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老年下呼吸道感染肺炎克雷伯菌的耐藥性研究

2011-01-24 06:47陳吉管
中國藥業(yè) 2011年10期
關(guān)鍵詞:內(nèi)酰胺酶克雷伯耐藥性

陳吉管

(浙江省蒼南縣第三人民醫(yī)院急診科,浙江 溫州 325804)

老年下呼吸道感染肺炎克雷伯菌的耐藥性研究

陳吉管

(浙江省蒼南縣第三人民醫(yī)院急診科,浙江 溫州 325804)

目的探討老年下呼吸道感染肺炎克雷伯菌的耐藥性及其超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的檢測。方法選擇從老年下呼吸道感染患者臨床送檢標(biāo)本中分離出的肺炎克雷伯菌140株,用K-B法檢測其對14種抗生素的耐藥率,用改良的酶提取物三維試驗法測定ESBLs。結(jié)果從140株肺炎克雷伯菌中檢出ESBLs陽性菌株69株,檢出率高達(dá)49.29%。肺炎克雷伯菌對丁胺卡那霉素、頭孢西丁、亞胺培南、哌拉西林他唑巴坦和頭孢哌酮舒巴坦的耐藥率均低于30%,對哌拉西林、頭孢唑林、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和復(fù)方新諾明的耐藥率均高于60%。ESBLs陽性菌株對14種抗菌藥物的耐藥性大部分高于ESBLs陰性菌株。結(jié)論對于老年下呼吸道感染ESBLs陽性的肺炎克雷伯菌患者,可考慮選擇β-內(nèi)酰胺類加β-內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素,對重癥感染可首選碳青霉烯類抗生素。

肺炎克雷伯菌;下呼吸道感染;超廣譜β-內(nèi)酰胺酶;耐藥性

下呼吸道感染是威脅老年人健康的主要疾病之一,其中肺炎克雷伯菌是下呼吸道感染的重要病原菌[1]。近年來隨著抗生素的不斷開發(fā)和應(yīng)用,肺炎克雷伯菌的耐藥性不斷增強,其主要原因是細(xì)菌產(chǎn)生了超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)。ESBLs的傳播性及其多重耐藥性,往往給臨床治療帶來很大的困難,及時檢測產(chǎn)ESBLs細(xì)菌流行趨勢及其耐藥性變遷,對于控制此類耐藥菌及其耐藥質(zhì)粒的傳播,指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要的意義[2]。為此,筆者收集來自我院2008年1月至2010年4月老年下呼吸道感染患者的140株肺炎克雷伯菌,研究了其耐藥性和產(chǎn)ESBLs情況。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

從2008年1月至2010年4月我院老年下呼吸道感染住院患者臨床送檢標(biāo)本中分離出的肺炎克雷伯菌140株。痰液標(biāo)本均為合格的晨痰標(biāo)本,部分患者為氣管插管或氣管切開患者,采用一次性封閉性吸痰管從氣管插管內(nèi)吸痰或經(jīng)纖維支氣管鏡下沖洗留取痰標(biāo)本。痰標(biāo)本均有肺炎克雷伯菌優(yōu)勢生長連續(xù)2次以上。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥物敏感性試驗

取痰標(biāo)本,按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》分離、培養(yǎng)細(xì)菌,用Vitek-32型微生物分析儀和GNI+鑒定卡鑒定細(xì)菌;用K-B法對所有試驗菌株按美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)做藥物敏感性試驗。以大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603為質(zhì)控菌株。

1.3 ESBLs檢測

1.3.1 酶粗提物制備

參照文獻(xiàn)[3]并略作改動,取普通平皿上過夜培養(yǎng)的受試菌菌落,制成 1.5×108CFU/mL菌液,取 25 μL菌液,加 6 mL的 LB肉湯,置35℃恒溫?fù)u床(200 r/min)上4~6 h孵育。取6 mL培養(yǎng)液,以4 000 r/min轉(zhuǎn)速、4℃下離心處理20 min,棄上清液,沉淀加0.75 mL 的 0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液(pH=7.0),混勻,于 -80 ℃下反復(fù)凍融5次,以14 000 r/min轉(zhuǎn)速,4℃下離心處理2 h,棄沉淀,取上清液,經(jīng)MH瓊脂平板上常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陰性后于-20℃下保存。

1.3.2 ESBLs分析

按文獻(xiàn)[3],用30 μg頭孢曲松紙片取代頭孢西丁,用36 μL的酶粗提液加4 μL的2×104mol/L鄰氯西林取代40 μL酶粗提液,其余操作同1.3.1。若觀察到狹逢與抑菌圈交接處出現(xiàn)擴(kuò)大的長菌區(qū)域,視為三維試驗陽性,即ESBLs陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS11.5統(tǒng)計學(xué)軟件分析,采用χ2檢驗,以 P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

從140株肺炎克雷伯菌中檢出ESBLs陽性菌株69株,檢出率高達(dá)49.29%。肺炎克雷伯菌對丁胺卡那霉素、頭孢西丁、亞胺培南、哌拉西林他唑巴坦和頭孢哌酮舒巴坦的耐藥率均低于30%,對哌拉西林、頭孢唑林、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和復(fù)方新諾明的耐藥率均高于60%。ESBLs陽性菌株對14種抗菌藥物的耐藥性大部分高于ESBLs陰性菌株(表1)。

表1 ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株對14種抗生素的耐藥性

3 討論

近年來,肺炎克雷伯菌的感染率呈上升趨勢。該菌引起的下呼吸道感染多起病急、寒戰(zhàn)高熱、胸痛、咳嗽,痰黏稠不易咳出,可出現(xiàn)呼吸困難或紫紺。由該菌引起的免疫力低下患者感染或醫(yī)院感染不斷增多,其對以β-內(nèi)酰胺類抗生素為主的各種抗生素的耐藥性也在不斷增強。肺炎克雷伯菌是最常見的產(chǎn)ESBLs菌株,占產(chǎn)ESBLs的75.0%。ESBLs可通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式使耐藥基因在細(xì)菌中擴(kuò)散,因此檢測產(chǎn)ESBLs細(xì)菌有利于正確使用抗菌藥物,有助于控制其播散與爆發(fā)流行。采用改良的酶提取物三維試驗法檢測ESBLs,從140株肺炎克雷伯菌中檢出ESBLs陽性菌株69株,檢出率高達(dá)49.29%,明顯高于國內(nèi)文獻(xiàn)報道[5]。這可能是本組研究對象均為老年患者,住院次數(shù)、住院時間和抗生素用量均多于普通患者,容易產(chǎn)生ESBLs。

本研究結(jié)果表明,下呼吸道ESBLs陽性肺炎克雷伯菌對14種有代表性抗生素的耐藥率多高于ESBLs陰性細(xì)菌,其多重耐藥現(xiàn)象更嚴(yán)重。其中對丁胺卡那霉素、頭孢西丁、亞胺培南、哌拉西林他唑巴坦和頭孢哌酮舒巴坦的耐藥率均低于30%,對哌拉西林、頭孢唑林、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和復(fù)方新諾明的耐藥率均高于60%。肺炎克雷伯菌對青霉素類抗生素耐藥率最高,這與文獻(xiàn)報道一致[6]。喹諾酮類和磺胺類藥物曾被廣泛應(yīng)用于治療下呼吸道感染,但近年發(fā)現(xiàn),肺炎克雷伯菌對喹諾酮類和磺胺類藥物耐藥性迅速上升,且藥物之間存在明顯交叉耐藥性[7]。本組復(fù)方新諾明的耐藥率高達(dá)72.14%,左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率均超過60%,已不宜作為本地區(qū)下呼吸道肺炎克雷伯菌感染的常規(guī)用藥。氨基苷類藥物丁胺卡那霉素雖然耐藥率較低(26.43%),但因具有明顯腎毒性、耳毒性,在用于老年患者時須慎重。頭孢菌素中以頭孢吡肟的抗菌作用最強,本組耐藥率為37.14%,原因可能是第4代頭孢菌素對β-內(nèi)酰胺酶的親和力較低,應(yīng)用時間較短,且能快速地通過細(xì)菌的外膜屏障與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合而發(fā)揮較強的抗菌作用。但根據(jù)NCCLS1999年標(biāo)準(zhǔn),只要確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌,那么無論藥物敏感性試驗結(jié)果顯示耐藥還是敏感,均應(yīng)避免單用頭孢菌素類抗生素,而應(yīng)選用其他有效藥物[8]。本組頭孢西丁耐藥率為20.0%,這可能與頭霉類抗生素含有對ESBLs酶相對穩(wěn)定的7-α甲基側(cè)鏈有關(guān)[9]。亞胺培南是所有被測藥物中對肺炎克雷伯菌抗菌作用最強的抗生素,本組產(chǎn)ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株對亞胺培南的敏感率均為100%。可見亞胺培南對肺炎克雷伯菌具有較強的抗菌作用,可作為本地區(qū)下呼吸道肺炎克雷伯菌重癥感染的首選抗菌藥物。本組頭孢哌酮舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率均低于30%,可能是β-內(nèi)酰胺類抗生素加用β-內(nèi)酰胺酶抑制劑后提高了對肺炎克雷伯菌所產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性,增強了抗菌作用,同時對某些病原菌還有一定的抗菌活性[10]。

總之,對于老年下呼吸道感染ESBLs陽性的肺炎克雷伯菌患者,可考慮可選擇β-內(nèi)酰胺類加β-內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素,對重癥感染可首選碳青霉烯類抗生素。為防止下呼吸道感染中產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌的爆發(fā)流行,要合理使用抗生素,增強醫(yī)護(hù)人員的無菌觀念,避免耐藥菌的交叉?zhèn)鞑?,以降低本病的發(fā)生率,提高治愈率。

[1]郭勝祥,胡繼紅,繆競智,等.老年下呼吸道感染患者痰病原菌及其β-內(nèi)酰胺酶陽性株分析[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2000(19):254-257.

[2]賴國祥,林慶安,黃梁滸,等.老年下呼吸道感染患者肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌耐藥性分析[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2003,22(3):146-149.

[3]吳偉元,陳民鈞,王 輝.陰溝腸桿菌去阻遏持續(xù)高產(chǎn)AmpC酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的檢測[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2001,17(2):104.

[4]賴國祥,林慶安,黃梁滸,等.下呼吸道感染患者中超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株的藥敏分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2003,13(1):78-80.

[5]李從榮,顧 劍,金正江.下呼吸道肺炎克雷伯菌的耐藥性研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2004,14(23):56 -58.

[7]褚海青,李惠萍,何國鈞,等.下呼吸道標(biāo)本肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶情況及耐藥監(jiān)測[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2001,8(4):383-385.

[8]Paterson DL,Ko WC,Von GA,et al.Outcome of cephalosporin treatment for serious infections due to apparently susceptible organisms producing extended-spectrum beta-lactamases:implications for the clinical microbiology laboratory[J].J ClinMicrobiol,2001,39:2 206 - 2 212.

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[10]譚 艷,方治平.抗菌藥物的作用機(jī)制及細(xì)菌耐藥性機(jī)制的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)藥·抗生素分冊,2003,24(2):65-69.

R915;R969.3;R978

A

1006-4931(2011)10-0017-03

陳吉管(1975-),男,主治醫(yī)師,從事急診及ICU臨床工作,(電子信箱)cangnanchenjg@126.com。

2010-08-10)

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