陳笑冰 王小潔 麥康森 艾慶輝 張文兵 馬洪明 徐 瑋 劉付治國

添加不同種類的粘合劑對微顆粒飼料物理性狀及大菱鲆稚魚生長狀況的影響

陳笑冰 王小潔 麥康森 艾慶輝 張文兵 馬洪明 徐 瑋 劉付治國

研究了5種不同種類的粘合劑，分別為褐藻酸鈉（SA）、卡拉膠（Car）、黃原膠（Xan）、明膠（Gel）、魔芋膠（Kon）對微顆粒飼料的物理性狀如懸浮性、溶失率及大菱鲆稚魚的生長、存活及消化酶活力的影響,并以添加淀粉組（Cont）和鮮活餌料（LF）作為對照。試驗結(jié)果表明，大菱鲆稚魚終體長Gel組顯著高于Xan組和LF組，和其余各組相比差異不顯著。而在大菱鲆稚魚終重上，Gel組顯著高于Car組、Xan組、Kon組、Cont組和LF組，但和SA組相比并沒有顯著差異。在特定生長率上，Gel組顯著高于Car組、Xan組、Cont組和LF組，與Kon組、SA組差異不顯著。消化酶活力測定結(jié)果表明，Gel組和SA組在60日齡腸段和刷狀緣膜亮氨酸氨肽酶（ANP）和堿性磷酸酶（AP）比活力均顯著高于其余各組。LF組和Xan組在60日齡刷狀緣膜AP酶比活力顯著低于其他各組。根據(jù)試驗結(jié)果，明膠和褐藻酸鈉適宜作為大菱鲆稚魚微顆粒飼料的粘合劑。

微顆粒飼料；大菱鲆；稚魚；消化酶；粘合劑

粘合劑的選擇是影響微顆粒飼料效果的一個重要的因素。添加粘合劑能夠提高微顆粒飼料的穩(wěn)定性，降低溶失率。Palma等認(rèn)為，選擇合適的粘合劑應(yīng)該考慮到微顆粒飼料需要維持穩(wěn)定性的長短、粘合劑的價格、有無適宜的生產(chǎn)設(shè)備與條件、保證全面的營養(yǎng)需求等因素。沒有一種粘合劑能夠在所有品種中均表現(xiàn)優(yōu)良。Takeuchi建議使用卡拉膠和玉米蛋白作為粘合劑。玉米醇溶蛋白和藻酸鹽做粘合劑的微顆粒飼料在大眼鰣鱸（Stizostedion vitreum）中表現(xiàn)出較高的攝取率，但略低于生物餌料，而卡拉膠、淀粉、羧甲基纖維素做粘合劑的微顆粒飼料則不能被很好的攝取。玉米醇溶蛋白和藻酸鹽可以被澳洲肺魚（Lates calcarifer）仔魚很好的攝取，但吸收效率不高，而卡拉膠和明膠攝取率顯著低于前兩者，但可以被更好的消化吸收[4]。卡拉膠作粘合劑不能被鱘魚（Acipenser transmontanus）仔魚很好的消化。本試驗微顆粒飼料以褐藻酸鈉、卡拉膠、黃原膠、明膠、魔芋膠作為粘合劑，研究不同種類粘合劑對微顆粒飼料的穩(wěn)定性和大菱鲆稚魚生長存活狀況以及消化酶活力的影響，并以此評價適宜作為大菱鲆稚魚微顆粒飼料的粘合劑。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料（見表1）

表1 微顆粒飼料配方及營養(yǎng)成分（%）

以白魚粉、蝦粉、魷魚粉、魚肉水解蛋白、啤酒酵母作為微顆粒飼料的蛋白源，以魚油和大豆卵磷脂作為脂肪源，并加入復(fù)合維生素、復(fù)合無機鹽、誘食劑，分別添加占飼料質(zhì)量2%的褐藻酸鈉（SA）、卡拉膠（Car）、黃原膠（Xan）、明膠（Gel）、魔芋膠（Kon）為粘合劑制作5種基本等氮、等能的試驗微顆粒飼料，以無添加粘合劑組（Cont）和投喂鹵蟲無節(jié)幼體的生物餌料組（LF）作為對照，所有飼料原料經(jīng)超微粉碎，微顆粒飼料參照Blair的方法制作，篩分成兩種大小的粒徑，25～30 日齡大菱鲆稚魚投喂粒徑為 150～250 μm，30日齡后投喂粒徑為250～425 μm，所有微顆粒飼料置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗魚苗及飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗于萊州明波水產(chǎn)有限公司試驗場地進行。試驗用魚苗為該廠10月份人工繁育的第二批25日齡大菱鲆稚魚，初始體重為（48.47±10.9）mg。試驗開始時從同一育苗池中挑選大小適中、外觀正常、體質(zhì)健壯和活力好的魚苗630尾，隨機分成21組，每組30尾，分別放于21個40 L的玻璃鋼養(yǎng)殖桶內(nèi)。試驗所用天然海水經(jīng)室外蓄水池沉淀，二級砂濾池過濾，進育苗池前再經(jīng)殺毒處理。試驗期間，水溫（16±1）℃，pH值7.8～8.1,鹽度25‰～30‰，每桶設(shè)一個充氣石進行微充氣，養(yǎng)殖循環(huán)系統(tǒng)采用長流水，每天換水量600%～800%。用白熾燈作光源，光照強度100～200 lux。養(yǎng)殖試驗持續(xù)35 d。

大菱鲆魚苗自3～15日齡投喂L型輪蟲，12～32日齡投喂鹵蟲無節(jié)幼體，自25日齡試驗開始投喂微顆粒飼料，馴化一周至32日齡停止投喂鹵蟲無節(jié)幼體（90%以上攝食飼料）,其間逐漸減少鹵蟲的投喂量，LF對照組一直投喂鹵蟲無節(jié)幼體至試驗結(jié)束。

從25～60日齡每天手工過量投喂微顆粒飼料7 次（7:30、10:00、12:30、15:00、17:30、20:00、22:30），用虹吸管吸底清除殘餌、糞便，并及時撇除水面漂浮的污物，及時清除死苗并計數(shù)。

1.3 取樣和解剖

試驗開始時，于早上投喂之前，從同一育苗池中隨機取25日齡大菱鲆魚苗100尾，用游標(biāo)卡尺測量初體長，用分析天平稱量體濕重，冷凍于液氮中用于體組成和消化酶活力分析。試驗結(jié)束后，取各試驗桶中存活的全部60日齡大菱鲆測量其體長和體濕重后立即冷凍于液氮中，用于體組成和消化酶活力分析。液氮中的樣品隨后保存于-80℃下備用。分析消化酶活力時，按照Ribeiro和Zambonino Infante的方法，將魚苗樣品放在0℃的冰上，在顯微鏡下解剖以得到所需的胰腺段和腸段。

1.4 分析方法

飼料和魚體樣品在105℃下烘干至恒重以測定干物質(zhì)含量。氮（N）、脂肪和灰分的分析按照AOAC的方法進行。蛋白含量根據(jù)N×6.25計算得到。

酶活力用紫外可見分光光度計（Shimadzu，UV-2401PC）進行分析。先將樣品用5倍體積（v/w）的0℃蒸餾水勻漿。胰蛋白酶活力的分析按照Holm等（1988）的方法，用Nα-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide（BAPNA，B-4875，Sigma）作底物。淀粉酶活力按照Métais等（1968）的方法測定，用碘溶液顯示未水解的淀粉（S-9765，Sigma）。堿性磷酸酶和亮氨酸-氨肽酶酶活力按照Bessey等（1946）和Maroux等（1973）的方法測定。酶活力用比活力表示（mU/mg蛋白）。蛋白濃度的測定參照Bradford的方法，用牛血清蛋白（BSA，A-2153，Sigma）作底物。腸道刷狀緣的分離按照Cahu等（1994）的方法。

1.5 微顆粒飼料物理性狀測定

1.5.1 微顆粒飼料的水穩(wěn)定性

微顆粒飼料的水穩(wěn)定性的測定結(jié)合美國飼料工業(yè)協(xié)會和中國農(nóng)科院飼料研究所楊俊成等（2000）的方法。取微顆粒飼料8 g，置于200目的篩網(wǎng)之上均勻鋪開，緩慢地放入溫度27℃，盛有40 L去離子水的玻璃容器中，分別浸泡 5 min、10 min、30 min 和 60 min，在不同浸入時間將篩網(wǎng)取出，干燥，稱重，計算干物質(zhì)保留率。每組飼料設(shè)3個重復(fù)。水中穩(wěn)定性即為最終干物質(zhì)重量占初始干物質(zhì)重量的百分比。

1.5.2 微顆粒飼料的容重

第三，微課應(yīng)用培養(yǎng)學(xué)生思維能力.高中數(shù)學(xué)教學(xué)當(dāng)中在應(yīng)用微課的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)學(xué)生思維能力.數(shù)學(xué)知識的學(xué)習(xí)中對學(xué)生思維能力有著很高要求，在多媒體技術(shù)的應(yīng)用下剖析幾何部分知識內(nèi)容，學(xué)生抽象思維能力以及邏輯思維能力難以瞬間完成，在微課的運用下來對幾何部分內(nèi)容分門別類的講解剖析就比較重要.如在教學(xué)當(dāng)中講述到點線面間位置關(guān)系的時候，就要通過微課的應(yīng)用，將相應(yīng)的知識點動態(tài)地以及空間化地呈現(xiàn)給學(xué)生，這就能方便學(xué)生直觀的觀察，對培養(yǎng)學(xué)生思維能力以及抽象能力就比較有利.

微顆粒飼料顆粒的容重測定方法是由粉狀飼料的測定方法派生而來。測定時，在50 ml量筒中倒?jié)M飼料顆粒，將其超出量筒上邊緣的顆粒用直尺削平。在裝入飼料顆粒時，不斷蹾實避免在量筒內(nèi)出現(xiàn)較大空隙。然后稱量量筒內(nèi)所裝飼料質(zhì)量（M）。M與體積V之比即為微顆粒飼料容重。每組飼料測5個重復(fù)，去掉最低值和最高值，余3個取平均值并進行統(tǒng)計。

1.5.3 微顆粒飼料的沉降速度

微顆粒飼料的沉降速度采用楊俊成等描述的方法。沉降速度是指飼料顆粒從水體表面向一定深度移動的速度。在直徑為6 cm、容積1 L的量筒中加入除氣蒸餾水，取幾粒飼料預(yù)先在除氣蒸餾水中浸泡1 min，然后用吸管將飼料顆粒放在水柱的凹液面的最低處，用秒表記錄飼料顆粒下沉40 cm所用的時間，精度為0.01 s。如此重復(fù)30次。下沉距離（40 cm）與30次平均下沉?xí)r間的比值即為沉降速度。

1.6 計算公式和統(tǒng)計方法

式中：Wf和Wi——試驗終末和初始魚苗的平均濕體重（mg）；

Nf——試驗終末魚苗的尾數(shù)；

L——試驗終末魚苗平均體長（cm）；

d——試驗天數(shù)（d）。

2 結(jié)果

2.1 大菱鲆稚魚存活和生長狀況（見表2）

試驗結(jié)果表明，各組成活率并沒有顯著差異（P＞0.05）。在60日齡試驗結(jié)束時，大菱鲆稚魚終體長Gel組顯著高于Xan組和LF組，和其余各組相比差異不顯著（P＞0.05）。而在大菱鲆稚魚終重上，Gel組顯著高于Car組、Xan組、Kon組、Cont組和LF組，但和SA組相比并沒有顯著差異（P＞0.05）。在特定生長率上，Gel組顯著高于Car組、Xan組、Cont組和LF組，和Kon組、SA組相比差異不顯著（P＞0.05）。LF組顯著低于各飼料組。肥滿度SA組、Kon組、Xan組、Gel組、Cont組之間差異不顯著（P＞0.05），SA 組、Kon組顯著高于Car組、LF組。生物量LF組顯著低于Gel組、SA組、Kon組、Car組和Cont組，但與Xan組相比差異不顯著。

表2 60日齡大菱鲆稚魚各處理組成活率和生長狀況（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n=3）

2.2 微顆粒飼料物理性狀

2.2.1 微顆粒飼料水穩(wěn)定性（見表3）

表3 微顆粒飼料水穩(wěn)定性（%）

各組隨著入水時間延長，干物質(zhì)保留率均呈下降趨勢。入水時間達到60 min時，Xan組干物質(zhì)保留率最高，顯著高于其余各組，Cont組干物質(zhì)保留率顯著低于其它各組，溶失率最高，其他各組差異不顯著。

2.2.2 微顆粒飼料的容重和沉降速度（見表4）

在粒徑為 150～250 μm范圍內(nèi)時，Kon組沉降速度最高，顯著高于其它各組（P＜0.05），其余各組差異不顯著（P＞0.05）；在顆徑 250～425 μm 范圍內(nèi)，Kon 組顯著高于 Xan 組、Cont組、Car組（P＜0.05），與 Gel組、SA 組相比差異不顯著（P＞0.05）。顆徑250～425 μm 范圍內(nèi)Kon組容重顯著高于Xan組、Cont組，與SA組、Gel組、Car組差異不顯著（P＞0.05）。

表 4 微顆粒飼料沉降速度（150～250 μm、250～425 μm）和容重（250～425 μm）

2.3 大菱鲆魚魚體組成和消化酶活性（見表5、表6、表 7、表 8）

大菱鲆稚魚體蛋白Gel組和SA組顯著高于Cont組、Car組、Xan組、LF組，與Kon組相比差異不顯著，粗脂肪與灰分成分，各組之間沒有顯著差異。

表5 各處理組60日齡大菱鲆稚魚體組成成分（%）

表6 各處理組大菱鲆稚魚胰蛋白酶活性和胰淀粉酶活性

表7 各處理組大菱鲆稚魚腸段和腸刷狀緣亮氨酸氨肽酶活性

表8 各處理組大菱鲆稚魚腸段和腸刷狀緣堿性磷酸酶活性

消化酶活力測定結(jié)果表明，60日齡大菱鲆稚魚胰蛋白酶活性各組之間沒有顯著差異，在60日齡胰淀粉酶活性上，LF組與Xan組沒有顯著差異，但顯著低于其余各組。試驗結(jié)果表明，Gel組和SA組在60日齡腸段和腸刷狀緣膜亮氨酸氨肽酶（ANP）和堿性磷酸酶（AP）比活力均顯著高于其余各組，LF組和Xan組在60日齡腸刷狀緣膜AP酶比活力顯著低于其他各組，LF組在60日齡腸刷狀緣膜 ANP酶比活力與Xan組無顯著差異，但兩者顯著低于其他各組。

3 討論

由于微顆粒飼料有較高的比表面積，導(dǎo)致當(dāng)其浸入水中時營養(yǎng)物質(zhì)迅速溶失。因此，高效的微顆粒飼料不僅要有全面的營養(yǎng)以最大程度保證仔稚魚的生長發(fā)育，而且應(yīng)當(dāng)能有效的保證其營養(yǎng)物質(zhì)的低溶失率，并且其理化特征有利于仔稚魚的攝食和消化吸收。采用粘合劑形式的微粘合飼料最大的優(yōu)點是其工藝簡單經(jīng)濟，沒有使用潛在的有毒化學(xué)成分，因此應(yīng)用最為廣泛。粘合劑的種類不僅影響微顆粒飼料的穩(wěn)定性和營養(yǎng)物質(zhì)的溶失，并且能夠影響其適口性和可消化性。

微顆粒飼料隨著浸入水中時間的延長，其干物質(zhì)保留率呈下降趨勢。Cont組顯著低于其它各組，說明粘合劑的加入能有效地提高微顆粒飼料的水穩(wěn)定性。Xan組微顆粒飼料穩(wěn)定性較好，原因可能是由于其與淀粉能形成凝膠并且在低濃度下就能表現(xiàn)出較高的粘度，促進了微顆粒飼料的粘合性。Gel組入水5 min時干物質(zhì)即顯著降低，并沒有影響微顆粒飼料的使用效果，可能是其適度溶失起到了誘食作用，60 min除Xan組和Cont組外，各組差異不顯著。微顆粒飼料的容重能在一定程度上反應(yīng)其密度，Kon組懸浮性較差可能是由于其容重較大的緣故。

根據(jù)研究結(jié)果，使用明膠（Gel）和褐藻酸鈉（SA）做粘合劑的微顆粒飼料生長狀況較好，Car組末體重和SGR均顯著低于Gel組，在肥滿度上顯著低于SA組，其原因可能是由于卡拉膠做粘合劑適口性較差，同時阻礙了大菱鲆稚魚對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，這與Gawlicka等在鱘魚 （Acipenser transmontanus）仔魚和Guthrie等在大眼鰣鱸（Stizostedion vitreum）仔魚中的研究結(jié)果相同。Baskerville-Bridges在鱈魚（Gadus morhua）仔魚中卡拉膠微顆粒飼料的生長結(jié)果也不理想。魔芋膠Kon組在末體重顯著低于Gel組，可能是由于其和淀粉形成的三維矩陣結(jié)構(gòu)阻礙了大菱鲆稚魚營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。Guthrie等在大眼鰣鱸（Stizostedion vitreum）仔魚微顆粒飼料中用魔芋膠和淀粉作為粘合劑，生長效果也不理想。黃原膠組（Xan）生長狀況較差，末體重和末體長均顯著低于Gel組，SGR、生物量均顯著低于Gel組和SA組，較好的肥滿度也應(yīng)認(rèn)為是在低體重和低體長的情況下得到的，并沒有實際作用。原因可能是由于黃原膠的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)賦予了分子很好的抗性來抑制自由基、酸、酶對分子的降解，導(dǎo)致大菱鲆稚魚不能降解黃原膠，營養(yǎng)物質(zhì)難以吸收。生物餌料組的生長結(jié)果較差，其原因一方面可能由于試驗所用生物餌料營養(yǎng)成分具有不穩(wěn)定性，不能保證大菱鲆稚魚全面的營養(yǎng)需求，另一方面可能由于生物餌料和微顆粒飼料的聯(lián)合投喂促進了大菱鲆稚魚對飼料的適應(yīng)和利用。有研究表明，在對于孵化后20～39 d的仔魚使用微顆粒飼料喂養(yǎng)過程中，生物餌料的存在可以使其消化吸收顯著增強，而其中增強的蛋白質(zhì)的消化和吸收使氨基酸產(chǎn)生增加，從而促進激素的釋放，進而加速一些控制性的酶產(chǎn)生，促進消化和發(fā)育。Engrola等的研究表明，在魚開口后使用微顆粒飼料部分取代鹵蟲，對仔魚的食物攝取和蛋白利用率都有促進作用。

消化酶活力測定結(jié)果表明，60日齡胰蛋白酶及亮氨酸氨肽酶、堿性磷酸酶活性均有顯著提高，表明大菱鲆稚魚能夠順利完成變態(tài)過程。在60日齡胰淀粉酶活性上，除Xan組外，LF組顯著小于其余各飼料組，其原因可能是飼料中的淀粉成分促進了胰淀粉酶活性，而Xan組和LF組差異不顯著可能是由于黃原膠阻礙了大菱鲆稚魚對淀粉的利用率。腸刷狀緣膜酶是反映營養(yǎng)狀況的敏感指標(biāo)，反映了消化系統(tǒng)的發(fā)育狀況。Gel組和SA組在60日齡腸段和腸刷狀緣膜亮氨酸氨肽酶（ANP）和堿性磷酸酶（AP）比活力均顯著高于其余各組，表明其營養(yǎng)狀況良好，消化系統(tǒng)發(fā)育較為成熟。Xan組較低的刷狀緣ANP和AP活性也說明了黃原膠難于降解，阻礙了大菱鲆稚魚對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

4 結(jié)論

根據(jù)試驗結(jié)果，明膠和褐藻酸鈉適宜作為大菱鲆稚魚微顆粒飼料的粘合劑，黃原膠雖然在干物質(zhì)保留率上結(jié)果最好，但其不適合作為大菱鲆稚魚微顆粒飼料的粘合劑。大菱鲆稚魚25～60日齡單獨投喂生物餌料生長結(jié)果不好，需要和微顆粒飼料進行聯(lián)合投喂。

Effects of different binders on physical properties of microdiets and growth status of larval turbot,scophthalmus maximus

Chen Xiaobing,Wang Xiaojie,Mai Kangsen,Ai Qinghui,Zhang Wenbing,Ma Hongming,Xu Wei,Liufu Zhiguo

The effects of five different types of binders,sodium alginate（SA）,xanthan（Xan）,gelatin（Gel）,carrageenan（Car）,konjac gum（Kon）,on growth status and vitality of digestive enzyme of laval turbot（Scophthalmus maximus）were studied in this report.Feeding trials results show that the body length of fish fed with Gel group was significantly higher than that of Xan group and LF group.The final weight of fish fed with Gel group was significantly higher than Xan,Car,Kon,Cont and LF groups,but has no significant difference compared with SA group.To the specific growth rate,the Gel group was significantly higher than that of Xan,Car,Cont and LF groups,but has no significant difference compared with SA and Kon groups.Digestive enzymes activity testing indicated that the 60-day age lavae fed with Gel group and the SA group were significantly higher than the other groups in Leucine aminopeptidase（ANP）and alkaline phosphatase（AP）specific activity of intestine and brush border.60-day age lavae fed with LF group and Xan group were significantly lower than the other groups in brush border membrane AP enzyme specific activity.Based on the experimental results,two types of binders,Gel and SA were suitable as the binders of microdiets of turbot.

microdiet；scophthalmus maximus；larvae；digestive enzymes；binder

S816.7

A

1001-991X（2011）10-0006-05

陳笑冰，中國海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，教育部海水養(yǎng)殖重點實驗室，266003，山東省青島市魚山路5號。

王小潔、麥康森（通訊作者）、艾慶輝、張文兵、馬洪明、徐瑋、劉付治國，單位及通訊地址同第一作者。

2011-03-14

項目來源：國家鲆鰈類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系[nycytx-50-G07]資助

27篇，刊略，需者可函索）

（編輯：沈桂宇，guiyush@126.com）