝置

采用雙室滲透擴(kuò)散池。裝置由上下兩個剝離組件對合而成，圓形皮膚夾在中間形成上下兩室，用夾子將兩室固定。上室為供給室，下室為接收室，在接收室一側(cè)連有1個上傾管道供取樣、補(bǔ)充接收液或排氣泡用。擴(kuò)散面積為2.8 cm2，外置恒溫水浴(37±1)℃，并置磁力攪拌器上，恒定轉(zhuǎn)速(300 r/min)下不斷攪拌。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[5]

精密稱取阿司匹林0.020 0 g，置20 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋到刻度，分別精密稱取 1.00，1.50，2.00，2.5，3.00 mL，置25 mL容量瓶中，于275 nm波長處測定其吸光度(A)，以 A值對質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得曲線方程 A=6.015 0 C+0.021 8，r=0.999 8(n=5)。

2.4 阿司匹林軟膏制備

將油相成分硬脂醇與水相成分十二烷基硫酸鈉、尼泊金乙酯、丙二醇、三乙醇胺、酒石酸分別溶于蒸餾水中，加熱至75℃，將水相加入油相中，攪拌，得O/W型乳劑型基質(zhì)。室溫下將預(yù)先溶于95%乙醇中的阿司匹林加入上述基質(zhì)中，充分?jǐn)嚢柚晾淠吹眉?xì)膩均勻且易于涂布的透皮軟膏[6]。配制系列含檸檬桉葉油的2%阿司匹林軟膏作為供試品溶液，以不含檸檬桉葉油的2%阿司匹林作為對照品溶液，同時以不含檸檬桉葉油和阿司匹林的軟膏作基線校正。

2.5 制備工藝優(yōu)選[7]

因素水平設(shè)計:根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，結(jié)合有關(guān)資料，以6 h的累積滲透量為考察指標(biāo)，選阿司匹林軟膏處方中十二烷基硫酸鈉(因素A)、硬脂醇(因素 B)、檸檬桉葉油(因素 C)、三乙醇胺(因素D)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為考察因素，每個因素設(shè)計3個水平，進(jìn)行四因素三水平正交試驗，優(yōu)選參數(shù)組合。因素水平設(shè)計見表1。

正交試驗設(shè)計:參照 2.4項下方法制備阿司匹林軟膏，按L9(34)正交表進(jìn)行試驗。結(jié)果見表2和表3?？梢姡饕蛩赜绊懘笮∫来螢镈＞C＞A＞B，因素D是最重要的影響因素，而因素C和因素A是次要因素。方差分析結(jié)果顯示，因素D和因素C對阿司匹林累積滲透量的影響有顯著性意義(P＜0.05)。方差分析與直觀分析結(jié)果具有一致性，即三乙醇胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)是影響阿司匹林累積滲透量的最主要因素，檸檬桉葉油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)次之，十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有一定影響，而硬脂醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)影響不大。綜合考慮，最優(yōu)處方是A2B3C1D2。

表1 正交試驗因素水平表(%)

表2 L9(34)正交試驗結(jié)果與分析

表3 方差分析表

驗證試驗:考慮到試驗誤差和實際生產(chǎn)，尚需進(jìn)一步試驗加以驗證。按優(yōu)選的最佳工藝條件驗證3批樣品，結(jié)果阿司匹林的累積滲透量分別為 992，965，981 μg/cm2，平均 979 μg/cm2，RSD=1.39%(n=3)?？梢妰?yōu)選的工藝條件正確、可靠。

2.6 滲透試驗

2.6.1 磷酸鹽緩沖液制備

稱取磷酸氫二鈉71.644 g，磷酸二氫鈉27.610 g，分別置1 000 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，量取磷酸氫二鈉溶液720 mL，磷酸二氫鈉溶液280 mL，將二者混合即得pH=7.4的磷酸緩沖溶液。

2.6.2 滲透率測定

將家兔皮膚固定在Franz擴(kuò)散池的上、下兩室之間，角質(zhì)層朝上，準(zhǔn)確稱取軟膏0.4 g，均勻涂于皮膚表面，接受池(擴(kuò)散面積 S=2.8 cm2，容積為6.5 mL)中pH=7.4的磷酸緩沖液為接受液，接受液與皮膚真皮層剛好接觸。在接受池內(nèi)置一磁力攪拌棒，將接受池置磁力攪拌器上，在恒溫(37±1℃)、恒速(300 r/min)下不斷攪拌。再于涂藥后 1，2，3，4，5，6 h 時分別取 4 mL 接受液，同時補(bǔ)充等量接受液。于275 nm波長處測定取出的接受液吸收度(A)值。將 A值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算樣品質(zhì)量濃度，并計算累積滲透量(Q)。Cn=Cni+V0/V∑Cpt;Qn=CnV/A。Cn為 t時間藥物的校正質(zhì)量濃度，Cni為 t時間藥物的測定質(zhì)量濃度，Cpt為 t時間前藥物的測定質(zhì)量濃度，V0為每次取樣體積，V為接受杯的總體積，Qn為接受液的總體積，A為接受液的面積。

2.6.3 檸檬桉葉油對阿司匹林累積滲透量的影響

選取阿司匹林軟膏的最優(yōu)處方，比較軟膏中含檸檬桉葉油與不含檸檬桉葉油的阿司匹林在各小時的累積滲透量。結(jié)果見表 4。計算得 t=3.508，由 t界值表得 t0.05，5=2.571.t＞ 2.571，P＜0.05。因此，可以認(rèn)為檸檬桉葉油對阿司匹林軟膏具有促透作用。

表4 檸檬桉葉油對各小時阿司匹林累積滲透量的影響

2.6.4 檸檬桉葉油對阿司匹林穩(wěn)態(tài)滲透流量的影響

根據(jù)正交試驗的9組數(shù)據(jù)，畫出 Q－t圖，得 Q－t方程(表5)，用配對 t檢驗法比較含檸檬桉葉油與不含檸檬桉葉油的阿司匹林軟膏累積滲透速率的差異是否有顯著性意義。結(jié)果見表6。計算得t=5.42，由 t界值表得 t0.05，8=2.306，t＞ 2.306，P ＜0.05。結(jié)果顯示，檸檬桉葉油可以提高軟膏中阿司匹林的滲透速率。

3 討論

以累積滲透量和滲透流量為考核指標(biāo)的正交試驗結(jié)果表明，復(fù)方阿司匹林軟膏的最優(yōu)處方為:阿司匹林占2%，十二烷基硫酸鈉占1.2%，硬脂醇占20%，檸檬桉葉油占1%，三乙醇胺占2%。試驗結(jié)果還表明，檸檬桉葉油能夠提高復(fù)方軟膏中阿司匹林的累積皮膚滲透量和滲透流量，且均有顯著性意義(P＜0.05)，說明檸檬桉葉油對軟膏中阿司匹林具有促透作用。我國檸檬桉資源十分豐富，而檸檬桉葉基本被廢棄，若經(jīng)過深入研究，能將其作為藥物透皮吸收促進(jìn)劑，則對于綜合利用豐富的檸檬桉資源、降低藥物透皮吸收促進(jìn)劑的成本具有重要意義。

表5 各處方的 Q－t方程

表6 檸檬桉葉油對阿司匹林滲透速率的影響

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Preparation of Compound Aspirin Ointment and Effect of Citriodora Oil on Transdermal Enhancing Action of Aspirin

Lin Sanqing，Hong Jianhao，Li Fang，Xia Jingmin
(Chemical Science and Technology School， Zhanjiang Normal University， Zhanjiang， Guangdong， China 524048)

ObjectiveTo research the best prescription of Compound Aspirin Ointment and the effect of citriodora oil on the transdermal diffusion action of aspirin.MethodsThe orthogonal test was used to optimize the prescription of Compound Aspirin Ointment.With the rabbit skin in vitro as test material，aspirin in the ointment was performed the transdermal diffusion test by the medicinal transdermal delivery and the accumulation permeation amounts of aspirin in the ointment were determined by ultraviolet spectrophotometer.The paired t test was adopted to verify the effect of citriodora oil on the transdermal delivery enhancing action of aspirin.ResultsThe best prescription of Compound Aspirin Ointment was 2% of aspirin，1.2% of sodium lauryl sulfate，20% of stearyl alcohol，1% of citriodora oil and 2% triethanolamine.Citriodora oil had the enhancement effects on the accumulation permeation and steady permeation flux of aspirin in the ointment with statistical significance(P＜0.05).ConclusionCitriodora oil could enhance the transdermal delivery of aspirin in the ointment.

citriodora oil;aspirin ointment;transdermal delivery

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)10－0025－03

＊湛江市財政資金科技專項競爭性分配項目，項目編號:湛財工[2009]163號;湛江師范學(xué)院科研基金資助項目，項目編號:QL0804。

林三清(1983－)，男，學(xué)士，助理實驗師，主要從事藥劑學(xué)與藥理學(xué)研究工作，(電話)0759－3182455;夏敬民(1961－)，男，碩士，教授，主要從事藥劑學(xué)與藥理學(xué)研究工作，本文通訊作者，(電子信箱)muqing209@163.com。

2010－06－03;

2010－11－06)