趙 珉，郭 靖，張紅巖，韓大慶，周 丹，張楠楠

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春 130021;2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130021)

正交試驗(yàn)優(yōu)選舒欣膠囊中丹參酮ⅡA提取工藝

趙 珉1，郭 靖1，張紅巖2，韓大慶2，周 丹2，張楠楠1

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春 130021;2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130021)

目的:優(yōu)選舒欣膠囊中丹參酮ⅡA的提取工藝。方法:以丹參酮ⅡA的含量為指標(biāo)，以醇濃度、加醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，采用正交試驗(yàn)法，篩選處方中丹參的醇提取最佳工藝。結(jié)果:丹參用90%乙醇回流提取2次，每次加醇7倍量，提取1.5 h。結(jié)論:該工藝合理、可行，可為舒欣膠囊進(jìn)一步的工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

舒欣膠囊;正交試驗(yàn);提取工藝;丹參酮ⅡA

舒心膠囊由黃芪、丹參、沒藥、血竭等藥物組成，將益氣、養(yǎng)陰與活血、化瘀相結(jié)合，是標(biāo)本兼治，虛實(shí)兼理的有效方劑。本實(shí)驗(yàn)以舒欣膠囊的提取工藝為研究對(duì)象，重點(diǎn)在于確定膠囊的提取工藝路線，利用正交試驗(yàn)方法，以最少的試驗(yàn)次數(shù)，找到最佳的提取工藝條件，確定工藝參數(shù)，并建立相應(yīng)的含量測(cè)定方法，為該藥的開發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

島津LC-10AT高效液相色譜儀(島津);島津SPD-10Avp檢測(cè)器;N2000色譜工作站;電子分析天平(德國(guó)賽多利斯，1/100000);恒溫水浴鍋(HH-2型，國(guó)華);超聲波清洗器(DS-7510DTH)。

丹參酮ⅡA對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110766-200518，供含量測(cè)定用);甲醇、乙腈為色譜純;其余試劑均為分析純。丹參、黃芪、沒藥、血竭等藥材購(gòu)自(吉林長(zhǎng)春宏檢藥材經(jīng)銷公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平表設(shè)計(jì) 采用L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)，選擇影響丹參醇提取工藝中的4個(gè)主要因素:A(醇濃度)、B(加醇量)、C(提取時(shí)間)、D(提取次數(shù)) ，每個(gè)因素3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)，見表1。

表1 因素水平表

2.2 試驗(yàn)方法 按L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表設(shè)計(jì)方案，取丹參藥材9分，每分50 g，按正交表所設(shè)計(jì)方案提取，提取液合并，濾過，減壓回收乙醇并轉(zhuǎn)移至500 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，供含量測(cè)定用。

2.3 含量測(cè)定 對(duì)照品溶液制備:精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品10 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含丹參酮ⅡA 16μg)。

供試品溶液制備:精密吸取樣品溶液2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，加95%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，供含量測(cè)定用。

測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。計(jì)算正交表每組實(shí)驗(yàn)中所提取的丹參酮ⅡA的含量。

色譜條件:色譜柱:Agilent Z orbax SB-C18(4.6×150 mm);流動(dòng)相 :甲醇 - 水(75∶25);波長(zhǎng) :270 nm;流速:1 mL/min;柱溫:250℃;進(jìn)樣量:對(duì)照品溶液5μL，樣品溶液5μL。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果 見表2。

2.5 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

2.5.1 直觀分析 結(jié)果表明，各因素極差值的高低影響丹參乙醇提取工藝因素大小順序?yàn)锳＞D＞C＞B，即乙醇濃度(因素A)為主要影響因素，而提取次數(shù)(因素D)、加醇量(因素B)和提取時(shí)間(因素C)不是重要因素。從 K值看，醇濃度(因素A)各水平順序?yàn)?I1＞I2＞I3，說明3個(gè)水平中，以90%乙醇為最佳;加醇量(因素B)各水平間大小順序?yàn)镮2＞I3＞I1，說明3個(gè)水平中，以7倍量乙醇提取即可，其極差是4個(gè)因素最小的，即影響最小;提取時(shí)間(因素C)各水平之間大小順序?yàn)?I2＞I3＞I1，以 I2(1.5 h)為最高;提取次數(shù)(因素D)各水平之間大小順序?yàn)镮2＞I3＞I1，說明提取次數(shù)增加，丹參酮ⅡA含量不變，以提取2次為最佳。

表2 丹參藥材乙醇提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

2.5.2 方差分析 見表3。

表3 方差分析

2.5.3 正交試驗(yàn)結(jié)論 試驗(yàn)結(jié)果得出，丹參乙醇提取工藝最佳條件為A1B2C2D2，即藥材用90%乙醇回流提取2次，每次加醇7倍量，提取1.5 h。

2.6 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 按照篩選出的最佳組合A1B2C2D2做驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步考察優(yōu)選工藝的可靠性及穩(wěn)定性。稱取丹參藥材3分，50 g/分。按已確定的最佳提取工藝，即90%乙醇7倍量，提取2次，每次1.5 h，操作方法同前，測(cè)得丹參酮ⅡA含量分別為:0.110 1、0.112 4、0.114 6 g ，平均為 0.112 4 g。

3 討論

3.1 丹參[1]性微寒，味苦，具有活血祛瘀、養(yǎng)血安神、調(diào)經(jīng)止痛、涼血消癰的功效，對(duì)冠心病、心血管病常服療效較好，對(duì)慢性肝炎、早期肝硬化等疾病具有良好效果。就其提取方法有超聲提取、滲漉法和乙醇回流法。實(shí)驗(yàn)研究[2]證明乙醇回流提取法能提高丹參有效成分的含量，減少溶媒使用量，縮短時(shí)間，節(jié)約成本，保護(hù)資源。故本實(shí)驗(yàn)采用乙醇回流提取法。

3.2 本實(shí)驗(yàn)充分考慮了丹參酮ⅡA對(duì)熱、光敏感易分解變質(zhì)，由于其不穩(wěn)定性可能引起的差異，做了相應(yīng)的防范措施，如避光陰涼處保存，盡快測(cè)定，烘干溫度一定控制在80℃以下，常溫測(cè)量等。

3.3 其他處方中藥材與丹參藥渣采用水煎煮提取方法，以丹酚酸B為含量測(cè)定指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法，優(yōu)選加水量、提取時(shí)間及提取次數(shù)等工藝參數(shù)，從而得出舒欣膠囊最佳的水煎煮提取工藝。

[1]趙明霞.丹參藥用成分及提取工藝研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥 ，2010 ，19(3):39-40.

[2]陳紅霞，陳芳芳，顏新宇.丹參中丹參酮ⅡA 3種提取方法的比較研究[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，4(4):167-168.

R285.1

A

1007-4813(2011)03-0355-02

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):20080925)。

趙 珉(1962-)，女，副主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向:臨床藥理學(xué)研究。

2011-03-07)