紫外分光光度法測定破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)坪?/h1>
2011-09-25 09:30陳冠州梁慧敏謝意珍
微生物學(xué)雜志 2011年1期
陳冠州，梁慧敏，謝意珍
( 1.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州510663 ; 2.廣東省微生物研究所廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實驗室，廣東廣州510070 )
紫外分光光度法測定破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)坪?/p>
陳冠州1，梁慧敏1，謝意珍2*
( 1.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州510663 ; 2.廣東省微生物研究所廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實驗室，廣東廣州510070 )
確定一種破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)谱贤夥止夤舛葴y定方法。采用紫外分光光度法，以熊果酸為對照品測定樣品。溶液在波長548 nm處具有最大吸光度，熊果酸含量在14～54 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r為0.9994，平均回收率為92.94%。提示使用上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出樣品中三萜類化合物的含量。測定方法操作簡便、檢驗快速、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好，可以用于靈芝孢子粉產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
靈芝孢子粉;總?cè)?熊果酸;紫外分光光度法
靈芝孢子是靈芝在生長成熟期從菌蓋背面彈射出來的孢子，為靈芝的生殖細胞，其藥用價值正日益受到重視，并已制成多種保健食品。靈芝孢子的化學(xué)成分包括以下幾類:蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、維生素類、胡蘿卜素、甾醇類、三萜類、生物堿類、脂肪酸類、內(nèi)酯和無機離子類等［1］。三萜類化合物是靈芝的主要有效成分之一，具有廣泛的生理活性，已成為除靈芝多糖外控制靈芝產(chǎn)品質(zhì)量的重要參數(shù)。靈芝孢子粉中的三萜類化合物包括:靈芝孢子酸A(Ganosporeic acid A)、靈芝酸A、B、C、E、γ、δ、ε、ζ和θ(Ganoderic acid A、B、C、E、γ、δ、ε、ζ、θ)、GanoderiolF、Ganodermanontriol、Ganodermanondiol、Lucidumol A、Lucidumol B、Lucidenic acid SP1等。五環(huán)三萜內(nèi)酯類有赤芝孢子內(nèi)酯A和B(Ganosporelactone A，B)［1］。在實際生產(chǎn)的質(zhì)量監(jiān)控中，需要測定方法簡便、快速、靈敏、重復(fù)性好。三萜類化合物在無水條件下，與強酸(硫酸、磷酸、高氯酸)作用會產(chǎn)生顏色變化或熒光。其中Libermann-Burchard反應(yīng)，即醋酐-濃硫酸反應(yīng):將樣品溶解于醋酐中，加濃硫酸-醋酐，能產(chǎn)生顏色變化，一般由黃色轉(zhuǎn)為紅色、紫色或綠色，而三萜皂苷只能轉(zhuǎn)變?yōu)榧t、紫或藍色，不出現(xiàn)綠色［2］。根據(jù)這一反應(yīng)可對靈芝的三萜和皂苷進行比色法測定。本文采用香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的比色方法，以熊果酸為對照品對破壁靈芝孢子粉提取物的總?cè)瞥煞诌M行測定;并比較水浴反應(yīng)溫度、顯色劑的用量、測定波長等條件，選出最佳條件參數(shù)，還對測定方法的線性關(guān)系、穩(wěn)定性、回收率等方面進行驗證。確定一種應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)上的科學(xué)、穩(wěn)定、快速檢驗靈芝孢子粉產(chǎn)品中的總?cè)祁惡康姆椒ā?/p>
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 樣品與試劑熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品，Sigma-Aldrich公司，含量97%;高氯酸、冰醋酸、香草醛、三氯甲烷、乙酸乙酯均為分析純;破壁靈芝孢子粉提取物，廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司。
1.1.2 主要儀器與設(shè)備WFZ UV-2100紫外可見分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;DKS22型水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備有限公司; AS10200ADT型超聲波清洗器，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品15.0 mg，用乙酸乙酯定容于100 mL容量瓶中，即得0.146 mg/mL熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
1.2.2 樣品溶液的制備準(zhǔn)確稱取破壁靈芝孢子粉提取物0.5 g，加入三氯甲烷50 mL，攪拌均勻后超聲波(50℃、45 kHz)處理1 h，然后冷卻后過濾，除去殘渣，提取液定容至50 mL，即得樣品溶液。
1.2.3 分析方法取0.3 mL提取液于60℃水浴蒸干。然后加入0.40 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，在60℃水浴加熱15 min并移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰乙酸，搖勻后置于室溫。15 min后在一定波長下測定樣品溶液的吸光度。
2 結(jié)果與分析
2.1 測定波長的選擇
取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 3份，水浴加熱蒸干溶劑，分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.4 mL和高氯酸1.0 mL，于60℃水浴加熱15 min后移入冰水浴中，再加入冰乙酸5.0 mL，搖勻后置于室溫。據(jù)王江海等［3］報道可在548 nm處測定，所以選取15 min后用分光光度計于540、542、544、546、548、550、552 nm不同波長下測定樣品溶液的吸光度，根據(jù)吸光度大小選擇測定的波長。測定結(jié)果顯示，在548 nm波長下吸光度值最大，因此選擇548 nm為測定波長，見圖1。
圖1 不同波長的測定結(jié)果Fig.1The detection result of different wavelength
2.2 顯示劑使用條件選擇
2.2.1 5%香草醛-冰乙酸用量考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 6份，水浴蒸干后分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，然后再分別加入高氯酸1.0 mL，置于60℃水浴中加熱15 min后移入冰水浴中加入5 mL冰醋酸，搖勻后置于室溫下，15 min后用分光光度計在548 nm測定其吸光度，見圖2。
2.2.2 高氯酸用量考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 6份，水浴蒸干后分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.4 mL，再分別加入高氯酸0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置于60℃水浴中加熱15 min后移入冰水浴中加入5.0 mL冰醋酸，搖勻后置于室溫下，15 min后用分光光度計在548 nm測定其吸光度，見圖3。
圖2 不同香草醛-冰乙酸用量的測定結(jié)果Fig.2Results of different dosage of vanillin-glacial acetic acid
圖3 不同高氯酸用量Fig.3Different dosages of perchloric acid
2.2.3 水浴溫度的考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 5份，按上述的優(yōu)選結(jié)果水浴15 min，其溫度在40、50、60、70、80℃，同時做空白對照，觀察在不同水浴溫度時吸光度以及在這個水浴溫度時空白顏色是否變化，見圖4。結(jié)果表明:在其他條件恒定時，隨著5%香草醛-冰乙酸用量的增加，吸光度值增大，到0.4 mL出現(xiàn)最大值，之后隨著5%香草醛-冰乙酸用量的增加吸光度值開始下降。因此，0.4 mL為5%香草醛-冰乙酸溶液最佳用量。在其他條件恒定時，隨著高氯酸用量的增加，吸光度相應(yīng)增大，至1.0吸光度最大，因此選擇1.0 mL為高氯酸最佳用量。在其他條件恒定時，隨著溫度的升高，吸光度相應(yīng)增大，但水浴溫度超過60℃時，空白液顏色開始變化，顏色有些淡褐色。因此，選擇60℃為水浴溫度。
圖4 不同水浴溫度Fig.4Different temperature of waterbath
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，按上述優(yōu)選條件及步驟在548 nm處測定吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，熊果酸的毫克數(shù)為縱坐標(biāo)，作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程，考察熊果酸在相關(guān)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系，見圖5。
圖5 熊果酸溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5Standard curve of Ursolic acid solution
以吸光度為橫坐標(biāo)，熊果酸的毫克數(shù)為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:y=0.0090x－0.0066，r=0.9994，表示吸光度與熊果酸含量在14.6～73 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.4 重復(fù)性考察
吸取樣品液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法一式3份進行測定。觀察總?cè)茰y定方法結(jié)果重現(xiàn)性，見表1。
表1 樣品中總?cè)坪糠治鼋Y(jié)果Table 1The detection result of triterpenoids in broken Ganoderma lucidum spore extract
樣品分析結(jié)果表明，2批樣品中總?cè)坪勘容^接近，約3.5%，RSD＜1.5%，結(jié)果重現(xiàn)性較好。
2.5 穩(wěn)定性考察
吸取樣品液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法，分別在0～5、5～30、30～60、60～100 min幾個時間段進行吸光度測定，觀察其穩(wěn)定性，見圖6。
圖6 吸光度的穩(wěn)定性曲線Fig.6The stable curve of the absorbance
結(jié)果表明:吸光度在0～5 min內(nèi)不穩(wěn)定，RSD為2.54%，5～20 min之間較穩(wěn)定，RSD為1.01%，20～60 min穩(wěn)定性開始下降，RSD為5.08%，60～100 min穩(wěn)定性則較差，RSD為 12.13%。因此，顯色液適合在5～30 min內(nèi)測定吸光度。
2.6 回收率測試
表2 回收率測試結(jié)果Table 2Results of recovery experiments
吸取樣品液0.2 mL 3份，水浴蒸干后再分別加入熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.2 mL，同樣條件水浴蒸干，按分析方法測定其吸光度，對比標(biāo)準(zhǔn)曲線計算三萜回收率，見表2。平均回收率為92.94%，RSD為0.37%。
3 討論
本實驗驗證破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)坪繙y定方法的科學(xué)性與穩(wěn)定性，選用了熊果酸為對照品，5%香草醛-冰乙酸和高氯酸為顯色劑，60℃水浴15 min，548 nm為測定波長。
目前國內(nèi)仍未形成國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的檢驗方法來測定靈芝孢子粉產(chǎn)品中的三萜類化合物，也無靈芝酸標(biāo)準(zhǔn)品的供應(yīng)。熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)，這種采用五環(huán)三萜類熊果酸為對照品，香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的比色測定方法簡便可靠，可以用于靈芝孢子粉產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
［1］林志彬，王鵬云.靈芝孢子及其活性成分的藥理研究［J］.北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2006，5(38):541-547.
［2］姚新生.天然藥物化學(xué)(第3版)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:73-74.
［3］王江海，袁建平，徐世平，等.薄層色譜—光度法測定靈芝孢子油中的總?cè)坪浚跩］.中國食品學(xué)報，2004，4(3):76-78.
Quantification of Triterpenoids Acids in Broken Ganoderma lucidum Spore Extract by Ultraviolet Spectrometry
CHEN Guan-zhou1，LIANG Hui-min1，XIE Yi-zhen2
(1.Yuewei Edible Fungi Technol.Co.Ltd.，Guangzhou 510663; 2.Guangdong Inst.of Microbiol.，Guangdong Prov.Key Lab.of Microbial Culture Coll.＆Appl.，Guangdong Open Lab.of Applied Microbiol.，Guangzhou 510070)
A UV spectrometry method to test triterpenoids in wall-broken Ganoderma lucidum(Gl)spore powder extract was established.The sample was assayed with ursolic acid by UV spectrometry.The concentration of ursolic acid has a maximum absorbance at 548 nm by UV spectrometry，and it is correlated properly to its optical density at 548 nm in the range of 14～54 μg with a relativity coefficient of 0.9994.The average recovery was 92.94%showing that the content of triterpenoids in wall-broken Gl extract could be counted according to the standard curve by the method.This method that was proved to be easy，rapid，also had the advantages of stableness and repeatability，it should be used for monitoring the quality of Gl spore powder products.
Ganoderma lucidum spore powder;quantification of triterpenoids;ursolic acid;UV spectrometry
Q93－33
B
1005－7021(2011)01－0091－04
廣州開發(fā)區(qū)經(jīng)濟發(fā)展和科技局重點科技攻關(guān)計劃項目(2009Q-P143)
陳冠州男，助理工程師。主要從事食藥用菌及其產(chǎn)品的研究與開發(fā)。Tel:020-32079666，E-mail:kcirchan@gmail.com
*通訊作者。Tel:020-87685538，E-mail:xieyizhen@126.com
2010-12-17;
2011-01-20
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陳冠州，梁慧敏，謝意珍
( 1.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州510663 ; 2.廣東省微生物研究所廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實驗室，廣東廣州510070 )
紫外分光光度法測定破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)坪?/p>
陳冠州1，梁慧敏1，謝意珍2*
( 1.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州510663 ; 2.廣東省微生物研究所廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實驗室，廣東廣州510070 )
確定一種破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)谱贤夥止夤舛葴y定方法。采用紫外分光光度法，以熊果酸為對照品測定樣品。溶液在波長548 nm處具有最大吸光度，熊果酸含量在14～54 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r為0.9994，平均回收率為92.94%。提示使用上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出樣品中三萜類化合物的含量。測定方法操作簡便、檢驗快速、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好，可以用于靈芝孢子粉產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
靈芝孢子粉;總?cè)?熊果酸;紫外分光光度法
靈芝孢子是靈芝在生長成熟期從菌蓋背面彈射出來的孢子，為靈芝的生殖細胞，其藥用價值正日益受到重視，并已制成多種保健食品。靈芝孢子的化學(xué)成分包括以下幾類:蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、維生素類、胡蘿卜素、甾醇類、三萜類、生物堿類、脂肪酸類、內(nèi)酯和無機離子類等［1］。三萜類化合物是靈芝的主要有效成分之一，具有廣泛的生理活性，已成為除靈芝多糖外控制靈芝產(chǎn)品質(zhì)量的重要參數(shù)。靈芝孢子粉中的三萜類化合物包括:靈芝孢子酸A(Ganosporeic acid A)、靈芝酸A、B、C、E、γ、δ、ε、ζ和θ(Ganoderic acid A、B、C、E、γ、δ、ε、ζ、θ)、GanoderiolF、Ganodermanontriol、Ganodermanondiol、Lucidumol A、Lucidumol B、Lucidenic acid SP1等。五環(huán)三萜內(nèi)酯類有赤芝孢子內(nèi)酯A和B(Ganosporelactone A，B)［1］。在實際生產(chǎn)的質(zhì)量監(jiān)控中，需要測定方法簡便、快速、靈敏、重復(fù)性好。三萜類化合物在無水條件下，與強酸(硫酸、磷酸、高氯酸)作用會產(chǎn)生顏色變化或熒光。其中Libermann-Burchard反應(yīng)，即醋酐-濃硫酸反應(yīng):將樣品溶解于醋酐中，加濃硫酸-醋酐，能產(chǎn)生顏色變化，一般由黃色轉(zhuǎn)為紅色、紫色或綠色，而三萜皂苷只能轉(zhuǎn)變?yōu)榧t、紫或藍色，不出現(xiàn)綠色［2］。根據(jù)這一反應(yīng)可對靈芝的三萜和皂苷進行比色法測定。本文采用香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的比色方法，以熊果酸為對照品對破壁靈芝孢子粉提取物的總?cè)瞥煞诌M行測定;并比較水浴反應(yīng)溫度、顯色劑的用量、測定波長等條件，選出最佳條件參數(shù)，還對測定方法的線性關(guān)系、穩(wěn)定性、回收率等方面進行驗證。確定一種應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)上的科學(xué)、穩(wěn)定、快速檢驗靈芝孢子粉產(chǎn)品中的總?cè)祁惡康姆椒ā?/p>
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 樣品與試劑熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品，Sigma-Aldrich公司，含量97%;高氯酸、冰醋酸、香草醛、三氯甲烷、乙酸乙酯均為分析純;破壁靈芝孢子粉提取物，廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司。
1.1.2 主要儀器與設(shè)備WFZ UV-2100紫外可見分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;DKS22型水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備有限公司; AS10200ADT型超聲波清洗器，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品15.0 mg，用乙酸乙酯定容于100 mL容量瓶中，即得0.146 mg/mL熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
1.2.2 樣品溶液的制備準(zhǔn)確稱取破壁靈芝孢子粉提取物0.5 g，加入三氯甲烷50 mL，攪拌均勻后超聲波(50℃、45 kHz)處理1 h，然后冷卻后過濾，除去殘渣，提取液定容至50 mL，即得樣品溶液。
1.2.3 分析方法取0.3 mL提取液于60℃水浴蒸干。然后加入0.40 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，在60℃水浴加熱15 min并移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰乙酸，搖勻后置于室溫。15 min后在一定波長下測定樣品溶液的吸光度。
2 結(jié)果與分析
2.1 測定波長的選擇
取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 3份，水浴加熱蒸干溶劑，分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.4 mL和高氯酸1.0 mL，于60℃水浴加熱15 min后移入冰水浴中，再加入冰乙酸5.0 mL，搖勻后置于室溫。據(jù)王江海等［3］報道可在548 nm處測定，所以選取15 min后用分光光度計于540、542、544、546、548、550、552 nm不同波長下測定樣品溶液的吸光度，根據(jù)吸光度大小選擇測定的波長。測定結(jié)果顯示，在548 nm波長下吸光度值最大，因此選擇548 nm為測定波長，見圖1。
圖1 不同波長的測定結(jié)果Fig.1The detection result of different wavelength
2.2 顯示劑使用條件選擇
2.2.1 5%香草醛-冰乙酸用量考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 6份，水浴蒸干后分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，然后再分別加入高氯酸1.0 mL，置于60℃水浴中加熱15 min后移入冰水浴中加入5 mL冰醋酸，搖勻后置于室溫下，15 min后用分光光度計在548 nm測定其吸光度，見圖2。
2.2.2 高氯酸用量考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 6份，水浴蒸干后分別加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.4 mL，再分別加入高氯酸0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置于60℃水浴中加熱15 min后移入冰水浴中加入5.0 mL冰醋酸，搖勻后置于室溫下，15 min后用分光光度計在548 nm測定其吸光度，見圖3。
圖2 不同香草醛-冰乙酸用量的測定結(jié)果Fig.2Results of different dosage of vanillin-glacial acetic acid
圖3 不同高氯酸用量Fig.3Different dosages of perchloric acid
2.2.3 水浴溫度的考察精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.3 mL 5份，按上述的優(yōu)選結(jié)果水浴15 min，其溫度在40、50、60、70、80℃，同時做空白對照，觀察在不同水浴溫度時吸光度以及在這個水浴溫度時空白顏色是否變化，見圖4。結(jié)果表明:在其他條件恒定時，隨著5%香草醛-冰乙酸用量的增加，吸光度值增大，到0.4 mL出現(xiàn)最大值，之后隨著5%香草醛-冰乙酸用量的增加吸光度值開始下降。因此，0.4 mL為5%香草醛-冰乙酸溶液最佳用量。在其他條件恒定時，隨著高氯酸用量的增加，吸光度相應(yīng)增大，至1.0吸光度最大，因此選擇1.0 mL為高氯酸最佳用量。在其他條件恒定時，隨著溫度的升高，吸光度相應(yīng)增大，但水浴溫度超過60℃時，空白液顏色開始變化，顏色有些淡褐色。因此，選擇60℃為水浴溫度。
圖4 不同水浴溫度Fig.4Different temperature of waterbath
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，按上述優(yōu)選條件及步驟在548 nm處測定吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，熊果酸的毫克數(shù)為縱坐標(biāo)，作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程，考察熊果酸在相關(guān)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系，見圖5。
圖5 熊果酸溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5Standard curve of Ursolic acid solution
以吸光度為橫坐標(biāo)，熊果酸的毫克數(shù)為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:y=0.0090x－0.0066，r=0.9994，表示吸光度與熊果酸含量在14.6～73 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.4 重復(fù)性考察
吸取樣品液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法一式3份進行測定。觀察總?cè)茰y定方法結(jié)果重現(xiàn)性，見表1。
表1 樣品中總?cè)坪糠治鼋Y(jié)果Table 1The detection result of triterpenoids in broken Ganoderma lucidum spore extract
樣品分析結(jié)果表明，2批樣品中總?cè)坪勘容^接近，約3.5%，RSD＜1.5%，結(jié)果重現(xiàn)性較好。
2.5 穩(wěn)定性考察
吸取樣品液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法，分別在0～5、5～30、30～60、60～100 min幾個時間段進行吸光度測定，觀察其穩(wěn)定性，見圖6。
圖6 吸光度的穩(wěn)定性曲線Fig.6The stable curve of the absorbance
結(jié)果表明:吸光度在0～5 min內(nèi)不穩(wěn)定，RSD為2.54%，5～20 min之間較穩(wěn)定，RSD為1.01%，20～60 min穩(wěn)定性開始下降，RSD為5.08%，60～100 min穩(wěn)定性則較差，RSD為 12.13%。因此，顯色液適合在5～30 min內(nèi)測定吸光度。
2.6 回收率測試
表2 回收率測試結(jié)果Table 2Results of recovery experiments
吸取樣品液0.2 mL 3份，水浴蒸干后再分別加入熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照溶液0.2 mL，同樣條件水浴蒸干，按分析方法測定其吸光度，對比標(biāo)準(zhǔn)曲線計算三萜回收率，見表2。平均回收率為92.94%，RSD為0.37%。
3 討論
本實驗驗證破壁靈芝孢子粉提取物總?cè)坪繙y定方法的科學(xué)性與穩(wěn)定性，選用了熊果酸為對照品，5%香草醛-冰乙酸和高氯酸為顯色劑，60℃水浴15 min，548 nm為測定波長。
目前國內(nèi)仍未形成國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的檢驗方法來測定靈芝孢子粉產(chǎn)品中的三萜類化合物，也無靈芝酸標(biāo)準(zhǔn)品的供應(yīng)。熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)，這種采用五環(huán)三萜類熊果酸為對照品，香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的比色測定方法簡便可靠，可以用于靈芝孢子粉產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
［1］林志彬，王鵬云.靈芝孢子及其活性成分的藥理研究［J］.北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2006，5(38):541-547.
［2］姚新生.天然藥物化學(xué)(第3版)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:73-74.
［3］王江海，袁建平，徐世平，等.薄層色譜—光度法測定靈芝孢子油中的總?cè)坪浚跩］.中國食品學(xué)報，2004，4(3):76-78.
Quantification of Triterpenoids Acids in Broken Ganoderma lucidum Spore Extract by Ultraviolet Spectrometry
CHEN Guan-zhou1，LIANG Hui-min1，XIE Yi-zhen2
(1.Yuewei Edible Fungi Technol.Co.Ltd.，Guangzhou 510663; 2.Guangdong Inst.of Microbiol.，Guangdong Prov.Key Lab.of Microbial Culture Coll.＆Appl.，Guangdong Open Lab.of Applied Microbiol.，Guangzhou 510070)
A UV spectrometry method to test triterpenoids in wall-broken Ganoderma lucidum(Gl)spore powder extract was established.The sample was assayed with ursolic acid by UV spectrometry.The concentration of ursolic acid has a maximum absorbance at 548 nm by UV spectrometry，and it is correlated properly to its optical density at 548 nm in the range of 14～54 μg with a relativity coefficient of 0.9994.The average recovery was 92.94%showing that the content of triterpenoids in wall-broken Gl extract could be counted according to the standard curve by the method.This method that was proved to be easy，rapid，also had the advantages of stableness and repeatability，it should be used for monitoring the quality of Gl spore powder products.
Ganoderma lucidum spore powder;quantification of triterpenoids;ursolic acid;UV spectrometry
Q93－33
B
1005－7021(2011)01－0091－04
廣州開發(fā)區(qū)經(jīng)濟發(fā)展和科技局重點科技攻關(guān)計劃項目(2009Q-P143)
陳冠州男，助理工程師。主要從事食藥用菌及其產(chǎn)品的研究與開發(fā)。Tel:020-32079666，E-mail:kcirchan@gmail.com
*通訊作者。Tel:020-87685538，E-mail:xieyizhen@126.com
2010-12-17;
2011-01-20
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