李 乾，靳 珅

(1.山西醫(yī)科大學(xué)口腔臨床醫(yī)學(xué)，山西太原030001；2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006)

高效液相色譜法是20世紀(jì)70年代開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的高效、快速、適應(yīng)面廣的分析分離技術(shù)，因其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物的含量測(cè)定、組成分析、質(zhì)量控制等方面。高效液相色譜法由于儀器化程度高、分離效能高、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，非常適合一些成分復(fù)雜藥物的分離分析和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖庫(kù)的建立，特別是那些具有某種生物活性的物質(zhì)，該方法提供了非常合適的分離分析環(huán)境，逐漸成為藥物分析的主導(dǎo)方法。

藥物分析是運(yùn)用化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)以及微生物學(xué)方法和技術(shù)來(lái)研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑質(zhì)量的一門(mén)學(xué)科[1]。藥物分析在生產(chǎn)、教學(xué)與科研、藥品質(zhì)量與安全等領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。

生化藥物是指在生物化學(xué)研究成果的基礎(chǔ)上，利用生物體中起重要作用的各種基本物質(zhì)，通過(guò)一定的提取、分離、純化等手段研制出的具有生物活性的物質(zhì)，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶、多糖、核苷酸和生物堿等[2]。

1 應(yīng)用進(jìn)展

隨著生化藥物研究的不斷發(fā)展，高效液相色譜的優(yōu)勢(shì)也逐漸突顯出來(lái)，近幾年國(guó)內(nèi)外在生化藥物分析中，應(yīng)用到高效液相色譜的例子屢見(jiàn)不鮮。

朱艷琴等[3]用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定了復(fù)方金銀花顆粒中的3種活性成分——中綠原酸、黃芩苷和連翹苷的含量。他們采用Hypersil ODSC18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5μm)，流動(dòng)相為乙腈(A)-0.2%冰醋酸水溶液(B)采用梯度洗脫(0～10 min，A 15%～25%；10～20 min，A 25%～40%；20～35 min，A 40%～60%)，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流速1.0 mL/min。得到結(jié)論：高效液相色譜法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)新好，可有效控制復(fù)方金銀花顆粒的質(zhì)量。

現(xiàn)將200901-201103期間我國(guó)學(xué)者在生化藥物分析上關(guān)于新應(yīng)用和新方法的文章列在表1內(nèi)。

表1 國(guó)內(nèi)HPLC分析生化藥物進(jìn)展(200901-201103)

續(xù)表1

在國(guó)外，Alaerts等[24]通過(guò)檢測(cè)甘草、鼠李、姜黃和朝鮮薊4種中草藥,提出了用C18整體柱為固定相建立指紋圖譜的方法，是高效液相色譜應(yīng)用的一大創(chuàng)新。Ko¨rner等[25]從秋水仙種子的浸膏制劑中將秋水仙堿和一些其他相關(guān)生物堿以及它們的降解產(chǎn)物分離出來(lái)。使得包括秋水仙堿在內(nèi)的生物堿不用將其衍生化就能迅速分離。并且有極好的線(xiàn)性、精密度和低定量限。Schmidt等[26]用硅膠整體柱成功測(cè)定了魔鬼爪中的環(huán)烯醚萜苷成分哈帕酯苷，采用該方法使藥物生物分析時(shí)間更短，對(duì)于魔鬼爪的提取物及其藥物制劑的商業(yè)質(zhì)量控制有非常大的價(jià)值。

2 展望

高效液相色譜法已經(jīng)是目前公認(rèn)的時(shí)間最短、效能較高的藥物分析方法，但是隨著該方法應(yīng)用面的不斷拓寬和所要分析的生化藥物成分、結(jié)構(gòu)的不斷復(fù)雜化，單純的應(yīng)用高效液相色譜法已經(jīng)很難在短時(shí)間內(nèi)完成對(duì)一種或幾種生化藥物分析。在高效液相色譜本身的固定相、檢測(cè)器等方面繼續(xù)發(fā)展進(jìn)步的基礎(chǔ)上，聯(lián)用技術(shù)必將是高效液相色譜法突破瓶頸的關(guān)鍵。尤其是色譜-色譜聯(lián)用、色譜-光譜聯(lián)用、柱切換技術(shù)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等。近幾年在國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有成熟的聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用到日常的生化藥物的研究之中，例如與核磁共振、高光敏度檢測(cè)、等離子體質(zhì)譜、固相微萃取聯(lián)用等。如何使得其他剛剛起步的聯(lián)用技術(shù)更快發(fā)展，如何提高聯(lián)用技術(shù)的靈敏度和精度是以后高效液相色譜法發(fā)展的趨勢(shì)之一。

同時(shí)，人工智能的應(yīng)用也是高效液相色譜技術(shù)繼續(xù)快速發(fā)展的關(guān)鍵，現(xiàn)在相關(guān)的計(jì)算機(jī)分析軟件正在逐步完善，一些專(zhuān)家系統(tǒng)也在逐步的普及開(kāi)來(lái)，相信在不久的將來(lái)在人工智能的幫助下，高效液相色譜技術(shù)能夠時(shí)間更短、效能更好、自動(dòng)化程度更高。

中草藥是我們的國(guó)粹，高效液相色譜法用于中草藥、中藥方劑的藥物分析也將是以后該方法在藥物分析上的重要應(yīng)用。探索中草藥在不同酸堿范圍內(nèi)的效力、研究不同煎煮時(shí)間對(duì)藥效的影響、討論不同中草藥搭配的不同作用等，都是高效液相色譜法應(yīng)用的趨勢(shì)。中藥方劑一般由幾種甚至幾十種中藥材組成，化學(xué)成分非常復(fù)雜。目前我們對(duì)中藥方劑中的有效成分的認(rèn)識(shí)還相當(dāng)有限，有待開(kāi)發(fā)準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)中藥方劑質(zhì)量的分析方法。這也將是高效液相色譜法應(yīng)用的重要方向之一。

藏藥研究是我國(guó)醫(yī)藥方面上的一個(gè)并未引起太多關(guān)注的研究方向，但是藏藥的原理、功效等也是需要科研工作者探究的。高效液相色譜在藏藥的研究上，可以起到一定的作用。

高效液相色譜法作為一種十分有效的藥物分析方法，已廣泛地用于生化藥物的分析中。且隨著該技術(shù)的不斷改進(jìn)與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來(lái)越重要。

[1]楊更亮，劉海燕.高效液相色譜整體柱在藥物分離分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]，中國(guó)科學(xué)，2010，40(6)：631-640.

[2]王風(fēng)山，凌沛學(xué).生化藥物研究[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997.

[3]朱艷琴，殷勤紅.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中3種活性成分[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30(21)：1874-1875.

[4]張梅，劉靜，劉軍，等.RP-HPLC測(cè)定大鼠口服葛根后血漿中大豆苷元的含量[J].中成藥，2011，33(3)：422-425.

[5]鄒玲莉，李秋莎，韓國(guó)柱，等.離子對(duì)反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿和紅細(xì)胞中外源性磷酸肌酸及其代謝產(chǎn)物和相關(guān)三磷酸腺苷[J].分析化學(xué)，2011，39(1)：40-45.

[6]鄭新宇，鄭麗輝，謝勇平，等.巖白菜素在兔子體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33(2):206-209.

[7]代秀梅，安寧，吳健敏，等.HPLC-UV-MS方法對(duì)治療糖尿病藥品或保健品中可能非法添加的4種α-葡糖苷酶抑制劑成分的定性與定量分析[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45(3)：347-352.

8]那順朝克圖，侯揚(yáng)，尤立華，等.HPLC法測(cè)定中成藥中9種化學(xué)降糖藥的研究[J].中國(guó)藥師，2010，13(4)：465-467.

[9]許彤彤，郭慧，王邠，等.大鼠口服棉花皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷后尿液中代謝產(chǎn)物研究 [J].中國(guó)中藥雜志，2010，35(13)：2585-2589.

[10]游燕，張啟云，鄭琴,等.丹參和三七多種有效成分在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2010，21(6)：614-618.

[11]張春燕，顧健.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人血漿中亞葉酸、5-甲基四氫葉酸及甲氨蝶呤的濃度及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，45(7)：543-547.

[12]周萍，李英華，鈕靈鈴,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)蜂王漿中27種藥物殘留的同時(shí)測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29(6)：539-543.

[13]丘明明.高效液相色譜法測(cè)定功勞木中3種生物堿含量[J].藥物研究，2010，19(20)：28-30.

[14]張茉，鄭新元，董敏,等.高效液相色譜法測(cè)定七制香附丸中芍藥苷的含量[J].天津藥學(xué)，2010，22(6)：9-10.

[15]張吟，陳一農(nóng)，陳崇宏.固相萃取-高效液相色譜法分析血漿中的13種藥物[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，45(21)：1648-1651.

[16]王媛，張文韜，李斯特,等.固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定減肥功能食品中五種違禁藥物[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，41(5):873-876.

[17]龔妍春，熊向源，李資玲,等.生物素化聚乙二醇/聚乳酸納米粒子的體外主動(dòng)靶向行為[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(34)：6374-6376.

[18]馬偉光，黃之鐠，范培紅.整體固態(tài)生物轉(zhuǎn)化后三七化學(xué)成分變化的初步研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，25(10)：1683-1686.

[19]吳劍威，趙潤(rùn)懷，陳波，等.超高效液相色譜在中藥領(lǐng)域的應(yīng)用[J].中草藥，2009，40(3)：79-81.

[20]吳恒，陳禮明，張善堂，等.高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用[J].安徽醫(yī)藥，2009，13(8)：863-866.

[21]李少春,李培鋒.固相萃取-反相高效液相色譜法測(cè)定大鼠血清中的甘氨膽酸[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2009，24(1):215-218.

[22]黃莉莉，劉晶，李廷利.五味子水煎物大鼠血清中移行成分分析[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24(7)：846-848.

[23]石維，魏飛，魏睦新.中藥藥對(duì)半夏生姜分煎、合煎HPLC組分分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15(3)：4-5.

[24]Alaerts G，Matthijs N，Smeyers-Verbeke J，et al.Chromatographic fingerprint development for herbal extracts:A screening and optimization methodology on monolithic columns[J].J Chromatogr A,2007,1172(1):1-8.

[25]Ko¨rner A,Kohn S.Development and optimization of a stability indicating method on a monolithic reversed-phase column for Colchicum dry extract[J].J Chromatogr A,2005,1089(1-2):148-157.

[26]Schmidt A H.Fast HPLC for quality control of Harpagophytum procumbens by using a monolithic silica column:method transfer from conventional particle-based silica column[J].J Chromatogr A,2005,1073(1/2):377-381.