李 劍

(浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院澤國院區(qū)泌尿外科，浙江 臺州 317523)

尿路感染大腸埃希菌的耐藥性及產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶檢測

李 劍

(浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院澤國院區(qū)泌尿外科，浙江 臺州 317523)

目的探討尿路感染大腸埃希菌的耐藥性及產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢測。方法對從尿路感染者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌，采用紙片擴(kuò)散(K－B)法檢測其對15種抗生素的耐藥率，采用改良的酶提取物三維試驗(yàn)法測定ESBLs。結(jié)果從96株大腸埃希菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株31株，檢出率高達(dá)32.29%。大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率較低(＜20%)，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率較高(＞50%)。產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性大部分高于非產(chǎn)ESBLs菌株。結(jié)論對產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的尿路感染，經(jīng)驗(yàn)用藥可選擇β－內(nèi)酰胺類/β－內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素，對重癥感染一般首選碳青霉烯類抗生素;但最好根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物進(jìn)行治療。

尿路感染;大腸埃希菌;超廣譜β－內(nèi)酰胺酶;耐藥性

大腸埃希菌是尿路感染最常見的致病菌?？股貜V泛且不合理的應(yīng)用，特別是第3代、4代頭孢菌素的大量使用，使大腸埃希菌耐藥率逐漸上升，其主要原因是產(chǎn)生了超廣譜β－內(nèi)酰胺酶(ESBLs)[1]。為提高醫(yī)療效果，筆者對從我院尿路感染患者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌進(jìn)行了15種常用抗生素藥物敏感性試驗(yàn)及ESBLs檢測，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

從2008年1月～2009年9月我院門診和住院尿路感染患者送檢中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌。大腸埃希菌ATCC25922為不產(chǎn)酶株質(zhì)控菌株，肺炎克雷伯菌ATCC 700603為ESBLs質(zhì)控菌株。

1.2 細(xì)菌鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)

用法國生物梅里埃公司的Vitek－32型微生物分析儀、GNI+鑒定卡鑒定菌株;用紙片擴(kuò)散(K－B)法(藥敏紙片均購自杭州天和微生物試制有限公司)做藥物敏感性試驗(yàn)。

1.3 ESBLs檢測

1.3.1 酶粗提物制備

參照文獻(xiàn)[2]并略作改動(dòng)，取普通平皿上過夜培養(yǎng)的受試菌菌落制成1.5×108CFU/mL菌液，取25 μL菌液，加入6 mL LB肉湯，置35℃恒溫?fù)u床(200 r/min)上，孵育4～6 h。將6 mL培養(yǎng)液以4 000 r/min轉(zhuǎn)速，4℃下離心處理20 min，棄上清液，沉淀加0.75 mL 的 0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)，混勻，－80℃下反復(fù)凍融5次，以14 000 r/min轉(zhuǎn)速、4℃下離心處理2 h，棄沉淀，取上清液，經(jīng)MH瓊脂平板上常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陰性后于－20℃下保存。

1.3.2 ESBLs分析

按文獻(xiàn)[2]，用30 μg頭孢曲松紙片取代頭孢西丁，用36 μL酶粗提液加4 μL的2×104μmol/L鄰氯西林取代40 μL酶粗提液，其余操作同1.3.1。若觀察到狹逢與抑菌圈交接處出現(xiàn)擴(kuò)大的長菌區(qū)域，視為三維試驗(yàn)陽性，即ESBLs陽性。

2 結(jié)果

從96株大腸埃希菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株31株，檢出率高達(dá)32.29%。檢出的大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率較低(＜20%)，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率較高(＞50%)。產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性大部分高于非產(chǎn)ESBLs菌株(表1)。

表1 產(chǎn)ESBLs菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性

3 討論

隨著第3代頭孢菌素在臨床上的廣泛使用，細(xì)菌的耐藥性迅速提高，出現(xiàn)了產(chǎn)ESBLs菌株的流行。大腸埃希菌既是產(chǎn)ESBLs的主要代表菌之一，又是引起泌尿道感染的主要致病菌[1];產(chǎn)ESBLs也是大腸埃希菌對第3代頭孢菌素耐藥的主要原因。ESBLs由質(zhì)粒介導(dǎo)，底物譜廣，能水解大多數(shù)青霉素類、頭孢菌素類和單酰胺類抗生素;此外，產(chǎn)ESBLs菌的耐藥基因編碼經(jīng)常與其他抗生素的耐藥基因聯(lián)結(jié)而使耐藥機(jī)制更加復(fù)雜[3];產(chǎn)ESBLs菌還可以通過接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式使耐藥基因在細(xì)菌間傳播，造成嚴(yán)重的耐藥問題。目前按編碼基因的類型可將ESBLs基因分為4類，在美國和歐洲，主要的ESBLs屬于TEM和SHV家族;在我國，ESBLs基因以CTX－M型為主，其次為SHV型[4－5]。

本研究采用改良的酶提取物三維試驗(yàn)法在從我院尿路感染患者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌中檢出31株ESBLs，檢出率高達(dá)32.29%。本組產(chǎn)酶菌株的檢出率與國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致[6－7]。大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率均低于20%，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率均超過50%。其中，大腸埃希菌對青霉素類抗生素耐藥

率最高，這點(diǎn)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]。氟喹諾酮類曾被廣泛應(yīng)用于治療尿路感染，但近年發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對氟喹諾酮類藥物耐藥性迅速上升，且該類藥物存在明顯的交叉耐藥性，故臨床醫(yī)生在得到藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果前，不宜首選此藥[9]。氨基苷類藥物(阿米卡星)雖然敏感性較高，但因具有腎毒性、耳毒性，使用需慎重。頭孢菌素中以頭孢吡肟的抗菌作用最強(qiáng)，本組耐藥率為33.33%，原因可能是第4代頭孢菌素對β－內(nèi)酰胺酶的親和力較低，應(yīng)用時(shí)間較短，且能快速地通過細(xì)菌的外膜屏障與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合而發(fā)揮較強(qiáng)的抗菌作用。頭霉類抗生素對大腸埃希菌的抗菌活性優(yōu)于第1代、2代頭孢菌素和多數(shù)3代頭孢菌素。亞胺培南是所有被測藥物中對大腸埃希菌抗菌作用最強(qiáng)的抗生素，本組非產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南的敏感率為100%，產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南的敏感率為96.77%?？梢妬啺放嗄蠈Υ竽c埃希菌具有較強(qiáng)的抗菌作用，可作為本地區(qū)大腸埃希菌重癥感染的首選抗菌藥物。本組β－內(nèi)酰胺類加β－內(nèi)酰胺酶抑制劑氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率均低于20%，可能是由于加用β－內(nèi)酰胺酶抑制劑后提高了抗生素對大腸埃希菌所產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性，增強(qiáng)了抗菌作用[10]。

總之，對于產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的尿路感染，經(jīng)驗(yàn)用藥可選擇β－內(nèi)酰胺類加β－內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素，對重癥感染一般首選碳青霉烯類抗生素，但最好根據(jù)藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物治療。

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R915;R969.3;R978

A

1006－4931(2011)10－0028－02

李劍，男，主治醫(yī)師，從事泌尿外科臨床工作，(電子信箱)chenh1969@126.com。

2010－01－23)