李彩紅，李志偉，時志民，王 蕾，席 豐

(1.邯鄲市婦幼保健院 婦科，河北 邯鄲 0569002；2.邯鄲市第一醫(yī)院 檢驗科，河北 邯鄲 056002；3 河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院 病理科， 河北 邯鄲 056001)

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%，發(fā)病率僅次于子宮頸癌[1]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)是降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要因子，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在淋巴管生成及癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中起重要作用，VEGF與uPA關(guān)系研究較為少見。本研究擬用免疫組化SP方法檢測正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中uPA和VEGF表達(dá)情況，分析這兩種蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為的關(guān)系，探討它們在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及生物學(xué)行為，為臨床治療和預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材 料

選取2008年1月-2011年6月河北邯鄲市婦幼保健院婦科子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除子宮標(biāo)本60例，平均年齡52.22歲，所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前均未行放、化療及激素治療；取因子宮肌瘤或子宮脫垂而手術(shù)切除子宮的正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本32例，平均年齡48.25歲。子宮內(nèi)膜癌按2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床病理分期及組織分級:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1級36例，G2級13例，G3級11例。病灶局限于內(nèi)膜層及浸潤<1/2肌層44例，浸潤>1/2肌層16例。

1.2 試劑與方法

常規(guī)免疫組化試劑盒SP、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及鼠抗人uPA單克隆抗體和鼠抗人VEGF單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。采用SP免疫組化法，方法操作按試劑盒說明書進(jìn)行，取已知切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

uPA和VEGF陽性定位于細(xì)胞漿，以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。參照Parenti等[2]的標(biāo)準(zhǔn)，每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，3陽性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，25%～50%為(++)， >50%為(+++)。以(+～+++)均視為陽性表達(dá)，(-)視為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 12. 0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗,相互關(guān)系用等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 uPA和VEGF在正常子宮內(nèi)和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況

在32例正常的子宮內(nèi)膜中uPA無表達(dá)，60例子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)31例，表達(dá)率為51.67%(31/60)，兩者比較差異有顯著性意義(P<0.05)；32例正常的子宮內(nèi)膜中有4例VEGF表達(dá)，表達(dá)率為12.50%(4/32)，60例子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)40例，表達(dá)率為43.33%(26/60)，兩者比較差異有顯著性意義(P<0.05)。見圖1、2及表1。

圖1 uPA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)(SP×400)Fig 1 Expression of uPA in endometrial carcinoma(SP×400)

圖2 VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)(SP×400)Fig 2 Expression of VEGF in endometrial carcinoma(SP×400)

2.2 uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級、臨床病理分期、肌層浸潤深度以及淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 uPA和VEGF在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Tab1 The expression of uPA and VEGF in normal endometrium and endometrial carcinoma and correlation with clinicopathologic factor n(%)

2.3 uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，r=0.509，P=0.000。見表2。

表2 uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關(guān)性

Tab 2 The relationship between uPA and VEGF in the endometrial carcinoma

VEGF(n=26)uPA(n=31)+-+215-1024

3 討 論

尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)是一種絲氨酸蛋白水解酶，位于10號染色體的長臂上，由10個內(nèi)含子和11個外顯子構(gòu)成，成熟的mRNA長度為2.4 kb[3]，具有水解蛋白和信號傳導(dǎo)等多種功能。uPA可以將纖溶酶原激活故為纖溶酶，纖溶酶可以降解基質(zhì)和基底膜等成份，在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用[4]。另外uPA還參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生、增殖等活動[5]。有報道uPA在多種惡性腫瘤中均有過表達(dá)[6-7]，它主要是在生理、病理的條件下，參與各種細(xì)胞的分化、增殖、遷移、細(xì)胞周圍基質(zhì)降解以及組織重建等。本實驗結(jié)果顯示uPA蛋白陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞漿，在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)率較高(51.67%)，在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達(dá)，差異有顯著性意義(P<0.05)；uPA的表達(dá)與FIGO分期及組織學(xué)分級有關(guān)，隨著FIGO分期及組織學(xué)分級的增加，uPA在內(nèi)膜癌中的表達(dá)率增高；而且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度>1/2肌層的內(nèi)膜癌uPA表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度<1/2肌層者(P<0.05)，uPA的高表達(dá)可以使子宮內(nèi)膜癌中惡性細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)和基膜能力加強，誘使惡性細(xì)胞向組織深層和淋巴管中浸潤，并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究證實，uPA隨著組織學(xué)分級的升高、浸潤深度的增加而表達(dá)增加，這與王淑敏等[8]的報道一致。同時本研究還發(fā)現(xiàn)uPA的表達(dá)與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，雖與王淑敏等的研究結(jié)論存在異議，但結(jié)果都提示uPA在子宮內(nèi)膜癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。

惡性腫瘤組織在向周圍組織侵襲、向遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移時，必須同時伴隨新生血管的形成，新生血管為腫瘤的侵襲性生長提供充足的營養(yǎng)與氧氣，兩者相互促進(jìn)，相互協(xié)調(diào)，加劇了腫瘤細(xì)胞的侵襲力，使得惡性腫瘤發(fā)生更廣泛的侵襲與轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種具有肝素結(jié)合活性的生長因子，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，在腫瘤血管生成中起到非常重要的作用，對血管內(nèi)皮細(xì)胞的促有絲分裂作用十分強烈，到目前為止，VEGF被認(rèn)為是所知道的最強的直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子。本研究發(fā)現(xiàn)VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)明顯高于正常內(nèi)膜組織(P<0.05)，VEGF的表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、浸潤深度及組織學(xué)分級有關(guān)，與腫瘤的病理組織類型無關(guān)。當(dāng)腫瘤生長到一定程度時，造成局部缺氧，血管生成不足，從而刺激腫瘤細(xì)胞分泌VEGF，而促進(jìn)新生血管生成，增加血管通透性，故VEGF可以加速腫瘤的生長，促進(jìn)腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，說明VEGF在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

有研究顯示在MAPK通路中，通過對uPA的調(diào)控表達(dá)可以誘導(dǎo)VEGF在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移[9]。VEGF也可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌和激活uPA來降解基質(zhì)[10]，uPA也可以直接激活VEGF，促使VEGF的釋放[11]，從而為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和腫瘤的新生血管形成提供條件。通過二者相關(guān)性分析，本研究發(fā)現(xiàn)uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。提示uPA和VEGF在子宮內(nèi)膜癌的新生血管形成和細(xì)胞外基質(zhì)降解中是相互聯(lián)系、相互促進(jìn)的，形成正反饋調(diào)節(jié)環(huán)，為新生血管形成提供有利的微環(huán)境，uRA通過激活VEGF而誘導(dǎo)腫瘤血管的生成，同時也有利于腫瘤細(xì)胞脫落進(jìn)入脈管或向鄰近組織擴散，為腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中uPA和VEGF處于過表達(dá)狀態(tài)，與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，本研究對控制子宮內(nèi)膜癌患者的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移提供了新的治療思路和方法。

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