苗方，孫思習，安云，王衛(wèi)華，彭婷婷

（菏澤醫(yī)學專科學校，山東 菏澤 274000）

反相高效液相色譜分析牡丹皮中丹皮酚含量變化

苗方，孫思習，安云，王衛(wèi)華，彭婷婷

（菏澤醫(yī)學?？茖W校，山東 菏澤 274000）

目的 利用反相高效液相色譜法（RP-PLC）對菏澤產地牡丹皮中丹皮酚含量進行分析。方法色譜條件C10色譜柱；丹皮酚測定所用流動相為甲醇-磷酸（60∶40），檢測波長為274 nm。結果丹皮酚的線性范圍在0.10～0.50 μg，平均回收率98.06%，RSD=1.68%。結論所選牡丹皮的丹皮酚含量為1.62%。本方法簡便、快捷、重現(xiàn)性好，適用于丹皮酚的含量測定，可作為其質量控制方法。菏澤牡丹皮中丹皮酚含量較高，有較好的藥用價值。

丹皮酚；反相高效液相色譜法；含量測定

牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，具有清熱涼血、活血化瘀之功效。牡丹皮是我國傳統(tǒng)常用中藥材，應用歷史悠久，為國內外藥材市場的重要商品，為《中華人民共和國藥典》收載藥物。牡丹根及根皮中含有丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷、丹皮酚新苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷等［1］。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓等作用。因此，丹皮酚的含量測定是牡丹皮復方制劑質量控制的主要指標之一。山東菏澤是牡丹的主產區(qū)之一。已形成以牡丹園、百花園、古今園三大園圃為主體，全市種植面積達3萬多畝、600多個品種的種植規(guī)模。本文對山東菏澤觀賞牡丹進行系統(tǒng)的含量測定研究，為牡丹皮的合理開發(fā)利用，提供依據(jù)，為其質量控制提供有效的方法。

1 材料與方法

1.1 物理性質 丹皮酚，又稱牡丹酚，主要是從蘿摩科植物徐長卿干燥根或全草和毛茛科芍藥屬植物牡丹芍藥的根皮中提取分離出來的一種活性成分，是一種小分子的酚類化合物。呈白色或微黃色有光澤的針狀結晶，無色針狀結晶（乙醇）。其分子量為166.17，分子式為C9H10O3，熔點49～51℃，氣味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在熱水中溶解，不溶于冷水，能隨水蒸汽揮發(fā)。丹皮酚可隨水蒸氣蒸餾，且在紫外光區(qū)有強烈吸收［2］。

1.2 儀器和材料 HypersilODS填料色譜柱（ID 4.6 ×250 mm）；日本島津10Avp高效液相色譜儀（LC—10ATvp雙泵，SPD—M10Avp二極管陣列檢測器，SL—10ADvp自動進樣器，CTO—10Avp柱溫箱）；丹皮酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供為含量測定；甲醇為色譜純；水為重蒸水并經0.45μm水系濾膜過濾；其余試劑均為分析純實驗材料：樣品采于菏澤牡丹園，定點于同一棵植物，采集后曬干，粉碎成細粉，裝于棕色玻璃瓶中備用

1.3 方法

1.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗：色譜柱為十烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.5%-磷酸（60：40）為流動相；檢測波長為274 nm；柱溫為室溫；流速1.0 ml/min；此條件下丹皮酚與其它組分均能達到基線分離。

1.3.2 對照品溶液的制備：取丹皮酚對照品2 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，作為對照品溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備：取本品粗品約0.5 g精密稱定，置50 ml的量瓶中，加入甲醇25ml，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液2 ml。，置25 ml的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2 結果

測定法：分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定見圖1。

圖1 丹皮酚含量測定的HPLC色譜圖a丹皮酚對照品；b牡丹皮樣品

2.1 丹皮酚的測定結果

2.1.1 丹皮酚線性范圍：精密吸取丹皮酚對照品溶液5，10，15，20，25 μl按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為橫坐標、丹皮酚量為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=24585+3427947X，C= 0.9998，表明丹皮酚在0.10 μg～0.50 μg范圍內具有良好的線性關系。

2.1.2 丹皮酚穩(wěn)定性試驗：取丹皮酚對照品溶液，于配制后的0。、2、4、8、12、20、24和48 h測定，結果表明在48 h內穩(wěn)定，峰面積的相對標準偏差RSD為1.01%。

2.1.3 重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品，按含量測定樣品溶液丹皮酚的含量。結果2.375%、2.326%、2.348%，平均為2.349%，RSD為2.24%。

2.1.4 回收率試驗：精密稱取8份丹皮藥材樣品0.5 g，分別加入相當于含丹皮酚0.75 mg、0.25 mg的對照品溶液4份，按“樣品供試液”的制備方法提取后，進行分析，測得丹皮酚的回收率分別為97.61%、98.51%，RSD為1.54%、1.83%。進行加樣法測定回收率，平均回收率98.06%，RSD=1.68%。

2.1.5 樣品分析：精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μl，按上述色譜條件測定丹皮酚的峰面積，以外標法計算丹皮酚的含量，每批樣品測定丹皮酚含量，測定結果見表1。

2.2 牡丹皮中丹皮酚含量測定結果 樣品1：丹皮酚含量為1.604%，RSD為1.33%。樣品2：丹皮酚含量為1.722%，RSD為1.40%。樣品3：丹皮酚含量為1.474%，RSD為1.73%。

3 討論

通過各種實驗條件的優(yōu)化，應用該色譜技術，建立了測定牡丹皮中丹皮酚的分析方法，具有良好的精密度和分析結果的重現(xiàn)性。通過對菏澤產地的樣品進行分析，結果表明：該地牡丹皮藥材中丹皮酚的含量結果均符合中國藥典2005年版一部牡丹皮藥材項下不得少于1.2%（即12 mg/g）的有關規(guī)定。建立了牡丹皮藥材定量分析質量控制方法，為藥材真?zhèn)舞b定、確保牡丹皮藥材質量和提高中藥制劑療效提供了依據(jù)。

據(jù)有關文獻證明：影響牡丹皮復方制劑中丹皮酚含量的因素主要有：牡丹皮藥材的產地、采收季節(jié)、貯存時間。牡丹皮在不同的采收期丹皮酚的含量也不相同［3］。以牡丹開花期含量最高，以后逐漸減少，7月后又開始逐漸回升，9月份出現(xiàn)一個高峰，然后又逐漸下降。丹皮酚在9和10月含量較高，《中國藥典》規(guī)定秋季采收。牡丹的不同藥用部位丹皮酚含量也有差異［4］經過采用高效液相色譜法對牡丹中不同部位丹皮酚含量進行分析，結果表明丹皮中以皮層含量最高，其中細根皮＞根皮＞細根＞莖皮＞葉。貯存時間及加工方法：牡丹皮貯存時間延長，則會因丹皮酚揮發(fā)而含量降低［5］。

綜上所述該實驗材料，樣品采于菏澤牡丹園，定點于同一棵植物，采集后曬干，粉碎成細粉，裝于棕色玻璃瓶中備有。經過紫外掃描法丹皮酚在274 nm有最大吸收，所以該檢測波長選擇為274 nm。

[1] 中華人們共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005年.

[2] 莊明蕊，林曉，崔麗華，等.牡丹皮質量評價分析[J].食品與藥品，2006，8（9）：56-58.

[3] 張留記，屠萬倩，屈凌波，等.不同產地牡丹皮中丹皮酚和芍藥苷含量的HPLC法測定[J].信陽師范學院學報，2007，20（2）：223-225.

[4] 柳淑玉，張彤，柳晨.丹皮酚的分析方法[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16（1）：63-64.

[5] 李海燕，陳小堅，牡丹皮中丹皮酚含量動態(tài)變化研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2001，12（5）：412-413.

HPLC analysis of content of paeonol moutan

Miao Fang，Sun Sixi，An Yun，Wang Weihua，Peng Tingting
（Heze Medical College，Heze 274000）

ObjectiveRP-HPLC of Heze Paeonol moutan origin were analyzed.Chromatographic conditions：C10 column；paeonol mobile phase used for determination of methanol-phosphate（60：40）as mobile phase，detection wavelength 274 nm.Results：The linear range of paeonol 0.10～0.50 μg the average recovery 98.06%，RSD=1.68%；conclusions paeonol moutan selected content is 1.62%.Conclusionthis method is simple，fast，and reproducible.Paeonol for the determination of its quality control methods can be used.This method was the origin of Heze Paeonol moutan were determined，the results showed that the content of Heze higher Paeonol moutan has some medicinal value.

paeonol；determination；RP-HPLC

O657.7+1;O625.31+5

A

1008-4118（2011）03-0001-02

10.3969/j.issn.1008-4118.2011.03.01

2011-03-05