任選義， 趙 衛(wèi)， 張高磊， 張延明， 呂 棟， 陳芙蓉， 滕志剛

膀胱癌是發(fā)病率最高的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)生是多基因變異累積的復(fù)雜過程，通過對(duì)癌基因或抑癌基因在膀胱癌不同發(fā)展階段的檢測(cè)，不僅可以揭示基因改變?cè)诎螂装┌l(fā)展過程中扮演的角色，還可以篩選出有臨床價(jià)值的分子學(xué)指標(biāo)［1］。轉(zhuǎn)錄因子Spl是一種DNA結(jié)合蛋白，其異?；罨c眾多腫瘤的形成有關(guān)。本研究擬采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌(transitional cell carcinoma of bladder，BTCC)、膀胱乳頭狀腫瘤及正常黏膜組織中Spl蛋白表達(dá)情況，探討其表達(dá)特征與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以期為BTCC的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供新的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集開封市第一人民醫(yī)院2004年1月至2007年12月手術(shù)切除(經(jīng)尿道腫瘤電切或膀胱全切)膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)標(biāo)本63例，入選病例均為首次發(fā)病并經(jīng)HE染色病理檢查證實(shí)，其中男48例，女15例，年齡31～82歲，平均65.7歲。根據(jù)1998版WHO組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):低分級(jí)腫瘤(G1～G2)37例，高分級(jí)腫瘤(G3～G4)26例;臨床分期以UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn):淺表腫瘤(Tis～T1)41例，浸潤性腫瘤(T2～T4)22例。所有患者均有完整的臨床、病理資料，術(shù)前均未進(jìn)行放化療和免疫治療。另取經(jīng)病理證實(shí)的21例膀胱乳頭狀瘤和13例開放手術(shù)的膀胱正常黏膜組織作為對(duì)照。

1.2 免疫組化染色 將存檔的石蠟標(biāo)本重新制備4 μm切片，行免疫組化PV-6000法染色，一抗工作液濃度為1∶200，具體操作按說明書進(jìn)行。Spl單克隆抗體(Code:H-225)購自Santa Cruz公司，非生物素標(biāo)記二抗及DAB顯色劑均購自北京中山生物技術(shù)公司。用已知的胃癌Spl陽性切片作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定方法 由兩名病理科醫(yī)師進(jìn)行盲法判讀，每例選取5個(gè)視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞核，以胞核內(nèi)有黃或棕黃色顆粒染色者為Sp1陽性細(xì)胞，參照文獻(xiàn)［2］進(jìn)行結(jié)果判定:陽性細(xì)胞所占百分比＜10%計(jì)為Sp1陰性，10% ～50%者計(jì)為Sp1陽性，＞50%為強(qiáng)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Spl表達(dá)在不同BTCC臨床、病理參數(shù)的組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s精確概率法。顯著性水準(zhǔn)а=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Spl在BTCC、乳頭狀瘤及膀胱黏膜組織中的表達(dá) 在63例BTCC中Spl蛋白陽性表達(dá)率為68.3%(43/63)，膀胱乳頭狀瘤中陽性表達(dá)率為23.8%(5/21)，正常膀胱黏膜中的陽性表達(dá)率為7.7%(1/13)。組間比較顯示，Spl蛋白在膀胱癌、乳頭狀瘤及正常膀胱黏膜組織中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.2 Spl表達(dá)特征與BTCC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 Spl蛋白陽性表達(dá)率在低分級(jí)、高分級(jí)腫瘤的組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);且隨著臨床分期的增加Spl陽性表達(dá)率升高，表淺腫瘤和浸潤性腫瘤的組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.117，P＜0.05)，具體見表 1。

表1 Sp1陽性表達(dá)與BTCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

轉(zhuǎn)錄因子Spl幾乎存在于所有組織的細(xì)胞核中，可結(jié)合并正向調(diào)控某些啟動(dòng)子中富含GC序列的細(xì)胞和病毒基因的轉(zhuǎn)錄，參與多種生理和病理過程的調(diào)控。Spl蛋白是序列特異性的DNA結(jié)合蛋白，近來研究發(fā)現(xiàn)其在腫瘤組織中的異常表達(dá)和活化可通過調(diào)節(jié)某些腫瘤生長因子和血管生成因子的基因轉(zhuǎn)錄過程，繼而調(diào)控眾多腫瘤的細(xì)胞增殖、血管生成和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移能力。如Spl可以通過與Smads蛋白形成復(fù)合物，誘導(dǎo)致瘤基因Smad7的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而參與轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)通路的調(diào)節(jié)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移［3］。一些文獻(xiàn)報(bào)道在 VEGF、survivin、bcl-2 等啟動(dòng)子區(qū)均包含Spl的結(jié)合位點(diǎn)［4-6］，過表達(dá)的Sp1可以通過上調(diào) VEGF、survivin、bcl-2的轉(zhuǎn)錄后蛋白表達(dá)，從而影響不同種類腫瘤細(xì)胞的分化、生長、侵襲或凋亡過程。

膀胱癌是一種無包膜的實(shí)體腫瘤，惡性程度通常較高，以浸潤性生長方式向周圍組織擴(kuò)展，其術(shù)后容易局部復(fù)發(fā)。目前，在國內(nèi)外有眾多關(guān)于轉(zhuǎn)錄因子Spl或者膀胱癌的研究報(bào)告并已取得豐碩成果，但尚未見Spl蛋白表達(dá)與BTCC臨床病理參數(shù)的相關(guān)報(bào)道。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)，從蛋白水平檢測(cè)Spl在膀胱移行細(xì)胞癌、乳頭狀瘤和正常黏膜組織中的表達(dá)。結(jié)果顯示在63例BTCC組織中，大多有Spl蛋白陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率顯著高于膀胱乳頭狀瘤和正常黏膜組織(P＜0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示Spl的過度表達(dá)可能與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并對(duì)膀胱內(nèi)良、惡性病變的鑒別診斷有一定參考意義。

作為一個(gè)聯(lián)系紐帶，轉(zhuǎn)錄因子Spl的上游原癌基因突變或抑癌基因失活均可能引起其表達(dá)變化，導(dǎo)致下游生長因子和細(xì)胞因子的活性失調(diào)，進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控各種細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)的傳導(dǎo)，影響腫瘤的形成［7］。本組資料發(fā)現(xiàn)，Spl蛋白陽性表達(dá)率隨BTCC的病理分級(jí)和臨床分期的升高而增高，即膀胱癌腫瘤細(xì)胞的分化越差、浸潤程度越深，轉(zhuǎn)錄因子Spl表達(dá)越發(fā)增強(qiáng)。我們認(rèn)為Spl的異?；罨透弑磉_(dá)在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展、周圍組織浸潤過程中均發(fā)揮重要作用，其機(jī)制可能是通過促進(jìn)有關(guān)的腫瘤生長因子和血管生成基因過度表達(dá)，營造了適宜腫瘤細(xì)胞生長的微環(huán)境，正向調(diào)節(jié)腫瘤增殖，使BTCC癌細(xì)胞的惡性程度增加，并使BTCC癌細(xì)胞具有易于局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。因此，Sp1蛋白可作為膀胱癌患者較好的預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)。

綜上所述，轉(zhuǎn)錄因子Spl在蛋白水平的高表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生和侵襲生長進(jìn)程密切相關(guān)，在臨床上應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)Spl蛋白表達(dá)，方法簡單且結(jié)果穩(wěn)定，易于推廣。至于是否可以將Spl蛋白的抑制劑運(yùn)用于早期BTCC患者的治療，達(dá)到干擾眾多致瘤基因的異常表達(dá)以減少癌細(xì)胞的浸潤能力，尚有待進(jìn)一步研究。

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