廖矛川，楊芳云，沙光普，葛嵐嵐，熊姝穎，陳 峰

(1 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074；2 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥用植物研究所，北京 100193 )

樟(CinamomumCamphora)是樟科樟屬，為亞熱帶常綠闊葉喬木，屬藥用植物[1].樟具有殺蟲解毒，抗血栓、動脈硬化、腫瘤、氧化衰老等作用，主治風(fēng)濕痹痛，水火燙傷，瘡瘍腫毒，疥癬皮膚瘙癢，毒蟲咬傷[2].它是工業(yè)上制造膠卷、膠片、賽璐珞的重要原料[3].臨床以樟腦配伍治療根尖周炎[4]、蟲咬皮炎[5]等.樟樹中含桉葉素、黃樟素、芳樟醇、1，8-桉葉素、α-蒎烯、莰烯等揮發(fā)油[2，6]，并含芳香性化合物、生物堿、有機酸及多糖等成分[7].

目前樟樹的研究主要集中在樟樹揮發(fā)油的各種化學(xué)成分和提取加工工藝[8，9]，對其成分研究較少.本實驗主要研究樟樹葉的非揮發(fā)性化學(xué)成分，采取柱色譜等方法，從乙酸乙酯和正丁醇萃取部位共分離得到5個化合物，通過理化性質(zhì)和波譜手段鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為(8R,8′R)-3,3′,4,4′-四甲氧基-9-氧代-8-8′,9-O-9′-木脂素(I)，槲皮素-3-Ο-α-L-鼠李糖苷(II)，山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷(III)，蘆丁(IV)，槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷(V).上述化合物均從樟樹葉中首次分離得到.

圖1 化合物I～V的結(jié)構(gòu)式

1 材料與儀器

樟樹葉采自中南民族大學(xué)校園內(nèi)，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬定榮教授鑒定為CinamomumCamphora的樹葉.

核磁共振波譜儀(TMS內(nèi)標(biāo)，德國BrukerAM-400)，中壓柱層析系統(tǒng)(HEP-50A型，武漢金帝)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52型)，高效液相色譜儀(Ultimate-3000半制備型，美國Dionex公司)，電子天平(精度0.1mg,AR2140型,上海奧豪斯儀器有限公司)，提取罐、濃縮罐(武漢市江漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司)，循環(huán)水真空泵(SHZ-III型，上海亞榮生化儀器)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(101-0AB型，天津市泰斯特)，實驗試劑為分析純(天津博迪有限公司)，硅膠(柱層析用，100-200目，青島海洋化工廠分廠)，氘代氯仿、氘代甲醇(J&K CHEMICAL LTD).

2 提取分離

干樟樹葉16.745 kg，揉碎，95%乙醇煮2次，每次2 h，再用75%乙醇煮1.5 h，減壓回收乙醇，得浸膏3.944 kg.浸膏加同質(zhì)量的蒸餾水分散12 h，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取.取乙酸乙酯浸膏50 g，溶于乙酸乙酯中，拌樣，干法裝1000 g薄層硅膠柱，干法上樣，依次用環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫，TLC檢測并合并相同餾分，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜層析得化合物I(22mg)、化合物Ⅱ(17mg).濕法裝40g聚酰胺柱，取正丁醇浸膏8 g溶于水中，濕法上樣，依次用水-乙醇梯度洗脫，收集70%醇組分后用正相硅膠依次用氯仿-甲醇梯度洗脫，TLC檢測并合并相同餾分，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜層析和高效液相色譜分離得化合物Ⅲ(37 mg)、化合物Ⅳ(18 mg)和化合物Ⅴ(8mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物I：C22H26O6，白色晶體，EI-MS(m/z)：387[M+H]+,151(芐基裂解的碎片離子峰).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：6.750(2H，t，J=15.6Hz，H-2，H-5)，6.655(2H，J=17.2Hz，H-2′，H-5′)，6.540(1H，dd，J=10Hz，H-6)，6.475(1H，d，J=2Hz，H-6′)，4.112(1H，dd，J=16Hz，H-8)，3.846(12H，s，3,3′,4,4′-OCH3)，2.936(2H，J=12.8Hz，H-9′),2.564(4H，m，H-8，H-8′)，1.573(1H，s，H-8′).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ：178.68(C-9)，149.08(C-3)，149.08(C-3′)，147.99(C-4)，147.92(C-4′)，130.47(C-1)，130.23(C-1′)，121.37(C-6)，120.59(C-6′)，112.42(C-2)，111.91(C-2′)，111.39(C-5)，111.15(C-5′)，71.23(C-9′)，55.92(CH3O-C4)，55.92(CH3O-C4′)，55.88(CH3O-C3)，55.92(CH3O-C3′)，46.58(C-8)，41.09(C-8′)，38.20(C-7′)，34.52(C-7).由1H-NMR譜知低場區(qū)有6個芳香質(zhì)子，由偶合常數(shù)知苯環(huán)上為間對位取代基.上述波譜數(shù)據(jù)與文獻[10]一致,確定化合物I為(8R,8′R)-3,3′,4,4′-四甲氧基-9-氧代-8-8′,9-O-9′-木脂素.

化合物II：C21H20O11，分子量為448，黃色粉末，EI-MS(m/z)：449[M+H]+,302(EI源中水解掉糖后生成的槲皮素苷元),301等.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：6.196(1H，s，H-6)，6.367(1H，s，H-8)，7.331(1H，s，H-2′)，7.288(1H，d，J=8Hz，H-6′)，6.914(1H，d，J=8.4Hz，H-5′)，0.922(3H，d，J=5.6Hz，H-6″)，5.317(1H，s，H-1″).13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ：157.12(C-2)，134.78(C-3)，178.23(C-4)，161.72(C-5)，98.6(C-6)，164.58(C-7)，93.49(C-8)，158.04(C-9)，104.49(C-10)，148.43(C-4′)，144.98(C-3′)，121.57(C-1′)，115.66(C-5′)，115.11(C-2′)；3-O-rhaδ：102.13(C-1″)，71.85(C-4″)，70.73(C-3″)，70.68(C-2″)，70.5(C-5″)，16.26(C-6″).由1H-NMR譜中化學(xué)位移值δ0.922(3H，d，J=5.6Hz，H-6″)可知此為鼠李糖甲基信號，C譜與槲皮素的C譜比較，C-3的化學(xué)位移向高場移動，推斷糖苷連接在C-3位.化合物2波譜數(shù)據(jù)與文獻[11,12]一致,故鑒定為槲皮素3-Ο-α-L-鼠李糖苷(Quercitin 3-Ο-α-L-rhamnoside),即槲皮苷(Quercitrin).

化合物III：C27H30O15，分子量為594，黃色晶體，MgCl2反應(yīng)呈陽性，AlCl3反應(yīng)呈黃綠色熒光，F(xiàn)AB-MS(m/z)：595[M+H]+.1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ：8.04(2H，dd，J=9.2Hz，H-2′，6′)，6.87(2H，dd，J=9.2Hz，H-3′，5′)，6.36(1H，d，J=2Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2Hz，H-6)，5.20(1H，d，J=7Hz，H-1″)，4.50(1H，d，J=1Hz，H-1?)，3.15～3.80(m，均為糖上氫原子的信號)，0.96(3H，d，J=6Hz，H-6?).13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ：157.9(C-2)，134.1(C-3)，177.9(C-4)，161.5(C-5)，98.6(C-6)，164.7(C-7)，93.6(C-8)，157.1(C-9)，104.2(C-10)，121.3(C-1′)，130.9(C-2′,6′)，114.7(C-3′,5′)，160.0(C-4′)；3-O-gluδ：103.3(C-1″)，74.4(C-2″)，76.7(C-3″)，70.9(C-4″)，75.8(C-5″)，67.1(C-6″)；6-O-rhaδ：101.0(C-1?)，70.0(C-2?)，70.6(C-3?)，72.5(C-4?)，68.3(C-5?)，16.5(C-6?).由1H-NMR可見，該化合物苷元為山奈酚，連有2個糖，糖端基出現(xiàn)在δ5.20(1H，d，J=7Hz，H-1″)和δ4.50(1H，d，J=1Hz，H-1?)，在δ0.96(3H，d，J=6Hz，H-6?)有1個甲基峰，為鼠李糖上的甲基.山奈酚3位碳信號向高場位移到δ134.1(C-3)，而2，4位則低場位移到δ157.9(C-2)和δ177.9(C-4)，說明糖連接在山奈酚的3位.對照文獻[13],鑒定化合物3為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(6→1)-α-L-鼠李糖苷.

化合物IV：C27H30O16，分子量為610，黃色粉末，MgCl2反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)呈陽性， FAB-MS(m/z)：611[M+H]+，465[M+-Rha].1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ：6.18(1H，s，J=0 Hz，H-6)，6.37(1H，s，H-8)，7.65(1H，s，H-2′)，7.61(1H，d，J=7.6Hz，H-6′)，6.85(1H，d，J=7.1Hz，H-5′)，3.15～3.80(m，均為糖上H的信號)，1.12(3H，d，J=6Hz，H-6?).13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ：157.0(C-2)，134.2(C-3)，177.9(C-4)，161.5(C-5)，98.6(C-6)，164.6(C-7)，93.5(C-8)，157.9(C-9)，104.2(C-10)，121.7(C-1′)，δ116.35(C-2′)，144.380(C-3′)，148.38(C-4′)，δ114.68(C-5′)，122.21(C-6′)；3-O-gluδ：103.4(C-1″)，74.3(C-2″)，76.8(C-3″)，70.88(C-4″)，75.78(C-5″)，67.18(C-6″)；6-O-rhaδ：101.1(C-1?)，70.0(C-2?)，70.69(C-3?)，72.5(C-4?)，68.3(C-5?)，16.5(C-6?).與文獻[14]蘆丁一致，薄層層析檢測，與已知蘆丁的Rf一致，故確定該化合物IV為蘆丁.

化合物V：C21H20O12，黃色顆粒，MgCl2反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)呈陽性，EI-MS(m/z)：465[M+H]+，302(EI源中水解掉糖后生成的槲皮素苷元)，301，273，229，153，69等.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：6.19(1H，d，J=2Hz，H-6)，6.36(1H，d，J=2Hz，H-8)，7.79(1H，d，J=2Hz，H-2′)，6.85(1H，d，J=8.2Hz，H-5′)，7.56(1H，dd，J=8.2Hz，2Hz，H-6′)，5.22(1H，d，H-1″)，3.15～3.80(m，均為糖上H的信號).13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ：156.52(C-2)，133.99(C-3)，177.86(C-4)，161.66(C-5)，99.27(C-6)，165.10(C-7)，94.04(C-8)，156.80(C-9)，104.18(C-10)，122.43(C-1′)，116.36(C-2′)，145.31(C-3′)，148.99(C-4′)，115.64(C-5′)，121.51(C-6′)；3-O-gluδ：102.91(C-1″)，71.66(C-2″)，73.65(C-3″)，68.37(C-4″)，76.28(C-5″)，60.58(C-6″).由1H-NMR譜和13C-NMR數(shù)據(jù)可辨認(rèn)為黃酮槲皮素類結(jié)構(gòu)，糖端基質(zhì)子的偶合常數(shù)可確定該苷鍵位β型；C譜中C-3的化學(xué)位移向高場移動，而C-2的化學(xué)位移向低場移動，推斷糖苷連接在C-3位.化合物V波譜數(shù)據(jù)與文獻[12]一致,故鑒定為槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷(Quercitin 3-Ο-β-D-glucoside).

[1]陶光復(fù).湖北樟屬植物資源[J].武漢植物學(xué)研究,2001,19(6):489-496.

[2]江蘇醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1979:28-31.

[3]彭鎮(zhèn)華.林網(wǎng)化與水網(wǎng)化——中國城市森林建設(shè)理念[J].中國城市林業(yè),2003,1(2):4-12.

[4]羅艷燕,余 璐.應(yīng)用碘仿樟腦糊劑治療根尖周炎的臨床療效觀察[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2012,19(4) :60-61.

[5]林利虹,楊 松.復(fù)方樟腦乳膏治療蟲咬皮炎的療效觀察[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2011,30 (23) :10.

[6]Chen Z M,Chen Y X,Du G J,et a1.Effects of 60-day N02 fumigation on growth,oxidative stress and antioxidative response inCinnamomumcamphoraseedlings[J].J Zhejiang Univ Sci B ,2010,11(3):l90-199.

[7]劉江云,楊世林,徐麗珍.樟屬植物的化學(xué)和藥理研究概況[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊,2001,23(1):7-12.

[8]Chen H,Dai G,Zhao J,et a1.Removal of copper(II) ions by a biosorbent-Cinnamomumcamphoraleaves powder[J].J Hazard Mater,2010,177(1-3):228-236.

[9]Imai S,Ogawa K.Quantitative analysis of carbon balance in the reproductive organs and leaves ofCinnamomumcamphora(L)Presl [J].J Plant Res,2009,122(4):429-437.

[10]任玉琳,楊峻山.二芐基丁內(nèi)酯型木脂素類化合物光譜規(guī)律分析[J].波譜學(xué)雜志,2002,19(1):15-24.

[11]王永剛,淡 墨,李詠華,等.猴耳環(huán)化學(xué)成分的研究[J].中藥材,2005,28(9):774-775.

[12]侯柏玲,李占林,李銑苦.馬豆根和莖中黃酮類化學(xué)成分的研究[J].實用藥物與臨床,2005,8(S1):46-47.

[13]卓 敏,呂 寒,任冰如,等.紅鳳菜化學(xué)成分研究[J].中草藥,2008,39(1):30-32.

[14]賈 陸,敬林林,周勝安,等.地桃花化學(xué)成分研究.I.黃酮類化學(xué)成分[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2009,40(9) :662-665,704.