楊海燕，張 成

(1.陜西省藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061;2.陜西省醫(yī)療器械檢測(cè)中心，陜西 西安 710061)

高效液相色譜法測(cè)定朱砂七中虎杖苷含量

楊海燕1，張 成2

(1.陜西省藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061;2.陜西省醫(yī)療器械檢測(cè)中心，陜西 西安 710061)

目的建立測(cè)定朱砂七中虎杖苷含量的高效液相色譜法。方法采用Shimadzu VP－ODS色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈 －水(15∶85)，流速 1.0 mL/min，柱溫 30℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 317 nm。結(jié)果虎杖苷峰與其他峰分離良好，進(jìn)樣量在 0.082 05～0.820 50 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系較好，平均加樣回收率為98.70%，RSD=1.60%(n=6)。結(jié)論該法可以用于測(cè)定對(duì)朱砂七中虎杖苷含量，從而達(dá)到控制藥材質(zhì)量的目的。

朱砂七;高效液相色譜法;虎杖苷;含量

朱砂七為蓼科植物毛脈蓼 Polygonum Cillinerve(Nakai)Ohwl的干燥塊根，臨床上多用于胃炎、急性菌痢[1]，療效確切。現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，本品具有抑菌、抗病毒及抗氧化活性作用[2－3]。近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，朱砂七含有較多的白黎蘆醇、白黎蘆醇苷(虎杖苷)等二苯乙烯類成分[4]，因此其在抗腫瘤[5]、調(diào)節(jié)心血管和調(diào)血脂[6]方面的應(yīng)用有待于進(jìn)一步研究。為控制藥材質(zhì)量，筆者建立了測(cè)定朱砂七中虎杖苷含量的高效液相色譜圖。

1 儀器與試藥

LC－2010 HT型全自動(dòng)高效液相色譜儀(日本島津);AG ME 235S型電子分析天平，BS 224S型電子分析天平(德國(guó)賽多利斯);HH－4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)。乙腈(色譜純，美國(guó)Tedia公司)，水(超純水)，其他試劑(分析純);虎杖苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111575－200301);朱砂七藥材(部分為市售藥材，部分由陜西盤龍藥業(yè)有限公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Shimadzu VP－ODS 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:乙腈 －水(15 ∶85);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):317 nm;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，虎杖苷峰與其他峰分離良好，理論板數(shù)以虎杖苷峰計(jì)不低于3 000，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取虎杖苷對(duì)照品10.94 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取朱砂七藥材細(xì)粉0.2 g，置索氏提取器中，用乙酸乙酯回流提取至無(wú)色，提取液回收至干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL量瓶中，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品溶液 3，5，10，15，25，30 μL，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=6.114 3×106X－4.904 2×105，r=0.993。結(jié)果表明虎杖苷進(jìn)樣量在 0.082 05 ～0.820 50 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值有較好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0.59%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10 μL，每隔2 h進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為1.3%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同批朱砂七藥材細(xì)粉6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為1.099 8 mg/g，RSD為3.4%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn):取朱砂七細(xì)粉0.1 g，置索氏提取器中，分別精密量取0.101 6 mg/mL的虎杖苷乙酸乙酯溶液1，2，3 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 虎權(quán)苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

測(cè)定了7批朱砂七藥材的含量，結(jié)果虎權(quán)苷含量分別為2.82，2.66，1.10，3.65，1.54，6.90，1.81 mg/g，根據(jù)所測(cè)結(jié)果，規(guī)定每1 g藥材含虎杖苷應(yīng)不低于1.0 mg。

3 討論

取加入虎杖苷對(duì)照品的流動(dòng)相溶液，以流動(dòng)相為空白，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在317.00 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故將檢測(cè)波長(zhǎng)定為317 nm。

在選擇提取溶劑時(shí)，分別以乙醚、乙酸乙酯、甲醇回流提取依法測(cè)定。結(jié)果乙醚的提取率只有乙酸乙酯和甲醇提取率的1/10，乙酸乙酯和甲醇的提取率基本一致，但乙酸乙酯提取的樣品雜質(zhì)較少，虎杖苷與周圍峰的分離明顯好于甲醇提取，故選乙酸乙酯為提取溶劑。

選擇提取方法時(shí)，以乙酸乙酯為溶劑，比較了超聲(1 h)和索氏提取的效果，結(jié)果索氏提取的樣品含量幾乎是超聲提取的4倍，故采用索氏提取法。

測(cè)定了 4 批市售飲片的含量，結(jié)果分別為 9.77，7.37，10.98，9.96 mg/g(含量均較高)，炮制是否能使虎杖苷含量增加，有待進(jìn)一步研究。由于所測(cè)藥材和飲片的含量差異較大，當(dāng)所測(cè)溶液含量過(guò)高(質(zhì)量濃度超過(guò)0.082 mg/mL)時(shí)，將樣品溶液稀釋2倍或5倍體積后再測(cè)定，可以保證每一測(cè)量結(jié)果均在線性范圍內(nèi)。

[1]袁鮮云，武希桃.朱砂七抗炎及抗?jié)冏饔玫膶?shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，26(2):48 －49.

[2]中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2000:650.

[3]Jong PL，Ryung SM，Ren BA，et al.Stilbenes from the roots of Pleuropterus ciliinervis and their antioxidant activities[J].Phytochemistry，2003，64(5):759.

[4]戚歡陽(yáng)，張朝鳳，張 勉，等.毛脈蓼化學(xué)成分及抑菌活性的研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2005，40(11):819 －822.

[5]Jang M，Cai L，Geoge OU，et al.Cancer chemopreventive activity of resveratrol，a natural product devived from grapes[J].Science，1997，275:218 －220.

[6]舒仕瑜.白藜蘆醇苷生物活性及藥理作用[J].兒科藥學(xué)雜志，2002，8(1):9－11.

Determination of Polydatin in Polygonum Cillinerve(Nakai)Ohwl by HPLC

Yang Haiyan1，Zhang Cheng2
(1.Shaanxi Provincial Institute for Drug Control， Xi'an， Shaanxi，China 710061;
2.Shaanxi Provincial Medical Equipment Examination Center， Xi'an， Shaanxi， China 710061)

ObjectiveTo establish the quantitative determination method ofpolydatin in Polygonum Cillinerve (Nakai) Ohwlby HPLC.Method Polydatin was determined by HPLC carried on the Shimadzu VP －ODS column(250 mm ×4.6 mm，5 μm)with the mobile phase of acetonitrile－water(15 ∶85)and the flow rate at 1.0 mL/min.The column temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was 317 nm.Results The peak of polydatin was separated well with other peaks，showing the better linear relation between the sample size in the range of 0.082 05 － 0.820 50 μg with the peak area.The average recovery rate was 98.70% ， RSD 1.60%(n=6).Conclusion This method can be used to determine the polydatin content in Polygonum Cillinerve(Nakai)Ohwl for controlling the quality of the medicinal material.

Polygonum Cillinerve(Nakai)Ohwl;HPLC;polydatin;content

R284.1;R282.71

A

1006－4931(2011)10－0029－02

2010－07－19;

2011－01－25)