趙富周，楊鯤鵬，龐志剛，張 典，谷 博

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科鄭州450014

(2011-01-07收稿 責(zé)任編輯 徐春燕)

食管癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，早期即可發(fā)生淋巴管轉(zhuǎn)移［1］。迄今為止，關(guān)于食管癌淋巴管的生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚不十分清楚。缺氧是不同來源的實體腫瘤的常見現(xiàn)象，缺氧環(huán)境下腫瘤細(xì)胞可通過缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor，HIF)提高其對缺氧的耐受性并刺激下游基因血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表達(dá)，從而促進(jìn)血管淋巴管的生成;趨化因子受體(chemokine receptor，CCR)與其配體結(jié)合可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，腫瘤血管、淋巴管的生成以及腫瘤細(xì)胞定向遷移［2-4］。作者應(yīng)用免疫組化法檢測了食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織及癌旁正常食管黏膜組織中HIF-1α、CCR7及VEGF-C的表達(dá)，探討3者與ESCC侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 45例ESCC標(biāo)本均為鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院手術(shù)切除且經(jīng)病理證實。45例患者中男24例，女21例;年齡41～73歲，中位年齡58.3歲。腫瘤直徑＜3 cm 23例，≥3 cm 22例;高、中分化24例，低分化和未分化21例;病理分期:Ⅰ、Ⅱ期14例，Ⅲ、Ⅳ期31例;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。每例標(biāo)本均同時取癌旁正常食管黏膜組織作為對照。

1.2 2種組織中 HIF-1α、CCR7和 VEGF-C 蛋白的檢測 采用免疫組化SP法。鼠抗人HIF-1α單克隆抗體購自BD公司，羊抗人CCR7多克隆抗體購自Santa Cruz公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。切片常規(guī)脫蠟，微波抗原修復(fù)，HIF-1α抗體和CCR7抗體按1-100稀釋，VEGF-C抗體按1-200稀釋，操作按試劑盒說明進(jìn)行。用已知的ESCC陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 ①HIF-1α和 CCR7:參照 Zhong等［5］的方法，HIF-1α 以胞質(zhì)和(或)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。CCR7以胞質(zhì)和(或)胞膜中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。先按整張切片中陽性細(xì)胞百分比評分，陽性細(xì)胞百分比為0%、1% ～ 、5% ～、25% ～及75% ～100%分別計為0、1、2、3和4分。再按整張切片中細(xì)胞染色深度評分，無色、淺黃色、棕褐色分別計為0、1、2分。2項評分相乘，積分 ＜4分判為陰性，≥4分判為陽性。②VEGF-C:以胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。每張切片于高倍鏡下選取5個視野，每個視野計數(shù)200個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分比，＜20%為陰性，≥20%為陽性［6］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 10.0進(jìn)行分析。應(yīng)用配對χ2檢驗比較2種組織中3種蛋白表達(dá)的差異，應(yīng)用χ2檢驗分析ESCC組織中3種蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，采用列聯(lián)系數(shù)分析ESCC組織中3指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 2種組織中 HIF-1α、CCR7和 VEGF-C 蛋白的表達(dá) 見圖1，表1～3。ESCC組織中 HIF-1α、CCR7及VEGF-C蛋白的陽性表達(dá)率分別為55.6%、71.1%和64.4%，高于癌旁正常食管黏膜組織的11.1%、17.8%和 35.6%。

圖1 癌旁正常食管黏膜(A)和ESCC(B)組織中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表達(dá)(SP，×400)1:HIF-1α蛋白;2:CCR7蛋白;3:VEGF-C蛋白。

2.2 ESCC 組織中 HIF-1α、CCR7 和 VEGF-C 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表4。

2.3 ESCC 組織中 HIF-1α、CCR7 和 VEGF-C 蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 見表5。

表1 2種組織中HIF-1α蛋白的表達(dá) 例

表2 2種組織中CCR7蛋白的表達(dá) 例

表3 2種組織中VEGF-C蛋白的表達(dá) 例

表4 不同人口學(xué)與臨床病理特征的ESCC組織中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表達(dá)比較

續(xù)表4

表5 ESCC組織中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 例

3 討論

侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的生物學(xué)特征之一，是腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤細(xì)胞通過誘導(dǎo)HIF的合成來適應(yīng)缺氧。CCR7是CC類趨化因子受體的成員之一，研究［7］證實CCR7在多種不同類型的腫瘤組織中有表達(dá)，并且CCR7與其配體相互作用與這些腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有學(xué)者［8］發(fā)現(xiàn)，胃癌細(xì)胞產(chǎn)生的VEGF-C可誘導(dǎo)腫瘤淋巴管增生和擴(kuò)大。動物模型［9］也證實VEGF-C參與腫瘤淋巴管生成的重要環(huán)節(jié)。在許多人類腫瘤中，腫瘤細(xì)胞可以通過表達(dá)VEGF-C誘導(dǎo)淋巴管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移［10］。

該結(jié)果證實，與癌旁正常食管黏膜組織相比，ESCC組織中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表達(dá)明顯增高，且ESCC組織中HIF-1α、CCR7和VEGFC蛋白的表達(dá)與腫瘤病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，而與性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)。關(guān)聯(lián)性分析的結(jié)果顯示ESCC組織中CCR7和HIF-1α蛋白的表達(dá)及CCR7和VEGF-C蛋白的表達(dá)有關(guān)聯(lián)性，說明3者在腫瘤淋巴管的形成及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移中可能有協(xié)同作用。

總之，HIF-1α、CCR7和 VEGF-C蛋白在 ESCC組織中高表達(dá)，調(diào)控ESCC的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，它們可能成為新的預(yù)測ESCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)和淋巴轉(zhuǎn)移途徑干預(yù)治療的靶點。

［1］ Rubbia-Brandt L，Terris B，Giostra E，et al.Lymphatic vessel density and vascular endothelial growth factor-C expression correlate with malignant behavior in human pancreatic endocrine tumors［J］.Clin Cancer Res，2004，10(20):6919

［2］趙華鋒，于振濤，齊大亮，等.缺氧誘導(dǎo)因子在食管鱗癌中的表達(dá)研究［J］.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，14(1):90

［3］ Brand S，Dambacher J，Beigel F，et al.CXCR4 and CXCL12 are inversely expressed in colorectal cancer cells and modulate cancer cell migration，invasion and MMP29 activation［J］.Exp Cell Res，2005，310(1):117

［4］ Matsumoto M，Natsugoe S，Okumura H，et al.Overexpression of vascular endothelial growth factor-C correlates with lymph node micrometastasis in submucosal esophageal cancer［J］.JGastrointest Surg，2006，10(7):1016

［5］ Zhong H，De Matzo AM，Laughner E，et al.Overexpression of hypoxia-inducible factor l alpha in common human cancers and their metastases［J］.Cancer Res，1999，59(22):5830

［6］師秀琴，徐嵩齡，李醒亞.新輔助化療對食管鱗狀細(xì)胞癌組織中趨化因子受體-7和血管內(nèi)皮生長因子-C表達(dá)的影響［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2009，44(4):706

［7］ Muller A，Homey B，Soto H，et al.Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis［J］.Nature，2001，410(6824):50

［8］龍志強(qiáng)，李簡.食管鱗癌患者組織和血清中VEGF-C的表達(dá)［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2006，41(2):362

［9］ Paavonen K，Puolakkainen P，Jussila L，et al.Vascular endothelial growth factor receptor-3 in lymphangiogenesis in wound healing［J］.Am JPathol，2000，156(5):1499

［10］李中信，賈漪濤，崔宏偉，等.大腸癌VEGF-C、Flt-4表達(dá)在淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的意義［J］.中國腫瘤臨床，2004，31(6):319