摘 要： 本實驗以黃頂菊種子作為外植體，首次對黃頂菊進行了組織培養(yǎng)。采用基本MS培養(yǎng)基，升汞消毒時間為4 min，在光照培養(yǎng)箱內(nèi)采用不同溫度下的光暗培養(yǎng)。結(jié)果表明，黃頂菊種子的組織培養(yǎng)較易成功，本實驗確定了組培適合的培養(yǎng)基、消毒時間，以及培養(yǎng)條件。
　　關(guān)鍵詞： 外來入侵植物 黃頂菊 種子 組織培養(yǎng)
　　
　　黃頂菊［Flaveria bidentzs （L.） Kuntze］是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種外來雜草，原產(chǎn)南美洲，也叫“南美黃頂菊”，有的地方群眾也稱“野菊花”，為一年生草本植物，分類學(xué)上屬于菊科黃菊屬（Flaveria），與萬壽菊屬天人菊屬為近緣屬。2001年首次在天津南開大學(xué)發(fā)現(xiàn)，日前在河北邯鄲、邢臺、衡水、滄州、廊坊、石家莊、保定等地不同程度發(fā)生，呈現(xiàn)以河北省中南部為中心向周邊其他省市擴散趨勢?！包S頂菊”根系發(fā)達，耐鹽堿、耐瘠薄、抗逆性強，繁殖速度驚人，一株“黃頂菊”能產(chǎn)數(shù)萬至數(shù)十萬粒種子?！包S頂菊”能嚴重擠占其他植物的生存空間，有“黃頂菊”生長的地方，其他植物難以生存，一旦入侵農(nóng)田，將威脅農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境安全［１］－［９］。
　　黃頂菊國內(nèi)目前的研究主要集中在生理、生態(tài)、基礎(chǔ)防除方面，還有生物活性和化學(xué)成分等少量研究。黃頂菊在生存空間上占有極強的生態(tài)位，其生物成分和化學(xué)成分具有抗菌、殺蟲活性；另外對一些植物的發(fā)芽率及胚根的伸長有抑制作用，還對個別植物的胚根生長起到促進作用。從黃頂菊本身的生態(tài)特性及其提取物質(zhì)的角度考慮，能否利用其體內(nèi)的微生物，以及一些自身攜帶的物質(zhì)來對某種生產(chǎn)上嚴重的病害進行防治實驗研究，從而達到使黃頂菊變廢為寶的目的，對其加以利用。本實驗考慮到在非生長季節(jié)對黃頂菊進行更多方面的研究，避免外界環(huán)境因素對科研實驗造成影響對黃頂菊進行了室內(nèi)組織培養(yǎng)的探索。
　　1.材料與方法
　　1.1植物材料
　　黃頂菊種子，采自衡水湖碼頭。
　　1.2外植體的制備
　　將種子從植株上用雙手輕輕地揉搓下來，去掉摻雜在其中的帶有外表皮的種子，只將純凈的種子收集起來干燥環(huán)境下放置備用。
　　在無菌操作臺上用75%的酒精緝浸泡30s，0.1%的升汞消毒3.5min，4min，5min，無菌水沖洗3-4次，置于無菌培養(yǎng)皿中晾干，以此作為組織培養(yǎng)的材料［１０］。
　　1.3培養(yǎng)基的配置
　　未加任何激素的基礎(chǔ)MS培養(yǎng)基。
　　配制步驟為：MS培養(yǎng)基母液+加3%蔗糖→定容→調(diào)pH值至5.8→加0.8%瓊脂，加熱溶解→分裝20ml→封口→高壓滅菌（121℃，20min）→接種［１０］。
　　1.4接種
　　在無菌操作臺上將消毒好且晾干的種子，用無菌的鑷子夾入到滅菌好的MS培養(yǎng)基上。封口后放入光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每瓶接種5粒種子。
　　1.5培養(yǎng)
　　將接種的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)，采用29℃下12h光照培養(yǎng)，26℃下12h黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)期為30d。
　　2.結(jié)果與分析
　　2.1升汞處理時間對外植體的影響
　　培養(yǎng)結(jié)果表明，升汞的最佳處理時間不同（表1），外植體的出苗、生長狀況和污染情況都不同。其中，處理4min的結(jié)果最好，外植體污染率為0，幼苗生長較快，長勢較好。處理3.5min的外植體污染率較高，說明消毒不徹底，造成出苗率較低。處理5min的外植體出苗率很低，也無污染，說明消毒時間過長。
　　②出芽率=出芽外植體數(shù)/接種外植體數(shù)×100
　　2.2種苗的污染
　　表1統(tǒng)計的污染率為外植體處的污染率，表明50%的污染率是由于升汞消毒時間的處理不當造成的，在25天的統(tǒng)計時，出現(xiàn)了培養(yǎng)基少量青霉等真菌的污染，推斷培養(yǎng)基、實驗器材的消毒都達到標準，不是造成污染的主要原因。所產(chǎn)生的污染主要是由于操作中偶爾出現(xiàn)的不規(guī)范操作所造成的，應(yīng)該在操作中盡量嚴格規(guī)范，避免污染。
　　2.3種苗生長狀況
　　實生苗在營養(yǎng)豐富的普通MS培養(yǎng)基上長勢較好，15天左右的苗高可達0.5cm，30天的苗高可達1.5cm左右，有些可達2cm，但幼苗大部分較細弱，本實驗在后期的組培苗培養(yǎng)中將嘗試生長激素的加入，以促進苗木的增粗增長。
　　3.討論
　　組織培養(yǎng)過程中，選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基種類，激素的種類及添加量等時組培成功的關(guān)鍵。本文選擇組織培養(yǎng)用普通培養(yǎng)基MS，因為為初次對黃頂菊種子進行培養(yǎng)且考慮到激素可能對后續(xù)實驗的影響，所以本實驗沒有使用生長激素。
　　升汞的消毒時間是影響黃頂菊種子組培成功的關(guān)鍵。
　　本次實驗的造成污染的主要原因是種子消毒的不徹底，另有部分污染是由于操作過程中不規(guī)范的動作造成的。這提醒我們在組織培養(yǎng)的過程中，嚴格規(guī)范的操作程序也是影響組培苗成活及后期生長成功的關(guān)鍵因素。另外培養(yǎng)基的徹底滅菌和操作器皿的嚴格消毒也是不容忽視的因素［１１］。
　　由本實驗結(jié)果可知，黃頂菊種子的組織培養(yǎng)是比較容易成功的，這為我們在黃頂菊的非生長期內(nèi)進行科學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　
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