遲 林，李昊淼，許曉風(fēng)

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院，北京100730)

近年來糖尿病(DM)炎癥發(fā)病學(xué)說逐漸形成，認(rèn)為DM是一種自然免疫和炎癥性疾病，是代謝綜合征的重要組成。炎癥的發(fā)生與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，已有文獻(xiàn)表明2型DM(T2DM)的發(fā)病與免疫功能紊亂有關(guān)，本研究采用流式細(xì)胞測定技術(shù)檢測T2DM患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及Treg細(xì)胞的變化，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2010年3～9月在我院就診的T2DM患者120例，其中男74例、女56例，年齡35～81歲，均符合1997年美國糖尿病學(xué)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)眼科及內(nèi)科檢查，將患者分為有血管病變組68例，男39例、女29例，年齡43～81歲;無血管病變組52例，男30例、女22例，年齡37～68歲;對(duì)照組40例為我院健康體檢者，男20例、女20例，年齡20～65歲。

1.2 儀器與試劑 美國Beckman Coulter FC500流式細(xì)胞儀，CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD16+56-PE/CD3-FITC，同型對(duì)照 IgG1mouse FITC/IgG1mouse PE，CD4-PC5，CD25-PE，同型對(duì)照IgG2a mouse PE，IgG1mouse PC5，Lysing Solution，PBS均為美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有觀察對(duì)象空腹取靜脈血2 ml于EDTA-K2真空抗凝采血管內(nèi)，混勻，室溫保存。取不同熒光標(biāo)記抗體各20 μl加入100 μl抗凝外周血中，避光孵育 20min，加入 Lysing Solution 500 μl，避光孵育10min，加入PBS 500 μl避光孵育10min，1 500 r/min離心5min，洗滌2次，加入PBS 1 000 μl，上機(jī)檢測，記錄陽性細(xì)胞百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)采以±s表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

表1 T2DM患者與正常對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果(%，±s)

表1 T2DM患者與正常對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果(%，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.05

組別 n CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD4+/CD8+ CD16++CD56+/CD3－CD4+CD25+無血管病變組 52 58.44 ±7.81* 36.56 ±4.56 26.33 ±4.98* 1.31 ±0.44* 19.02 ±6.63* 9.39 ±2.12*伴血管病變組 68 57.65 ±7.35* 36.02 ±4.32 25.47 ±4.26* 1.29 ±0.52* 18.76 ±5.98* 8.99 ±2.03*對(duì)照組 40 65.93 ±6.76 37.17 ±5.81 23.66 ±3.66 1.43 ±0.42 22.46 ±6.75 10.43 ±2.07

3 討論

NK細(xì)胞被譽(yù)為天然免疫核心細(xì)胞，人類NK細(xì)胞的特征性表面標(biāo)志是CD56和CD16分子，不表達(dá)CD3分子。NK細(xì)胞無需預(yù)先致敏直接殺傷靶細(xì)胞，有清除病毒感染的生物學(xué)活性，活化的NK細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和趨化因子，如分泌INF、IL-2及TNF等，參與天然免疫和獲得性免疫。NK細(xì)胞活性降低，直接殺傷靶細(xì)胞功能下降，同時(shí)，產(chǎn)生的細(xì)胞因子減少，減弱了細(xì)胞免疫的正調(diào)節(jié)作用，抑制T細(xì)胞的增殖、分化及成熟，使得機(jī)體免疫功能降低，對(duì)炎癥的監(jiān)視及清除功能減弱。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一群具有負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)的淋巴細(xì)胞，起著維持自身耐受和避免免疫過度損傷機(jī)體的作用。細(xì)胞被認(rèn)為是天然產(chǎn)生的細(xì)胞群，它起源于胸腺，存在于正常機(jī)體內(nèi)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞具有低反應(yīng)性與免疫抑制兩大功能［4］，這些抑制功能的發(fā)揮是接觸式抑制，不是細(xì)胞因子依賴性的抑制。它對(duì)IL-2、特異性抗原及 APC的刺激呈低反應(yīng)性，活化的細(xì)胞可抑制的T細(xì)胞表達(dá)IL-2，抑制其的活化與增殖;細(xì)胞活化后CTLA-4分子表達(dá)增加，影響T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)［5］。IL-2是T細(xì)胞生長因子，當(dāng)IL-2水平降低時(shí)，Treg細(xì)胞的免疫抑制作用減弱［6］，T細(xì)胞增殖受抑制，細(xì)胞免疫功能減弱。Salomon等首次證實(shí)NOD鼠Treg細(xì)胞數(shù)目減少和功能缺陷是其進(jìn)展為DM 的重要因素［7］。

總之，T2DM患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂。由于免疫功能下降，合并各種感染的機(jī)會(huì)增加，致殘率及病死率增加，DM患者的免疫調(diào)節(jié)應(yīng)予重視，加強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的監(jiān)測對(duì)病情判斷、療效觀察有重要意義。

［1］King GL.The role of inflammatory cytokines indibetes and its complications［J］.J Periodontol，2008，79(8 Suppl):1527-1534

［2］鄧向群，陳璐璐.胰島β細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制［J］.國際內(nèi)分泌代謝雜志，2006，26(3):163-166.

［3］Joussen AM，Doehmen S，Le ML，et al.TNF-alpha mediated apoptosis plays an important role in the development of early diabetic retinopathy and long-term histopathological alterations［J］.Mol Vis，2009，15:1418-1428.

［4］Fontenot JD，Rudensky AY.A well adapted regulatory contrivance:regulatory T cell development and forkhead family transcripition factor Foxp3 ［J］.Nat Immunol，2005，6(4):331-337.

［5］Pereira FO，F(xiàn)rode TS，Medeiros YS.Evaluation of tumour necrosis factor alpha，interleukin-2 soluble receptor，nitric oxide metabolites，and lipids as inflammatory markers in type 2 diabetes mellitus［J］.Mediators Inflamm，2006，2006(1):39062.

［6］曾靜波，王姮.2型DM與自身免疫反應(yīng)［J］.國際內(nèi)分泌代謝雜志，2007，27(4):264-266.

［7］Slaomon B，Lenschow DJ，Rhee L，et al.B7/CD28 costimulation is essential for the homeostasis of the CD4+CD25+immunoregulatory T cells that control autoimmune diabetes［J］.Immunity，2000，12(4):431-440.