孫曉紅 李淑琴 武宇州 劉 濤 張旖晴 張 岳 魏 瑋

(中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院脾胃病科，北京 100102)

乙型肝炎病毒e抗原陰性慢性乙型肝炎與前C基因及C基因變異關(guān)聯(lián)性臨床研究

孫曉紅 李淑琴1武宇州2劉 濤 張旖晴 張 岳 魏 瑋△

(中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院脾胃病科，北京 100102)

目的 臨床觀察乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)陰性的慢性乙型肝炎(e-CHB)與前C基因及C基因變異的關(guān)聯(lián)性。方法 將慢性乙型肝炎193例進(jìn)行血清HBeAg、乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸 (HBVDNA)水平、前C基因核苷酸1896G→A點(diǎn)突變及C基因核苷酸1762堿基A→T和1764G→A聯(lián)合突變的檢測。結(jié)果 慢性乙型肝炎193例中，①HBeAg陰性70例(36.27%)，HBeAg陽性123名(63.73%)。②HBeAg陰性前C基因變異率76%，HBeAg陽性前C基因變異率31%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HBeAg陰性C基因變異率51%，HBeAg陽性C基因變異率30%，二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③HBeAg陽性患者中，前C基因或C基因變異群的HBV-DNA水平低于未變異群，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而HBeAg陰性患者中，前C基因或C基因變異群與非變異群比較，血清HBV-DNA水平差異比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 在e-CHB中，前C基因變異與HBeAg轉(zhuǎn)陰具有密切關(guān)系，而C基因變異與HBeAg轉(zhuǎn)陰關(guān)系不明確;前C基因和C基因變異不能增強(qiáng)病毒毒性，與疾病嚴(yán)重程度可能無關(guān)。

肝炎，乙型;慢性;肝炎e抗原，乙型;基因，病毒

乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)轉(zhuǎn)陰通常標(biāo)志著病毒 復(fù)制的中止和臨床病情的減輕，然而一些HBeAg陰性患者仍有高病毒血癥和活動(dòng)性肝炎表現(xiàn)，并常伴有前C基因或C基因變異。2010-01—2010-12，我們通過臨床觀察慢性乙型肝炎 (chronic hepatitis B，CHB)193例血清HBeAg、乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸 (HBV-DNA)水平、前C基因變異及C基因變異的檢測結(jié)果，研究前C基因及C基因變異與HBeAg陰性的CHB(e-CHB)相關(guān)性，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照“慢性乙型肝炎防治指南”(2010年版)［1］。

1.2 一般資料 193例均為河北肝病醫(yī)院門診患者。男125例，女89例;年齡5～73歲;病程6～33個(gè)月;乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)均陽性，丙肝抗體均陰性。

1.3 檢測方法 取清晨空腹肘靜脈血液，保存在-80℃。采用全自動(dòng)生化分析儀(7080型，日立HITACHI公司)，檢測HBeAg;HBV-DNA試劑盒由廈門安普利生物工程有限公司提供，使用熒光定量(PCR)方法進(jìn)行檢測(檢測范圍在4×102～4×107copies/mL之間，HBV-DNA水平≥1×108copies/mL的標(biāo)本使用HBV陰性血清稀釋后再進(jìn)行檢測)，前C基因核苷酸1896G→A點(diǎn)突變用短序列測序試劑盒(由安捷倫科技公司提供)檢測，結(jié)果用變異百分比率表示［2］;C基因核苷酸1762堿基A→T和1764G→A聯(lián)合突變的檢測采用乙型肝炎病毒(HBV)核心啟動(dòng)子變異檢測試劑盒(由安捷倫科技公司提供)檢測［2］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn);率的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 HBeAg檢測結(jié)果 193例中，HBeAg陰性 70例(36.27%)，HBeAg陽性 123 例(63.73%)。HBeAg 陰性患者平均年齡34歲，男女比例39∶31;HBeAg陽性患者平均年齡26歲，男女比例86∶37。

2.2 前C基因、C基因變異與HBeAg的關(guān)系 HBeAg陰性患者前C基因變異76%，HBeAg陽性患者前C基因變異31%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HBeAg陰性患者C基因變異51%，HBeAg陽性患者C基因變異30%，二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 C基因變異與HBV-DNA水平的關(guān)系 HBeAg陽性患者中，C基因變異群HBV-DNA水平(6.0 Log copies/mL)低于未變異群(7.0 Log copies/mL)，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HBeAg陰性患者中，C基因變異群HBV-DNA水平(4.6 Log copies/mL)低于未變異群(4.8 Log copies/mL)，但差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.4 前C基因變異與HBV-DNA水平的關(guān)系 HBeAg陽性患者中，前C基因變異群HBV-DNA水平(8.0 Log copies/mL)低于未變異群(8.9 Log copies/mL)，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HBeAg陰性患者中，前C基因變異群HBV-DNA水平(4.8 Log copies/mL)低于未變異群(5.0 Log copies/mL)，但差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

C基因區(qū)由前C基因和C基因組成，分別負(fù)責(zé)編碼HBeAg及乙型肝炎病毒C抗原(HBcAg)。前C基因變異會(huì)導(dǎo)致HBeAg表達(dá)減少或終止，臨床表現(xiàn)為HBeAg轉(zhuǎn)為陰性，但病毒仍處于活動(dòng)狀態(tài)，目前被稱為HBeAg陰性的慢性乙型肝炎(e-CHB)。

臨床觀察結(jié)果表明本組慢性乙型肝炎患者中，e-CHB占總體36%，遠(yuǎn)比相關(guān)報(bào)道的69%低［3］，可能與實(shí)驗(yàn)患者平均年齡較低有關(guān)。有研究表明e-CHB患者中高HBV-DNA水平可能與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，因此應(yīng)進(jìn)行抗病毒治療，有報(bào)道拉米夫定對(duì)e-CHB患者有較好療效［3］，但仍需進(jìn)一步研究。

HBeAg陰性患者前 C基因變異76%，顯著高于HBeAg陽性患者前C基因變異的31%，而C基因變異二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明前C基因變異與HBeAg轉(zhuǎn)陰具有密切關(guān)系，而C基因變異與HBeAg轉(zhuǎn)陰關(guān)系不明確。

在HBeAg陰性患者中，前C基因或C基因變異群與非變異群比較，血清HBV-DNA水平差異比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明前C基因、C基因變異在HBeAg陰性患者中并不能增強(qiáng)HBV-DNA毒性。而在HBeAg陽性患者中，前C基因或C基因變異群的HBV-DNA水平低于未變異群，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說明在HBeAg陰性患者中，前C基因或C基因變異與疾病嚴(yán)重程度可能無關(guān)，也不會(huì)增強(qiáng)病毒復(fù)制的毒性。

有報(bào)道HBeAg陰性的患者中，前C基因、C基因都變異的HBV-DNA水平顯著低于只有前C基因或C基因變異患者［4］，因此可以認(rèn)為前C基因變異如果與C基因變異同時(shí)發(fā)生，可能會(huì)導(dǎo)致HBV-DNA水平降低。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)［J］.中華肝臟病雜志，2011，19(1):13-24.

［2］Aritomi T，Yatsuhashi H，F(xiàn)ujino T，et al.Association of mutations in the core promoter and precore region of h.0epatitis virus with fulminant and severe acute hepatitis in Japan［J］.J Gastroenterol Hepatol，1998 ，13(11):1125-1132.

［3］Chun YK，Kim JY，Woo HJ，et al.No significant correlation exists between core promoter mutations，viral replication，and liver damage in chronic hepatitis B infection.［J］.Hepatology，2000，32(5):1154-1162.

［4］Lin CL，Liao LY，Liu CJ，et al.Hepatitis B genotypes and precore/basal core promoter mutants in HBeAg-negative chronic hepatitis B［J］.J Gastroenterol，2002，37(4):283-287.

Clinical investigation of association of mutations in the core promoter and precore region of HBeAg negative chronic hepatitis B

SUN Xiaohong*，LI Shuqin，WU Yuzhou，et al.*Division if Digestive Diseases，Wangjing Hospital of China Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing100102

ObjectiveTo investigate the association of mutations in the core promoter and precore region of HBeAg negative chronic hepatitis B.MethodsSerum HBeAg，HBC-DNA，mutations in the core promoter and precore region in 193 patients with chronic hepatitis B were detected using enzyme-linked mini-sequence assay kit and HBV core promote r mutation detection kit Results There were 123(63.73%)HBeAg-positive and 70(36.27%)HBeAg-negative patients.HBeAg-negative patients had significantly lower HBV DNA levels compared with the HBeAg-positive patients(mean 5.0 to 8.3 Log copies/mL，P＜0.05).The precore mutation rate was significant higher in HBeAg-negative patients than that in HBeAg-positive patients(76%to 30%，P＜0.05)but there was no significant difference on the core promoter mutation rate between HBeAg-negative and positive patients(51%to 30%，P＞0.05).In HBeAg-negative group，patients with precore or core promoter mutations had a lower serum HBV DNA level compared with that in the patients with wild type(P＜0.05)but in HBeAg-positive group there was no significant difference between the patients with mutation type and wild type(P＞0.05).ConclusionPrecore mutation may be associated with HBeAg seroconversion but core promoter mutation is not associated with it.The precore mutation and core promoter mutation cannot enhance virulence，and maybe not related to disease severity.

Chronic hepatitis B;Genetype;Precore gene;Core promoter

R373;R373.21;R392.11

A

1002-2619(2011)09-1424-02

△通訊作者:中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院脾胃病科，北京 100102

1 河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理教研室，河北 石家莊050011

2 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心血管內(nèi)科，河北 石家莊 050071

孫曉紅(1974—)，女，主治醫(yī)師，博士。從事消化內(nèi)科臨床工作。

2011-03-18)