黎映靜,劉星海

(深圳市龍崗區(qū)橫崗人民醫(yī)院,廣東深圳 518115）

腎小管的間質(zhì)纖維化為腎臟慢性疾病的發(fā)展終歸,也是終末期腎功能出現(xiàn)衰竭的原因,其纖維化的病變程度嚴(yán)重的影響了腎功能的情況,所以尋求改善和干預(yù)其纖維化的方法有著重要的臨床意義[1]。近年來(lái)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子在纖維化的病變中作用已被肯定,被稱為纖維化的發(fā)展的重要決定因子[2],而綠茶中的兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG）抗氧化的作用最為有效,是重要的非酶抗氧化劑。本文通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法分析了EGCG對(duì)大鼠的神纖維化的保護(hù)作用和機(jī)制,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 對(duì)象和材料選取30只雄性SD大鼠為研究對(duì)象,隨機(jī)分為3組,假手術(shù)組、梗阻組、ECGC組各10只,3組大鼠術(shù)前體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,均證實(shí)為健康大鼠。TGF-β免疫化試劑盒購(gòu)自上海豐翔生物科技有限公司,EGCG試劑為本實(shí)驗(yàn)室自行提供。

1.2 模型制作梗阻組及EGCG組行單側(cè)的輸尿管結(jié)扎術(shù),乙醚對(duì)大鼠麻醉之后,75%的乙醇消毒,腹正中偏左切口,切開(kāi)皮膚及腹腔,對(duì)腎臟及輸尿管游離,組織鉗托起左側(cè)輸尿管的中段,以止血鉗夾住后,4-0絲線自兩端行結(jié)扎,結(jié)扎部位在腎盂的近端及遠(yuǎn)端。兩結(jié)扎點(diǎn)中點(diǎn)行剪斷,之后縫合皮膚。假手術(shù)組采用相同入路分離輸尿管,但不行結(jié)扎。假手術(shù)組及梗阻組在術(shù)前1 d生理鹽水灌胃,EGCG組給予EGCG灌胃,劑量均為20 mg/(kg?d）,連續(xù) 3 d。EGCG組術(shù)后第7 d同劑量EGCG注射液靜脈注射。

1.3 檢測(cè)方法術(shù)前,術(shù)后2 d、4 d、6 d、8 d測(cè)量大鼠體重、血肌酐值、24 h尿蛋白量、尿糖定性。術(shù)后8 d處死大鼠后左腎組織HE染色分析腎組織纖維化情況,免疫組化法測(cè)定隨即10高倍鏡的視野內(nèi)免疫組化(+）的計(jì)數(shù),半定量分析以(+）細(xì)胞數(shù)在視野中的平均百分比計(jì)算[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)均用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包進(jìn)行處理。計(jì)量數(shù)據(jù)以x-±s表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用 χ2檢驗(yàn)。且P＜0.05為對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 體重改變3組大鼠術(shù)前及術(shù)后8 d內(nèi)體重變化情況見(jiàn)表1,組內(nèi)比較,術(shù)前及術(shù)后8 d各組間體重變化均用統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05）,組間比較,3組大鼠術(shù)前體重?zé)o明顯差異(P＞0.05）,術(shù)后8 d,假手術(shù)組體重＞ECGC組＞梗阻組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 3組大鼠術(shù)前及術(shù)后8 d內(nèi)體重變化情況(x-±s,g）

2.2 TGF-β 比較3 組大鼠腎間質(zhì) TGF-β(+）細(xì)胞計(jì)數(shù)比較見(jiàn)表2,由此可見(jiàn)3組大鼠中EGCG組TGF-β表達(dá)明顯低于梗阻組,而EGCG組低于假手術(shù)組,差異均用統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05）。

2.3 病理學(xué)差異術(shù)后第8天HE染色顯示可見(jiàn)假手術(shù)組的結(jié)構(gòu)維持正常,其腎間質(zhì)未見(jiàn)明顯改變,腎小管的上皮細(xì)胞整齊排列,保持完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),小管間的間隙緊密,其小管的間質(zhì)未見(jiàn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),基底膜顯示光滑連續(xù);梗阻組的間質(zhì)存在大量的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),纖維組織明顯增生,腎小管部分萎縮,管腔出現(xiàn)閉塞或者擴(kuò)張及壞死,小管的基底膜出現(xiàn)不同程度的斷裂及增厚,且小管壁明顯變薄,小管的上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞;EGCG組的間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),纖維組織輕微增生,其腎小管的擴(kuò)張較輕,腎小球萎縮輕,且腎小囊有所擴(kuò)張,保留了部分正常小管及小球結(jié)構(gòu)。

表2 3組大鼠腎間質(zhì)TGF-β(+）細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(x-±s,%）

3 討論

慢性的腎病的在進(jìn)展中的病理變化主要表現(xiàn)在腎小球的硬化、腎小管的萎縮以及腎間質(zhì)的纖維化,其中腎功能損害的程度和腎臟的纖維化的病變程度有著重要的關(guān)系[4]。在慢性腎病所引發(fā)的腎小管的上皮細(xì)胞凋亡及腎間質(zhì)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維細(xì)胞聚集的過(guò)程中,均有著較多的促纖維化因子參與,細(xì)胞外的基質(zhì)生成逐步增多、而降解度則明顯減少,從而產(chǎn)生了腎間質(zhì)的纖維化,腎功能也就出現(xiàn)了嚴(yán)重的受損。TGF-β各器官的組織纖維化過(guò)程之中發(fā)揮著重要作用,目前大多數(shù)的學(xué)者認(rèn)為其是纖維化的形成和發(fā)展啟動(dòng)樞紐[5],為關(guān)鍵性的細(xì)胞因子,特別是腎間質(zhì)的纖維化的程之中TGF-β起著重要的作用,其可以促進(jìn)腎小球的系膜細(xì)胞出現(xiàn)大量增殖,系膜的基質(zhì)出現(xiàn)沉積,并誘導(dǎo)了腎小管的上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)分,從而在參與到腎間質(zhì)的纖維化的進(jìn)程之中。

茶多酚是從為茶葉內(nèi)提取的天然的多酚類的復(fù)合物,主要的生理活性包括抗腫瘤、抗氧化、清除自由基、調(diào)節(jié)心血管的作用,有著較強(qiáng)的抗菌、抗病毒、抗輻射的作用。茶多酚內(nèi)的主要成分是兒茶素類,其中EGCG是含量最高的有效成分,也是最強(qiáng)的抗氧化作用成分,在體內(nèi)外均能夠有效的清除一氧化氮、自由基等,以此提高了大鼠體內(nèi)的超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽類過(guò)氧化物酶的活性,從而降低了脂質(zhì)過(guò)氧化及脂褐質(zhì)的含量,并通過(guò)和金屬離子的絡(luò)合發(fā)揮了其較強(qiáng)的抗氧化的活性。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[6],EGCG能夠通過(guò)對(duì)腎損害的大鼠體內(nèi)的氧自由基的清除作用來(lái)起到對(duì)脂質(zhì)的過(guò)氧化作用的抑制,同時(shí)也起到了促纖溶、抗凝的作用,改善了腎局部的血流動(dòng)力,從而使尿素氮降低,延緩了腎臟的病理進(jìn)行性的損害。

綜上所述,本文通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法分析了EGCG對(duì)大鼠的神纖維化的保護(hù)作用和機(jī)制可以看出,EGCG在大鼠動(dòng)物試驗(yàn)中可見(jiàn)EGCG對(duì)大鼠腎臟纖維化形成抑制作用明顯,能夠有效的降低TGF-β的表達(dá)。

[1]徐志泉,易著文,何小解.沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)大鼠腎衰的治療研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(16）:247l.

[2]Forino M,Toregrossa R,CeolM,et al.TGF-betal induces epithelia-mesenchymal transition,but not myofibr oblast transdifftrntiation of human kidney tubularep ithelial cells in primary culture[J].Int J Exp Pathol,2006,87(3）:197.

[3]何小解,易著文,盧向陽(yáng),等.兒茶素對(duì)腎病綜合征大鼠療效研究[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2002,11(4）:342.

[4]馮江超,邵志成,龔雨順,等,沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及機(jī)制探討[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,24(6）:523.

[5]廖 明,李 彥,舒 偉,等.雞尾酒療法對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞的增殖及Ⅰ型膠原、TI MP-1mRNA表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志,2010,18(9）:932.

[6]Inagaki Y,Higashi K,Kushida M,et al.Hepatocyte growth factor suppresses profibrogenicsignal transduction via nuclearexport of Smad3with galectin-7[J].Gastroenterology,2008,134:1180.